For each pathogenic virus, an amoun

For each pathogenic virus, an amount close to the LOD (e.g., 9.3 × 102
copies for HAV; 1.2 × 104 copies for NoV GI and 1.6 × 102 for NoV GII) was
chosen to guide the inoculation tests. To assess the influence of inoculation
level, two or three inoculation levels were tested for each virus:
this base amount and an amount with 101 and/or 102 more copies.
Bottled mineral water samples (0.5 L) were spiked with 100 μL of
10-fold dilutions of pathogenic virus stocks (HAV, NoV GI or NoV GII)
in diethylpyrocarbonate (DEPC)-treated water (Life Technologies) to
obtain per-sample inoculation levels of 9.3 × 102 and 9.3 × 104 genome
copies for HAV; 1.2 × 104 and 1.2 × 106 genome copies for NoV GI and
1.6 × 102 and 1.6 × 104 genome copies for NoV GII.
Lettuce and semi-dried tomato samples (25 g) were spiked with
100 μL of 10-fold dilutions in DEPC-treated water of pathogenic virus
stocks (HAV, NoV GI or NoV GII) to obtain per-sample inoculation levels
of 9.3 × 102
, 9.3 × 103 and 9.3 × 104 genome copies for HAV; 1.2 × 104
and 1.2 × 106 genome copies for NoV GI; 1.6 × 102
, 1.6 × 103 and
1.6 × 104 genome copies of NoV GII. The contamination was carried
out by adding 100 μL of the viral inoculum distributed in small drops
evenly on the food samples (25 g, lettuce or semi-dried tomatoes) and
left to dry overnight at 4 °C to increase the number of adhering viral particles
as previously described (Fraisse et al., 2011; Stals et al., 2011a).
To determine the most appropriate process control virus to use according
to matrix type and pathogenic virus, one experiment set comprised
either 6 bottles of water or 8 solid food samples (lettuce or semidried
tomatoes) spiked with a pathogenic virus alone (HAV, NoV GI or
NoV GII); either 6 bottles of water or 8 solid food samples co-inoculated
with 109 genome copies MNV-1 as a process control; and either 6 bottles
of water or 8 solid food samples co-inoculated with 108 genome copies
Mengovirus (vMC0 strain) as a process control. For each experiment
and each matrix (bottled water, lettuce or semi-dried tomatoes), two
pathogenic virus-free samples (negative controls for the pathogenic
virus) were spiked either with MNV-1 or Mengovirus; and one unspiked
sample was used as a negative control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับแต่ละไวรัสที่ทำให้เกิดโรคในปริมาณที่ใกล้เคียงกับล็อด (เช่น 9.3 × 102
สำเนา HAV 1.2 × 104 สำเนา GI พ.ย. และ 1.6 × 102 GII พ.ย. )
ได้รับการคัดเลือกเพื่อเป็นแนวทางในการทดสอบการฉีดวัคซีน เพื่อประเมินอิทธิพลของการฉีดวัคซีนในระดับที่สองหรือสามระดับการฉีดวัคซีนได้รับการทดสอบสำหรับแต่ละไวรัส:. จำนวนฐานนี้และจำนวนเงินที่ 101 และ / หรือ 102 สำเนาตัวอย่างน้ำแร่บรรจุขวด(0.5 ลิตร) ถูกแทงด้วย 100 ไมโครลิตรของ10 พับเจือจางของหุ้นไวรัสที่ทำให้เกิดโรค (HAV, GI พ.ย. หรือ พ.ย. GII) ใน diethylpyrocarbonate (DEPC) น้ำ -treated (ไลฟ์เทคโนโลยีส์) ที่จะได้รับการฉีดวัคซีนในระดับต่อตัวอย่าง9.3 × 102 และ 9.3 × 104 จีโนมสำเนาสำหรับHAV; 1.2 × 104 และ 106 × 1.2 สำเนาจีโนมสำหรับ GI พ.ย. และ1.6 × 102 และ 104 × 1.6 สำเนาจีโนมสำหรับ พ.ย. GII. ผักกาดหอมและกึ่งแห้งตัวอย่างมะเขือเทศ (25 กรัม) ได้รับการถูกแทงด้วย100 ไมโครลิตรของเจือจาง 10 เท่าใน DEPC- น้ำประปาของเชื้อไวรัสที่ทำให้เกิดโรคหุ้น(HAV, GI พ.ย. หรือ GII พ.ย. ) เพื่อให้ได้ตัวอย่างต่อระดับการฉีดวัคซีน9.3 × 102, 103 × 9.3 และ 9.3 × 104 เล่มจีโนมสำหรับ HAV; 1.2 × 104 และ 106 × 1.2 สำเนาจีโนมสำหรับ พ.ย. GI; 1.6 × 102, 103 × 1.6 และ1.6 × 104 เล่มจีโนมของ พ.ย. GII การปนเปื้อนได้ดำเนินการโดยการเพิ่ม 100 ไมโครลิตรของเชื้อไวรัสกระจายอยู่ในหยดเล็ก ๆ อย่างสม่ำเสมอในตัวอย่างอาหาร (25 กรัมผักกาดหอมหรือมะเขือเทศกึ่งแห้ง) และทิ้งให้แห้งค้างคืนที่4 ° C ถึงเพิ่มจำนวนของการยึดมั่นในอนุภาคไวรัสตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Fraisse et al, 2011;.. Stals, et al, 2011a). การตรวจสอบไวรัสการควบคุมกระบวนการผลิตที่เหมาะสมที่สุดที่จะใช้ตามประเภทเมทริกซ์และไวรัสที่ทำให้เกิดโรคชุดการทดลองหนึ่งประกอบด้วยทั้ง6 ขวดน้ำหรือ 8 อาหารแข็ง ตัวอย่าง (ผักกาดหอมหรือ semidried มะเขือเทศ) ถูกแทงกับไวรัสที่ทำให้เกิดโรคเพียงอย่างเดียว (HAV พ.ย. GI หรือพ.ย. GII); ทั้ง 6 ขวดน้ำหรือ 8 ตัวอย่างอาหารแข็งร่วมเชื้อกับ109 สำเนาจีโนม MNV-1 การควบคุมกระบวนการ; และทั้ง 6 ขวดน้ำหรือ8 ตัวอย่างอาหารแข็งร่วมกับเชื้อ 108 เล่มจีโนมMengovirus (สายพันธุ์ vMC0) การควบคุมกระบวนการ สำหรับแต่ละการทดลองและแต่ละเมทริกซ์ (น้ำดื่มบรรจุขวด, ผักกาดหอมมะเขือเทศหรือกึ่งแห้ง) สองตัวอย่างไวรัสที่ทำให้เกิดโรคฟรี(การควบคุมเชิงลบสำหรับที่ทำให้เกิดโรคไวรัส) ถูกแทงถูกทั้งที่มี MNV-1 หรือ Mengovirus; และเป็นหนึ่งใน unspiked ตัวอย่างถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับแต่ละ เชื้อโรค ไวรัส ยอดเงินปิดไปโลด ( เช่น 10 × 102
ชุด hav ; 1.2 × 104 ชุดกีพ.ย. 11 × 102 สำหรับพ.ย. จีไอไอ ) คือ
เลือกคู่มือการสอบ เพื่อศึกษาอิทธิพลของระดับ (
2 หรือ 3 ระดับการทดสอบแต่ละไวรัส :
ฐานจำนวน และ ปริมาณ และ / หรือ มี 101 102 แผ่น .
ตัวอย่างแร่บรรจุขวดน้ำ ( 05 l ) C 100 μ l
10 เท่าของหุ้นเจือจางไวรัสเชื้อโรค ( HAV พ.ย. กี หรือ พ.ย. จีไอไอ )
ใน diethylpyrocarbonate ( depc ) - น้ำ ( เทคโนโลยี )

ขอรับต่อระดับการตัวอย่างที่ 9.3 × 102 และ 9.3 × 104 จีโนม
ชุด hav ; 1.2 × 104 และ 1.2 × 106 จีโนมชุดพ.ย. กี
1.6 × 102 และ 104 ชุดจีโนมสำหรับ 1.6 ×จีไอไอ
เพื่อ .ผักกาดหอมและมะเขือเทศกึ่งแห้ง ตัวอย่าง ( 25 กรัม ) C
100 μลิตร 10 เท่า depc เจือจางในน้ำของหุ้นไวรัส
เชื้อโรค ( HAV พ.ย. กีหรือ พ.ย. จีไอไอ ) เพื่อให้ได้กลุ่มตัวอย่างต่อเชื้อระดับ 9.3 × 102

10 × 103 และ 104 10 ×จีโนมมาให้ . . ; 1.2 × 1.2 × 106 104
จีโนมชุดพ.ย. กี ; 1.6 × 102

1.6 1.6 × 103 × 104 และจีโนมฉบับพ.ย. จีไอไอ .การกระทำ
โดยเพิ่ม 100 μ L ของเชื้อไวรัสกระจายในเล็ก
เท่ากันในตัวอย่างอาหาร ( 25 กรัม ผักกาดหอม หรือกึ่งแห้งมะเขือเทศ ) และทิ้งให้แห้งข้ามคืน
4 ° C เพื่อเพิ่มจำนวนของไวรัสที่อนุภาค
ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( แฟร็ส et al . , 2011 ; สตอลส์ et al . , 2011a ) .
หากระบวนการที่เหมาะสมที่สุดในการควบคุมไวรัสใช้ตาม
พิมพ์เมทริกซ์และไวรัสที่ก่อโรค หนึ่งชุดทดลองประกอบด้วย
6 ขวดน้ำหรือ 8 ตัวอย่างอาหาร ( ผักกาด หรือ semidried
มะเขือเทศ ) ที่ได้ถูกแทงด้วยไวรัสเชื้อโรคเพียงอย่างเดียว ( มีกี หรือ พ.ย.
พ.ย. จีไอไอ ) ; น้ำหรือ 8 ตัวอย่างอาหารทั้ง 6 ขวด Co
กับ 109 จีโนมชุด mnv-1 เชื้อเป็นขั้นตอนการควบคุม และทั้ง 6 ขวด
ของน้ำ หรือ 8 ตัวอย่างอาหาร Co จาก 108 จีโนมเล่ม
mengovirus ( vmc0 สายพันธุ์ ) เป็น กระบวนการควบคุม ในแต่ละการทดลอง
และแต่ละเมทริกซ์ ( น้ำเปล่า หรือผักกาดหอมมะเขือเทศกึ่งแห้ง ) 2
( การควบคุมโรคอย่างปลอดจากไวรัสลบไวรัสเชื้อโรค
) ถูกแทงด้วย mnv-1 หรือ mengovirus ; และหนึ่ง unspiked
ตัวอย่างใช้เป็นชุดควบคุมลบ