30 Based on literature (Swiss-Prot:

30 Based on literature (Swiss-Prot: P43489.1; Latza et al. Eur J Immunol 1994;
24: 677-683; Bodmer et al. Trends Biochem Sci 2002; 27: 19-26; Compaan et al.
Structure 2006; 14: 1321-1330; US Patent Publ. No. 2011/0028688 Al), ซิสเทอีน-
rich domains (CRD) and a hingelike structure in the ภายนอกเซลล์ region of ฮิวเมน

CD134 were identified. CRDs are coded CRD1, CRD2, (truncated) CRD3,
(truncated) CRD4 (see รูป 20). CRDs contain topologically distinct types of
modules, called an A-module and a B-module (see also รูป 20). A modules are C-
shaped structures, and B-modules are S-shaped structures. A typical CRD คือ
5 usually composed of A1-B2-modules หรือ A2-B1-modules (or, less frequently, a
different pair of modules, like Al-B1) with 6 conserved ซิสเทอีน residues, โดยที่
the numeral denotes the number of disulphide bridges within each module (see also
รูป 20). As shown in รูป 20, 5 different ฮิวเมน CD134 คอนสตรัคต์ were
generated and expressed: (1) full-length ฮิวเมน CD134 คอนสตรัคต์, which starts with 10 N-terminal CRD1 (i.e., CRD1 Al-B2-module covers amino acids 29-65), and therefore denoted as `CRD1', and ประกอบรวมด้วยd amino acids 1-277 (see SEQ ID NO. 1),

(2) `CRD2' คอนสตรัคต์, which starts with N-terminal CRD2 (i.e., CRD2 Al B2-module
covers amino acids 66-107), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 66-277 linked to signal
peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 30), (3) `CRD3' คอนสตรัคต์, which starts 15 with N terminal CRD3 (i.e., CRD3 A1-Bl-module covers amino acids 108-146
(according to Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ truncated CRD3
Al-module covers amino acids 108-126 (according to Latza et al. Eur J Immunol
1994; 24: 677-683)), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 108-277 linked to signal peptide
amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 31), (4) `CRD4' คอนสตรัคต์, which consists of N-
20 terminal CRD4 หรือ CRD3 subdomain B1 module/truncated CRD4 Al-module (i.e.,
CRD4 Al-B1-module covers amino acids 127 167 (Latza et al. Eur J Immunol 1994;
24: 677-683) หรือ a combination (not shown in รูป 20) of CRD3 subdomain Bl-
module with truncated CRD4 Al-module covers amino acids 127-146 with amino
acids 147-167, ตามลำดับ (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330)), and 25 ประกอบรวมด้วยd amino acids 127-277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ
ID NO. 32), and (5) 'truncated (tc) CRD4' คอนสตรัคต์, which consists of N-terminal
truncated CRD4 หรือ CRD4 subdomain B1-module (i.e., truncated CRD4 Al module
covers amino acids 147-167 (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ
CRD4 subdomain B 1-module (not shown in รูป 20; Latza et al. Eur J Immunol 30 1994; 24: 677-683) covers amino acids 147-167), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 147-
277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 33). By assembly
PCR using AccuprimeTM Pfx DNA Polymerase (Invitrogen), these 5 ฮิวเมน CD134
คอนสตรัคต์ were generated using primers shown in the following table:

* Primer No. according to Bioceros internal coding system 15
Briefly, cDNA encoding amino acids 1-28 of signal peptide and cDNA
encoding amino acids 66-277 of ฮิวเมน CD134 were amplified using ตามลำดับ
primer pair 362/365 and 364/363 in a PCR reaction with full-length ฮิวเมน CD134
as a template. Subsequently, `CRD2' คอนสตรัคต์ was generated by using these two 20 PCR products in an assembly PCR using primer pair 362/363. The cDNA encoding
`CRD2' คอนสตรัคต์ was subcloned into a pcDNA3.1-derived expression plasmid using
suitable restriction sites. Similarly, `CRD3' คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal
peptide linked to amino acids 108-277 of ฮิวเมน CD134), `CRD4' คอนสตรัคต์ (amino
acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 127 -277), and 'truncated CRD4' 25 คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 147-277) were
generated and subcloned in pcDNA3.1-derived expression plasmids using the
corresponding primers shown in abovementioned table. Furthermore, full-length
ฮิวเมน CD134 (SEQ ID NO. 1) was also re-cloned in a pcDNA3.1-derived
expression plasmid.
30 Using the FreeStyleTM 293 Expression System (Invitrogen), FreeStyleTM
293-F cells (Invitrogen) were transiently transfected with the 5 generated variants of ฮิวเมน CD134. After 48-72h, surface ฮิวเมน CD134 expression on transfected cells was analyzed by FACS analysis. To this end, transfected cells were harvested

