2. Materials and methods
2.1. Materials
Three rice cultivars used in this study, namely, Jehlum, SKAU-345 and SKAU-382 were collected from Sher-e-Kashmir University of Agriculture Science and Technology, Kashmir, India. The grains were dried and cleaned manually to remove foreign matters and stored at 5 °C and then taken for the experimentation.
2.2. Preparation of puffed rice
Paddy was soaked in pre-heated water at 80 °C for 6 h. The water was drained off and the soaked paddy was spread on small wire-mesh trays, and steamed in an autoclave at a pressure of 1.5 kg/cm2 for 10 min. The paddy was then dried at 40 °C in a tray drier to 14% moisture and de-husked in a Satake Testing Rice Husker (THU-34A, Satake, Japan). Afterwards, rice was expanded in iron pan containing sand at ∼220 °C for 45–60 s and vigorously stirred with the sand to ensure uniform heating. The sand temperature was measured with an electronic thermometer. The expanded rice was put on the clean marble floor, to bring it to room temperature.
2.3. Length/breadth ratio
Brown rice kernels at different stages of puffing (raw, parboiled, expanded) were randomly selected from each cultivar and their length and breadth were measured by using a Vernier caliper.
2.4. Bulk density
The bulk density was determined using the mass/volume relationship by filling an empty plastic container of predetermined volume and tare weight with the grains by pouring from a constant height, striking off the top level and weighing (Mir, Bosco, & Sunooj, 2013).
2.5. Colour
The colour of grain samples at different stages of puffing were determined by CIE colour scales L∗, a∗ and b∗ using Hunter Lab digital colourimeter (Model D25M, Hunter Associates Laboratory, Reston, VA). Where L∗ indicates the degree of lightness or darkness of the sample extended from 0 (black) to 100 (white), a∗ and b∗ indicates degree of redness (+a) to greenness (−a) and whereas b∗ indicates the degree of yellowness (+b) to blueness (−b), respectively.
2.6. X-ray diffraction
X-ray diffraction analysis of samples was performed using X-ray diffractometer (Shimadzu, XRD 7000) operated at 30 mA (tube current) and 40 kV (target voltage) with Cu Kα filtered radiation. The scanning range for 2θ values was set from 10° to 70° to cover all significant diffraction peaks of sample crystallites with a scan speed of 2°/min.
2.7. Scanning electron microscopy
Structure of rice grain at different puffing stages was analysed by scanning electron microscopy (HITACHI Model S-3000H). The samples were mounted on scanning electron microscopy aluminium stubs using double sided adhesive tape to which the samples were fixed and coated with a thin layer of gold. An acceleration of 15 kV and magnification ×100 was used during micrography.
2.8. Raman spectroscopy
The Raman spectra were recorded with a Raman spectrometer (model inVia) produced by Renishaw (UK), working in confocal mode. The rice samples were placed on an aluminium holder and were excited with 785 nm laser line of HP NIR diode laser Renishaw (UK). The laser power was kept low enough to ensure that it did not damage the sample. Measurements were performed with microscope and spectra were taken from the same spot size of each sample in the range of 1600–400 cm−1.
2.9. Antioxidant activity
2.9.1. Preparation of brown rice extract
Rice samples were well ground using Mini Grain Mill (A11B, IKA Inc.) and sifted through 125 μm sieve. Ten grams of each powdered sample were extracted for 8 h with 50 ml of acidified methanol in an electrical shaker (Technico, India) at 30 °C. Extract was centrifuged at 1000×g for 15 min. and the supernatant was stored in a sealed container at −4 °C until used for further analysis.
2.9.2. Determination of total phenolic content
Total phenolic content of samples was determined using the Folin–Ciocalteu method (Liu & Yao, 2007) with some modifications. 200 μl of brown rice extract was mixed with 1 ml of Folin–Ciocalteu reagent diluted to 1:10 with water. The dispersion was shaken vigorously and 1 ml of 10% Na2CO3 was added and the final volume was made up to 5 ml with distilled water. The dispersion was then left to stand for 2 h at room temperature and the absorbance at 765 nm was measured using a UV–Vis Spectrophotometer (UV-1800, Shimadzu, Japan). The results of total phenolic content were expressed as mg gallic acid equivalents per g of brown rice extract.
