Polymerase chain reaction (PCR) amplifications
PCR was conducted in 20 μl volumes containing 50 ng of template
DNA, 5 × PCR buffer (Promega Corp.), 4 mM MgCl2, 100 μM each
of dATP, dCTP, GTP and dTTP, 20 ng of primer, and 1.20 units of
Taq DNA polymerase. Thermocycling conditions consisted of a
single cycle of 5 min at 94°C, 40 cycles of 1 min at 94°C and 1 min
at 72°C, and annealing temperatures varied from 35 to 60°C with 1
or 2 min. Amplified product from all PCR assays were separated on
1.5% agarose gels including ethidium bromide (0.5 μg ml-1) for 2 h
at 6 V cm-1 constant voltage in TBE buffer according to Sambrook
et al., (1989).
Polymerase chain reaction (PCR) amplificationsPCR was conducted in 20 μl volumes containing 50 ng of templateDNA, 5 × PCR buffer (Promega Corp.), 4 mM MgCl2, 100 μM eachof dATP, dCTP, GTP and dTTP, 20 ng of primer, and 1.20 units ofTaq DNA polymerase. Thermocycling conditions consisted of asingle cycle of 5 min at 94°C, 40 cycles of 1 min at 94°C and 1 minat 72°C, and annealing temperatures varied from 35 to 60°C with 1or 2 min. Amplified product from all PCR assays were separated on1.5% agarose gels including ethidium bromide (0.5 μg ml-1) for 2 hat 6 V cm-1 constant voltage in TBE buffer according to Sambrooket al., (1989).
การแปล กรุณารอสักครู่..
ปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR ) amplifications
PCR ได้ดำเนินการใน 20 μ L ปริมาณบรรจุ 50 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ
5 บัฟเฟอร์ ) × ( promega คอร์ป ) , MgCl2 4 มม. 100 μ M แต่ละ
ของ datp dctp GTP และ dttp , , , 20 ของไพรเมอร์และ 1.20 หน่วย
ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค . ผื่นแดงเงื่อนไขประกอบด้วย
รอบเดียว 5 นาทีที่ 94 ° C 40 รอบ 1 นาทีที่ 94 ° C และ 1 นาทีที่ 72 /
c ,และการอบอ่อนที่อุณหภูมิแตกต่างกัน จาก 35 ถึง 60 ° C หรือ 1
2 นาทีขยายผลิตภัณฑ์จากวิธี PCR ทั้งหมดถูกแยกออกจากกันใน
1.5% ( รวมทั้งคู่เจลโบรไมด์ ( 0.5 μกรัมแน่นอน ) 2 H
6 V cm-1 คงที่แรงดันทีบีบัฟเฟอร์ตาม sambrook
et al . , ( 1989 )
การแปล กรุณารอสักครู่..