and put at 1-2x106 cells/mL in ice chilled PBS/BSA/NaN3. Cells were incubated
with 20.0 lig/mL mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and
20E5 for 30 minutes at 4°C. In parallel, 20.0 Rg/mL mouse IgGlic ไอโซไทป์ control
antibody (BD Biosciences) was used as a เนกาทีฟ control. After extensive washing 5 in PBS/BSA/NaN3, cells were subsequently incubated with 1:200 diluted PE-
conjugated goat แอนติ-mouse IgG (Fcy specific) antibodies (Jackson
ImmunoResearch) for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in
PBS/BSA/NaN3, cells were fixed in 2% formaldehyde in PBS/BSA/NaN3 for 30
minutes at 4°C. การยึดเกาะของ antibodies was measured using โฟลไซโตเมทรี
10 (FACSCalibur; BD Biosciences).
As shown in รูป 21, both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones
12H3 and 20E5 recognized full-length (denoted as `CRD l' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134
on transfected 293-F cells, whereas both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 showed no binding on mock-transfected 293-F cells.
15 Moreover, mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 20E5 recognized
truncated ฮิวเมน CD134 variants that lacked CRD1 and CRD1-CRD2 (denoted as
`CRD2' คอนสตรัคต์ and `CRD3' คอนสตรัคต์, ตามลำดับ) on transfected 293-F cells. In
contrast, การยึดเกาะของ mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al
20 module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) was very weak, and การยึดเกาะของ mouse แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against truncated ฮิวเมน CD134 variant that
lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-module-CRD4 subdomain Al-module
(according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
25 Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์) was
completely absent, whereas mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 showed
a strong binding against truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-
CRD2-truncated CRD3 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-
30 module-CRD4 subdomain Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J
Immunol 1994; 24: 677 683) หรือ alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module
(according to definition of Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted
as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).

These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 specifically recognized ฮิวเมน CD134 (comparison of full-
length ฮิวเมน CD134 transfection vs mock transfection). Furthermore, these
results demonstrated that mouse anti ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 5 20E5 seemed to recognize dissimilar ฮิวเมน CD134 เอพิโทป, which คือ evidenced by
respective lack of binding (using clone 12H3) vs strong binding (using clone 20E5)
with truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1 CRD2-truncated CRD3
Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and with truncated ฮิวเมน CD134
variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
10 module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677 683) or
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3
did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1 and CRD2, and mouse 15 แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134
เอพิโทป in CRD1, CRD2, and truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330).

CD134 were identified. CRDs are coded CRD1, CRD2, (truncated) CRD3,
(truncated) CRD4 (see รูป 20). CRDs contain topologically distinct types of
modules, called an A-module and a B-module (see also รูป 20). A modules are C-
 shaped structures, and B-modules are S-shaped structures. A typical CRD คือ 
5 usually composed of A1-B2-modules หรือ A2-B1-modules (or, less frequently, a 
 different pair of modules, like Al-B1) with 6 conserved ซิสเทอีน residues, โดยที่ 
 the numeral denotes the number of disulphide bridges within each module (see also 
 รูป 20). As shown in รูป 20, 5 different ฮิวเมน CD134 คอนสตรัคต์ were 
 generated and expressed: (1) full-length ฮิวเมน CD134 คอนสตรัคต์, which starts with 10 N-terminal CRD1 (i.e., CRD1 Al-B2-module covers amino acids 29-65), and therefore denoted as `CRD1', and ประกอบรวมด้วยd amino acids 1-277 (see SEQ ID NO. 1),

(2) `CRD2' คอนสตรัคต์, which starts with N-terminal CRD2 (i.e., CRD2 Al B2-module 
 covers amino acids 66-107), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 66-277 linked to signal 
 peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 30), (3) `CRD3' คอนสตรัคต์, which starts 15 with N terminal CRD3 (i.e., CRD3 A1-Bl-module covers amino acids 108-146 
 (according to Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ truncated CRD3 
 Al-module covers amino acids 108-126 (according to Latza et al. Eur J Immunol 
 1994; 24: 677-683)), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 108-277 linked to signal peptide 
 amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 31), (4) `CRD4' คอนสตรัคต์, which consists of N-
20 terminal CRD4 หรือ CRD3 subdomain B1 module/truncated CRD4 Al-module (i.e., 
 CRD4 Al-B1-module covers amino acids 127 167 (Latza et al. Eur J Immunol 1994; 
 24: 677-683) หรือ a combination (not shown in รูป 20) of CRD3 subdomain Bl-
 module with truncated CRD4 Al-module covers amino acids 127-146 with amino 
 acids 147-167, ตามลำดับ (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330)), and 25 ประกอบรวมด้วยd amino acids 127-277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ 
 ID NO. 32), and (5) 'truncated (tc) CRD4' คอนสตรัคต์, which consists of N-terminal 
 truncated CRD4 หรือ CRD4 subdomain B1-module (i.e., truncated CRD4 Al module 
 covers amino acids 147-167 (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ 
 CRD4 subdomain B 1-module (not shown in รูป 20; Latza et al. Eur J Immunol 30 1994; 24: 677-683) covers amino acids 147-167), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 147-
 277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 33). By assembly 
 PCR using AccuprimeTM Pfx DNA Polymerase (Invitrogen), these 5 ฮิวเมน CD134 
 คอนสตรัคต์ were generated using primers shown in the following table:

* Primer No. according to Bioceros internal coding system 15
Briefly, cDNA encoding amino acids 1-28 of signal peptide and cDNA
encoding amino acids 66-277 of ฮิวเมน CD134 were amplified using ตามลำดับ
primer pair 362/365 and 364/363 in a PCR reaction with full-length ฮิวเมน CD134 
 as a template. Subsequently, `CRD2' คอนสตรัคต์ was generated by using these two 20 PCR products in an assembly PCR using primer pair 362/363. The cDNA encoding 
 `CRD2' คอนสตรัคต์ was subcloned into a pcDNA3.1-derived expression plasmid using 
 suitable restriction sites. Similarly, `CRD3' คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal 
 peptide linked to amino acids 108-277 of ฮิวเมน CD134), `CRD4' คอนสตรัคต์ (amino 
 acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 127 -277), and 'truncated CRD4' 25 คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 147-277) were 
 generated and subcloned in pcDNA3.1-derived expression plasmids using the 
 corresponding primers shown in abovementioned table. Furthermore, full-length 
 ฮิวเมน CD134 (SEQ ID NO. 1) was also re-cloned in a pcDNA3.1-derived 
 expression plasmid.
30 Using the FreeStyleTM 293 Expression System (Invitrogen), FreeStyleTM
293-F cells (Invitrogen) were transiently transfected with the 5 generated variants of ฮิวเมน CD134. After 48-72h, surface ฮิวเมน CD134 expression on transfected cells was analyzed by FACS analysis. To this end, transfected cells were harvested

and put at 1-2x106 cells/mL in ice chilled PBS/BSA/NaN3. Cells were incubated
with 20.0 lig/mL mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and 
 20E5 for 30 minutes at 4°C. In parallel, 20.0 Rg/mL mouse IgGlic ไอโซไทป์ control 
 antibody (BD Biosciences) was used as a เนกาทีฟ control. After extensive washing 5 in PBS/BSA/NaN3, cells were subsequently incubated with 1:200 diluted PE-
 conjugated goat แอนติ-mouse IgG (Fcy specific) antibodies (Jackson 
 ImmunoResearch) for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in 
 PBS/BSA/NaN3, cells were fixed in 2% formaldehyde in PBS/BSA/NaN3 for 30 
 minutes at 4°C. การยึดเกาะของ antibodies was measured using โฟลไซโตเมทรี
10 (FACSCalibur; BD Biosciences).
As shown in รูป 21, both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones
12H3 and 20E5 recognized full-length (denoted as `CRD l' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134 
 on transfected 293-F cells, whereas both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies 
 clones 12H3 and 20E5 showed no binding on mock-transfected 293-F cells. 
15 Moreover, mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 20E5 recognized 
 truncated ฮิวเมน CD134 variants that lacked CRD1 and CRD1-CRD2 (denoted as 
 `CRD2' คอนสตรัคต์ and `CRD3' คอนสตรัคต์, ตามลำดับ) on transfected 293-F cells. In 
 contrast, การยึดเกาะของ mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against 
 truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al 
20 module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) was very weak, and การยึดเกาะของ mouse แอนติ-
 ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against truncated ฮิวเมน CD134 variant that 
 lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-module-CRD4 subdomain Al-module 
 (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ 
 alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of 
25 Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์) was 
 completely absent, whereas mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 showed 
 a strong binding against truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-
 CRD2-truncated CRD3 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and against 
 truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-
30 module-CRD4 subdomain Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J 
 Immunol 1994; 24: 677 683) หรือ alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module 
 (according to definition of Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted 
 as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).

These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 specifically recognized ฮิวเมน CD134 (comparison of full-
 length ฮิวเมน CD134 transfection vs mock transfection). Furthermore, these 
 results demonstrated that mouse anti ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 5 20E5 seemed to recognize dissimilar ฮิวเมน CD134 เอพิโทป, which คือ evidenced by 
 respective lack of binding (using clone 12H3) vs strong binding (using clone 20E5) 
 with truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1 CRD2-truncated CRD3 
 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and with truncated ฮิวเมน CD134 
 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
10 module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677 683) or
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 
 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1 and CRD2, and mouse 15 แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 
 เอพิโทป in CRD1, CRD2, and truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
 module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ 
 alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of 
 Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330).

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

ยึดเอกสารประกอบการ 30 (Prot สวิส: P43489.1 Latza et al. Eur J Immunol 199424:677-683 วิทยาศาสตร์วิศวกรรม Biochem แนวโน้ม Bodmer et al. 2002 27:19-26 Compaan et alปี 2006 โครงสร้าง 14:1321-1330 สหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรหมายเลข Publ. 2011/0028688 Al), ซิสเทอีน -โดเมนรวย (CRD) และโครงสร้าง hingelike ในแคว้นภายนอกเซลล์ฮิวเมนมีระบุ CD134 CRDs มีรหัส CRD1, CRD2, CRD3 (ตัด)(ตัด) CRD4 (ดูรูปที่ 20) CRDs ประกอบด้วย topologically ประเภทของเรียกว่าโมดูล A เป็นโมดูลและบีโมดูล (ดูรูปที่ 20) โมดูลมี C- รูปโครงสร้าง และโมดูล B มีโครงสร้างเป็นรูปตัว S คือแบบ CRD โดยทั่วไป 5 มักจะประกอบด้วยโมดู B2 A1 หรือ A2 B1 โม (หรือ ไม่ บ่อย การ คู่แตกต่างกันของโมดูล เช่นอัล-B1) กับ 6 อยู่ตกซิสเทอีน โดยที่ ตัวเลขแสดงจำนวน disulphide สะพานภายในแต่ละโมดูล (โปรดดู รูป 20) ดังแสดงในรูป 20 ฮิวเมน 5 แตกต่างกันคอนสตรัคต์ถูก CD134 สร้าง และแสดง: ฮิวเมน (1) ปราศจาก CD134 คอนสตรัคต์ ซึ่งเริ่มต้น ด้วย 10 CRD1 N-เทอร์มินัล (เช่น CRD1 อัล-B2-โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 29-65), และสามารถบุจึง เป็น 'CRD1' และกรดอะมิโน ประกอบรวมด้วยd 1-277 (ดูรหัสลำดับหมายเลข 1),(2) ' CRD2' คอนสตรัคต์ ซึ่งเริ่มต้น ด้วย N-สถานี CRD2 (เช่น CRD2 อัลบี 2 โมดูล ครอบคลุมถึงกรดอะมิโน 66-107), และกรดอะมิโน 66-277 ประกอบรวมด้วยd กับสัญญาณ กรดอะมิโนเพปไทด์ 1-28 (ดูลำดับรหัสหมายเลข 30), (3) 'CRD3' คอนสตรัคต์ ซึ่งเริ่มต้น 15 ด้วย N CRD3 เทอร์มินัล (เช่น CRD3 A1-Bl-โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108 146 (ตาม Compaan et al. 2006 โครงสร้าง 14:1321-1330) หรือตัด CRD3 กรดอะมิโน 108-126 (ตาม Latza et al. Eur J Immunol ครอบคลุมโมดูอัล ปี 1994 24:677-683)), และกรดอะมิโน ประกอบรวมด้วยd 108-277 กับสัญญาณเพปไทด์ กรดอะมิโน 1-28 (ดูลำดับรหัสหมายเลข 31), (4) 'CRD4' คอนสตรัคต์ ซึ่งประกอบด้วย N -20 สถานี CRD4 หรือ CRD3 โดเมนย่อยบี 1 โมดูล/ตัด CRD4 อัลโม (เช่น CRD4 กรดอะมิโน (Latza et al. Eur J Immunol 1994; 127 167 ครอบคลุมโมดูอัล B1 24:677-683) หรือการรวมกัน (ไม่แสดงในรูปที่ 20) ของโดเมนย่อย CRD3 Bl - กรดอะมิโน 127 146 กับอะมิโนครอบคลุมโมดูลกับตัด CRD4 อัลโมดูล กรด 147-167 ตามลำดับ (Compaan et al. โครงสร้าง 2006; 14:1321-1330)), และกรดอะมิโน ประกอบรวมด้วยd 25 127 277 กับสัญญาณเพปไทด์กรดอะมิโน 1-28 (ดูลำดับ รหัสหมายเลข 32), และ (5) ' ตัด (tc) CRD4' คอนสตรัคต์ ซึ่งประกอบด้วยสถานี N ตัด CRD4 หรือ CRD4 โดเมนย่อย (เช่น ตัดอัล CRD4 โมดูล B1-โมดูล กรดอะมิโน 147-167 ครอบคลุม (Compaan et al. โครงสร้าง 2006; 14:1321-1330) หรือ CRD4 โดเมนย่อย B 1 โมดูล (ไม่แสดงในรูปที่ 20 Latza et al. Eur J Immunol 30 ปี 1994 24:677-683) ครอบคลุมถึงกรดอะมิโน 147-167), และกรดอะมิโน ประกอบรวมด้วยd 147 - 277 กับสัญญาณเพปไทด์กรดอะมิโน 1-28 (ดูลำดับรหัสหมายเลข 33) โดยมีสภา PCR โดยใช้ AccuprimeTM Pfx ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (Invitrogen), ฮิวเมนเหล่านี้ 5 CD134 คอนสตรัคต์ถูกสร้างโดยใช้ไพรเมอร์ที่แสดงในตารางต่อไปนี้:* หมายเลขรองพื้น ตามรหัสระบบ 15 ภายใน Biocerosสั้น ๆ cDNA เข้า 28 1 กรดอะมิโนเพปไทด์สัญญาณและ cDNAกรดอะมิโน 66 277 ของฮิวเมนการเข้ารหัส CD134 ถูกขยายโดยใช้ตามลำดับคู่รองพื้น 362/365 และ 364/363 ในปฏิกิริยา PCR มีฮิวเมนปราศจาก CD134 เป็นแม่แบบ ในเวลาต่อมา 'CRD2' คอนสตรัคต์ถูกสร้างขึ้น โดยใช้เหล่านี้สอง 20 ผลิตภัณฑ์ PCR ในแอสเซมบลี PCR โดยใช้รองพื้นคู่ 362/363 การเข้ารหัส cDNA 'CRD2' คอนสตรัคต์เป็น subcloned เป็น plasmid มา pcDNA3.1 นิพจน์โดยใช้ ข้อจำกัดเหมาะสมไซต์ เหมือนกับ 'CRD3' คอนสตรัคต์ (กรดอะมิโน 1-28 ของสัญญาณ เพปไทด์กับกรดอะมิโน 108-277 ของฮิวเมน CD134), 'CRD4' คอนสตรัคต์ (อะมิโน กรด 1-28 ของเพปไทด์สัญญาณกับกรดอะมิโน 127-277), และ 'ตัด CRD4' 25 คอนสตรัคต์ (กรดอะมิโน 1-28 ของเพปไทด์สัญญาณที่เชื่อมโยงกับกรดอะมิโน 147-277) สร้าง และ subcloned plasmids นิพจน์ pcDNA3.1 มาใช้ในการ ไพรเมอร์ตรงที่แสดงในตารางดังกล่าวข้างต้น นอกจากนี้ ปราศจาก ฮิวเมน CD134 (ลำดับรหัสหมายเลข 1) ที่ยังใหม่โคลนใน pcDNA3.1 ได้รับ plasmid นิพจน์30 ใช้ FreeStyleTM 293 นิพจน์ระบบ (Invitrogen), FreeStyleTM293-F เซลล์ (Invitrogen) ถูก transfected กับตัวแปรสร้าง 5 ของฮิวเมน transiently CD134 หลัง 48-72h ฮิวเมนผิว CD134 นิพจน์ในเซลล์ transfected ถูกวิเคราะห์ โดยวิเคราะห์ FACS เพื่อการนี้ transfected เซลล์เก็บเกี่ยวและย้ายที่ 1-2 x 106 เซลล์/มล.ในน้ำแข็งแช่ PBS บีเอส เอ/NaN3 เซลล์ถูก incubated20.0 lig/mL เมาส์แอนติ-ฮิวเมนแอนตี้โมโนโคลนอล CD134 clones 12H 3 และ 20E5 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ขนาน Rg 20.0 mL IgGlic ไอโซไทป์ควบคุมเมาส์ แอนติบอดี (เวลาออก BD) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเนกาทีฟ หลังจากอ่านรีวิวซัก 5 ใน PBS บีเอส เอ/NaN3 เซลล์ได้มา incubated กับ 1: 200 ทำให้ PE - แอนตี้ IgG (เฉพาะ Fcy) แอนติ-เมาส์แพะกลวง (Jackson ImmunoResearch) 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากซักผ้าอย่างละเอียดใน PBS/บี เอส เอ/NaN3 เซลล์ที่ถาวรในฟอร์มาลดีไฮด์ 2% ใน PBS บีเอส เอ/NaN3 ใน 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส แอนตี้การยึดเกาะของถูกวัดโดยใช้โฟลไซโตเมทรี10 (FACSCalibur BD เวลาออก)ดังแสดงในรูปที่ 21 แอนตี้ CD134 แอนติ-ฮิวเมนทั้งเมาส์ clones12H 3 และ 20E5 รู้ปราศจาก (สามารถบุเป็น 'CRD l' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134 บน transfected 293 F เซลล์ ในขณะทั้งเมาส์แอนตี้ CD134 แอนติ-ฮิวเมน clones 12H 3 และ 20E5 แสดงให้เห็นว่าไม่รวมในเซลล์ 293-F mock transfected 15 Moreover แอนตี้ CD134 แอนติ-ฮิวเมนเมาส์ clones 12H 3 และ 20E5 รู้ ตัดทอนตัวแปร CD134 ฮิวเมนที่ขาด (สามารถบุเป็น CRD2 CRD1 และ CRD1 'CRD2' คอนสตรัคต์ 'CRD3' และคอนสตรัคต์ ตามลำดับ) ในเซลล์ 293-F transfected ใน ความคมชัด การยึดเกาะของเมาส์แอนติฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลนราคา 12H 3 กับ ตัวแปร CD134 ฮิวเมนตัดที่อัล CRD3 CRD1-CRD2-ตัดขาด โมดูล 20 (ตาม 'CRD4' คอนสตรัคต์) ได้อ่อนมาก และการยึดเกาะของเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H 3 กับตัวแปร CD134 ฮิวเมนตัดที่ ขาดโดเมนย่อย CRD1-CRD2-ตัด CRD3 อัลโม-CRD4 อัล-โมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24:677-683) หรือ หรือ CRD1-CRD2-CRD3 อัลบี 1 โมดูล (ตามคำนิยามของ ปี 2006 โครงสร้าง 25 Compaan et al. 14:1321-1330 สามารถบุเป็น 'tcCRD4' คอนสตรัคต์) ได้ ขาดทั้งหมด ในขณะที่เมาส์แอนติฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5 พบ ผูกแข็งแรงกับตัวแปร CD134 ฮิวเมนตัดที่ขาด CRD1- ตัด CRD2 CRD3 อัลโมดูล (ตาม 'CRD4' คอนสตรัคต์) และ ตัวแปร CD134 ฮิวเมนตัดที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 อัล-โมดูล CRD4 30 โดเมนย่อยอัล-โมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al. Eur J Immunol 1994 24:677 683) หรืออีกวิธีหนึ่งคือ CRD1-CRD2-CRD3 อัล-B1-โมดูล (ตามคำนิยามของ Compaan et al. ปี 2006 โครงสร้าง 14:1321-1330 สามารถบุ เป็น 'tcCRD4' คอนสตรัคต์)ผลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าเมาส์ที่แอนตี้ CD134 แอนติ-ฮิวเมนclones 12H 3 และฮิวเมน 20E5 โดยเฉพาะรู้จัก CD134 (เปรียบเทียบเต็ม- ความยาวฮิวเมน CD134 transfection vs ล้อ transfection) นอกจากนี้ เหล่านี้ ผลลัพธ์แสดงว่าเมาส์ป้องกันฮิวเมน CD134 แอนตี้โคลน 12H 3 และ 5 20E5 ที่ดูเหมือนจะ รับรู้ไม่เหมือนฮิวเมน CD134 เอพิโทป คือที่เป็นหลักฐานด้วย เกี่ยวข้องขาดการผูก (ใช้โคลน 12H 3) vs ผูกแข็งแรง (ใช้โคลน 20E5) กับตัวแปร CD134 ฮิวเมนตัดที่ขาดตัด CRD1 CRD2 CRD3 โมดูอัล (ตาม 'CRD4' คอนสตรัคต์) และ มีฮิวเมนตัด CD134 ตัวแปรที่ขาดโดเมนย่อย CRD1-CRD2-ตัด CRD3 A1-โม-CRD4 อัล-โมดูล 10 (ตามคำนิยามของ Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24:677 683) หรือหรือ CRD1-CRD2-CRD3 อัล-B1-โมดูล (ตามคำนิยามของปี 2006 โครงสร้าง Compaan และ al. 14:1321-1330 สามารถบุเป็น 'tcCRD4' คอนสตรัคต์) ว่าผลเหล่านี้แสดงว่าเมาส์แอนติฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 12H 3 ไม่ได้ดูเหมือนไม่ รู้จักฮิวเมนเป็น CD134 เอพิโทป CRD1 และ CRD2 และเมาส์ 15 แอนติฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน 20E5 ไม่ได้ดูเหมือนไม่ รู้จักฮิวเมนเป็น CD134 เอพิโทป CRD1, CRD2 และโดเมนย่อย CRD3 A1-โม-CRD4 ตัดอัล- โมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24:677-683) หรือ หรือ CRD1-CRD2-CRD3 อัลบี 1 โมดูล (ตามคำนิยามของ ปี 2006 โครงสร้าง Compaan และ al. 14:1321-1330)

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

30 ตามวรรณคดี ( สวิสก่อน : p43489.1 ; latza et al . Eur J immunol 1994 ;
24 : 677-683 ; bodmer et al . แนวโน้มเกี่ยวกับชีวเคมีวิทยาศาสตร์ 2002 ; 27 : 19-26 ; compaan et al .
โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ; เราสิทธิบัตร PUBL . หมายเลข 2011 / 0028688 AL ) ซิสเทอีน -
รวยโดเมน ( CRD ) และ hingelike โครงสร้างในภายนอกเซลล์ภูมิภาคของฮิวเมน

cd134 ระบุ . crds เขียน crd1 crd2 , ,( ตัด ) crd3
( ตัด ) , crd4 ( ดู 20 รูป ) crds ประกอบด้วย topologically แตกต่างกันประเภทของ
โมดูลที่เรียกว่า a-module และ b-module ( เห็นรูป 20 ) เป็นโมดูล C -
รูปร่าง โครงสร้าง และ b-modules รูปโครงสร้าง โดยทั่วไปความ (
5 มักจะประกอบด้วย a1-b2-modules ค็อค a2-b1-modules ( หรือน้อยกว่า ,
คู่ที่แตกต่างกันของโมดูลชอบ al-b1 ) กับ 6 ปีซิสเทอีนตกค้าง , โดยที่
ตัวเลขแสดงจำนวน = สะพานภายในแต่ละโมดูล ( เห็น
รูป 20 ) แสดง 20 รูป 5 แตกต่างกันฮิวเมน cd134 คอนสตรัคต์ถูก
สร้างและแสดง ( 1 ) เต็มตัวฮิวเมน cd134 คอนสตรัคต์ซึ่งเริ่มต้นด้วย 10 ถูก crd1 ( เช่นcrd1 al-b2-module ครอบคลุมกรดอะมิโน 29-65 ) ดังนั้น กล่าวคือ เป็น crd1 ` ' , และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโนเซียวเหล่งนึ่ง ( ดู seq id หมายเลข 1 ) ,

( 2 ) ` crd2 ' คอนสตรัคต์ซึ่งเริ่มต้นด้วยกรดอะมิโน crd2 ( เช่น crd2 อัล B2
ครอบคลุมโมดูลกรดอะมิโน 66-107 ) และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโน 66-277 เชื่อมโยงสัญญาณ
เปปไทด์ กรดอะมิโน 1-28 ( ดู seq id หมายเลข 30 )( 3 ) ` crd3 ' คอนสตรัคต์ซึ่งเริ่ม 15 กับเทอร์มินัล crd3 ( เช่น crd3 A1 BL โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-146
( ตาม compaan et al . โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ) ค็อคตัดทอน crd3
อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-126 ( ตาม latza et al . immunol Eur J
1994 ; 24 : 677-683 ) และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโนเปปไทด์
108-277 เชื่อมโยงสัญญาณกรดอะมิโน 1-28 ( ดู seq ID ไม่ใช่ 31 ) , ( 4 ) ` crd4 ' คอนสตรัคต์ซึ่งประกอบด้วย n -
20 สถานี crd4 ค็อค crd3 ย่อย B1 โมดูล / ตัด crd4 อัลโม ( I ,
crd4 al-b1-module ครอบคลุมกรดอะมิโน 127 167 ( latza et al . Eur J immunol 1994 ;
24 : 677-683 ) ค็อครวมกัน ( ไม่แสดงใน 20 รูป ) ของ crd3 ซับโดเมน BL -
โมดูลด้วยตัดทอน crd4 อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน กรดอะมิโน กรด 127-146 ด้วย
147-167 ตามลำดับ ( compaan , et al . โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ) และ 25 ประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโน 127-277 เชื่อมโยงสัญญาณเปปไทด์ กรดอะมิโน 1-28 ( ดู seq
ID หมายเลข 32 ) และ ( 5 ) การสื่อสาร ( TC ) crd4 ' คอนสตรัคต์ซึ่งประกอบด้วยกรดอะมิโน
ตัด crd4 ค็อค crd4 โมดูลย่อย B1 ( เช่น ตัด crd4 อัลโมดูล
ครอบคลุมกรดอะมิโน 147-167 ( compaan et al . โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ) ค็อค
crd4 ย่อย B 1-module ( ไม่แสดงใน 20 รูป latza et al . Eur J immunol 30 ปี 1994 ; 24 : 677-683 ) ครอบคลุมกรดอะมิโน 147-167 ) และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโน 147 -
277 เชื่อมโยงสัญญาณเปปไทด์ กรดอะมิโน 1-28 ( ดู seq id หมายเลข 33 ) โดยวิธี PCR ที่ใช้ประกอบ
accuprimetm pfx DNA polymerase ( Invitrogen ) 5 ฮิวเมน cd134
คอนสตรัคต์ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ไพรเมอร์ที่แสดงอยู่ในตารางต่อไปนี้ :

* รองพื้นไม่ ตาม bioceros ภายในการเข้ารหัสระบบ 15
สั้น , การโคลนยีนของเปปไทด์และกรดอะมิโน 1-28 สัญญาณยีน
การเข้ารหัสของกรดอะมิโน 66-277 ฮิวเมน cd134 กำลังขยายการใช้ไพรเมอร์คู่ตามลำดับ
362 / 365 364 / 363 ในปฏิกิริยา PCR กับเต็มตัวฮิวเมน cd134
เป็นแม่แบบ ต่อมา " crd2 ' คอนสตรัคต์ถูกสร้างขึ้นโดยใช้เหล่านี้ 2 20 PCR ผลิตภัณฑ์ในการประกอบวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์คู่ 362 / 363 . การโคลนยีน
` crd2 ' คอนสตรัคต์คือของใน pcdna3.1-derived การแสดงออกโดยใช้พลาสมิด
เว็บไซต์ข้อ จำกัดที่เหมาะสม ในทำนองเดียวกัน " crd3 ' คอนสตรัคต์ ( กรดอะมิโน 1-28 สัญญาณ
เปปไทด์ที่เชื่อมโยงกับกรดอะมิโน 108-277 ของฮิวเมน cd134 ) ' ' ( กรดอะมิโน crd4 คอนสตรัคต์
1-28 สัญญาณเปปไทด์เชื่อมกรดอะมิโน 127 - 277 )และ ' ตัด ' 25 crd4 คอนสตรัคต์ ( กรดอะมิโน 1-28 สัญญาณเชื่อมโยงกรดอะมิโนเปปไทด์ 147-277 ) ถูกสร้างขึ้นใน pcdna3.1-derived
ของพลาสมิดดีเอ็นเอการแสดงออกโดยใช้
ที่แสดงในตารางที่ดังกล่าวข้างต้น นอกจากนี้ เต็มตัว
ฮิวเมน cd134 ( seq id หมายเลข 1 ) ยังเป็นโคลนใน pcdna3.1-derived

ท่าทางพลาสมิด30 การใช้ freestyletm 293 การแสดงออกระบบ ( Invitrogen ) freestyletm
293-f เซลล์ ( Invitrogen ) เป็นบุคคลหรือสิ่งที่อยู่ชั่วคราว transfected กับ 5 สร้างสายพันธุ์ของฮิวเมน cd134 . หลังจาก 48-72h พื้นผิวฮิวเมน cd134 การแสดงออกในเซลล์ transfected วิเคราะห์ข้อมูลโดยการวิเคราะห์ facs . ทั้งนี้ transfected เซลล์เก็บ

และใส่ใน 1-2x106 เซลล์ / มล. ในน้ำแข็งแช่เย็น PBS / เอ / nan3 .เซลล์ที่ถูกบ่ม
กับ 20.0 lig / ml เมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน 12h3 และ
20e5 เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศา ในแบบคู่ขนาน 20.0 RG / ml ควบคุมเมาส์ igglic
ไอโซไทป์แอนติบอดี ( BD BIOSCIENCES ) ถูกใช้เป็นเนกาทีฟควบคุม หลังจากล้าง 5 ใน PBS / เอ / nan3 อย่างละเอียด เซลล์ จัดการแยก 1:200 PE -
เจือจางแอนติ IgG conjugated แพะ - เมาส์ ( FCY เฉพาะแอนติบอดี ( แจ็คสัน )
immunoresearch ) สำหรับ 30 นาทีที่ 4 องศา หลังจากอย่างละเอียดล้าง
PBS / เอ / nan3 เซลล์ที่ได้รับการแก้ไขในฟอร์ม 2 % ใน PBS / เอ / nan3 30
นาทีที่ 4 องศา การยึดเกาะของแอนติบอดีถูกวัดโดยใช้โฟลไซโตเมทรี
10 facscalibur ; BD BIOSCIENCES ) .
ดังแสดงในรูป 21 ,ทั้งเมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดีโคลน
12h3 20e5 เต็มตัว ( แทน และได้รับการยอมรับเป็น ` ( l ' คอนสตรัคต์ ) ฮิวเมน cd134
บน transfected 293-f เซลล์ ส่วนเมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดี
โคลนและ 12h3 20e5 ไม่มีผลผูกพันกับเยาะเย้ย transfected 293-f เซลล์
15 นอกจากนี้เมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดีโคลนและการ 12h3 20e5
ตัดฮิวเมน cd134 สายพันธุ์ที่ขาด crd1 และ crd1-crd2 ( กล่าวคือ เป็น crd2
` ` ' ' และ crd3 คอนสตรัคต์คอนสตรัคต์ , transfected 293-f ตามลำดับ ) ในเซลล์ ใน
คมชัดการยึดเกาะของเมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 แอนติบอดีต่อ
12h3 โคลน

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.