2.9.3. Determination of total flavonoid content
Total flavonoid content of rice extract was determined using the method described by Jia, Tang, and Wu (1998). Rice extract (250 μl) was diluted with 1.25 ml of distilled water and 75 μl of 5% NaNO2 solution was then added. The dispersion was allowed to stand at room temperature for 6 min followed by the addition of 150 μl of 10% AlCl3. Again, this dispersion was allowed to stand for further 5 min and 0.5 ml of 1 M NaOH was added. The solution was shaken vigorously and the absorbance was measured at 510 nm. The results were expressed as μg catechin equivalents per g of brown rice.
2.9.4. Determination of DPPH radical scavenging activity (DPPH)
DPPH radical scavenging activity was determined using the method described by Blois (1958). A portion (0.1 ml) of the extract solution was well mixed with 3.9 ml of methanol and 1.0 ml of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) solution (1.0 mM in methanol). The dispersion was kept in dark at ambient temperature for 30 min and the reduction in the absorbance was read at 517 nm. The scavenging activity was calculated by the following equation.
2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัสดุพันธุ์ข้าวที่สามใช้ในการศึกษานี้ ได้แก่ Jehlum, SKAU 345 และ SKAU-382 ถูกรวบรวมไว้จากแคชเมียร์ Sher e มหาวิทยาลัยเกษตรวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี แคชเมียร์ อินเดีย เกรนได้แห้งทำความสะอาดด้วยตนเองเอาเรื่องการต่างประเทศ และเก็บที่ 5 ° C และจากนั้น ใช้สำหรับการทดลอง2.2 การเตรียมสอบของสถาบันข้าวข้าวเปลือกถูกนำไปแช่ในน้ำอุ่นก่อนที่ 80 ° C สำหรับ 6 h น้ำระบายออกจาก และนา soaked กระจายบนถาดลวดตาข่ายขนาดเล็ก และนึ่งด้วยการที่ความดัน 1.5 kg/cm2 สำหรับ 10 นาที นาแล้วแห้งที่ 40 ° C ในถาดที่แห้งให้ความชื้น 14% และยกเลิกเปียกในแบบ Satake ทดสอบข้าว Husker (THU 34A, Satake ญี่ปุ่น) ภายหลัง ข้าวถูกขยายในกระทะเหล็กประกอบด้วยทราย ∼220 ° C สำหรับ s 45 – 60 และโยคะกวนกับทรายให้ความร้อนสม่ำเสมอ อุณหภูมิทรายถูกวัด ด้วยปรอทการอิเล็กทรอนิกส์ ข้าวขยายถูกวางบนพื้นหินอ่อนทำความสะอาด นำกับอุณหภูมิห้อง2.3. ความยาว/กว้างอัตราข้าวกล้องเมล็ดในระยะต่าง ๆ ของ puffing (ดิบ นึ่ง ขยาย) แบบสุ่มเลือกจาก cultivar ละ และมีวัดความยาวและความกว้าง โดยใช้ปั้ม Vernier2.4 จำนวนมากความหนาแน่นความหนาแน่นจำนวนมากที่ถูกกำหนดโดยใช้ความสัมพันธ์มวล/ปริมาตร โดยบรรจุเป็นขวดพลาสติกเปล่าน้ำหนักปริมาตรและหีบห่อที่กำหนดไว้กับธัญพืชเทจากความสูงคง โดดเด่นปิดสุด และชั่ง (มีร์ บอสโก & Sunooj, 2013)2.5 การสีสีตัวอย่างเมล็ดข้าวในระยะต่าง ๆ ของ puffing ถูกกำหนด โดย CIE สีเกล็ด L∗, a∗ และ b∗ ใช้ฮันเตอร์แล็บดิจิตอล colourimeter (รุ่น D25M ฮันเตอร์ร่วมห้องปฏิบัติ Reston, VA) L∗ บ่งชี้ระดับของความสว่างหรือความมืดของตัวอย่างเพิ่มเติมจาก 0 (สีดำ) ถึง 100 (สีขาว), a∗ และ b∗ บ่งชี้ระดับของแดง (+) เพื่อ greenness (−a) และใน ขณะที่ b∗ ว่า ปริญญา yellowness (+ b) blueness (−b), ตามลำดับ2.6 การเอ็กซ์เรย์การเลี้ยวเบนการเลี้ยวเบนการเอ็กซ์เรย์การวิเคราะห์ตัวอย่างทำใช้เอ็กซ์เรย์ diffractometer (Shimadzu, XRD 7000) ดำเนินการใน 30 mA (หลอดปัจจุบัน) และ 40 kV (แรงดันเป้าหมาย) กับ Cu Kα กรองรังสี ช่วงการสแกนสำหรับค่า 2θ ถูกตั้งค่าจาก 10 องศาให้ 70° เพื่อให้ครอบคลุมทุกการเลี้ยวเบนอย่างมีนัยสำคัญแห่ง crystallites ตัวอย่างการสแกนความเร็ว 2 องศา/นาที2.7. microscopy อิเล็กตรอนสแกนโครงสร้างของเมล็ดข้าวในระยะต่าง ๆ puffing ถูก analysed โดยสแกน microscopy อิเล็กตรอน (ฮิตาชิรุ่น S - 3000H) ตัวอย่างถูกติดตั้งบนแกนสตับอะลูมิเนียมอิเล็กตรอน microscopy สองหน้าเทปกาวที่ตัวอย่างถาวร และเคลือบด้วยชั้นบาง ๆ ของทอง การเร่งความเร็วของ 15 kV และขยาย× 100 ถูกใช้ในระหว่าง micrography2.8. กรามันแรมสเป็คตรารามันถูกบันทึกไว้ ด้วยการรามันสเปกโตรมิเตอร์ (รุ่น inVia) ผลิตโดย Renishaw (UK), ทำงานในโหมด confocal ตัวอย่างข้าวใส่ในยึดเป็นอลูมิเนียม และตื่นเต้นกับ 785 nm เลเซอร์บรรทัดของเลเซอร์ไดโอด HP NIR Renishaw (UK) พลังงานเลเซอร์ถูกเก็บต่ำเพียงพอเพื่อให้แน่ใจว่า มันไม่ได้เสียตัวอย่าง ดำเนินการวัด ด้วยกล้องจุลทรรศน์ และแรมสเป็คตราที่ถ่ายจากจุดตัดของแต่ละอย่างในช่วง 1600 – 400 cm−12.9 กิจกรรมสารต้านอนุมูลอิสระ2.9.1. เตรียมข้าวกล้องสกัดข้าวดีมีพื้นใช้โรงสีข้าวขนาดเล็ก (A11B, IKA Inc.) และ sifted ผ่านตะแกรง μm 125 กรัม 10 ของแต่ละตัวอย่างผงถูกสกัดสำหรับ h 8 กับ 50 ml ของเมทานอล acidified ในเชคเกอร์ไฟฟ้ามี (Technico อินเดีย) ที่ 30 องศาเซลเซียส สารสกัดที่ centrifuged ที่ 1000 × g สำหรับ 15 นาที และ supernatant ถูกเก็บไว้ในภาชนะบรรจุที่ −4 ° C จนกว่าจะใช้สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม2.9.2. กำหนดเนื้อหารวมฟีนอรวมเนื้อหาฟีนออย่างถูกกำหนดด้วยวิธี Folin-Ciocalteu (หลิวและยาว 2007) ปรับเปลี่ยนบางอย่าง Μl 200 ของสารสกัดจากข้าวที่ผสมกับ ml 1 ของรีเอเจนต์ Folin-Ciocalteu ที่ทำให้เจือจาง 1:10 ด้วยน้ำ กระจายตัวถูกเขย่าโยคะ และ ml 1 10% เพิ่ม Na2CO3 และปริมาตรสุดท้ายทำถึง 5 ml ด้วยน้ำกลั่น กระจายตัวได้ แล้วไปทางซ้ายยืน h 2 ที่อุณหภูมิห้องและ absorbance ที่ 765 nm ถูกวัดโดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่างเป็น UV – Vis (UV-1800, Shimadzu ญี่ปุ่น) ผลลัพธ์ของฟีนอเนื้อหาทั้งหมดถูกแสดงเป็นสารสกัดเทียบเท่ากรด gallic มิลลิกรัมต่อกรัมของข้าว2.9.3. กำหนดเนื้อหารวม flavonoidFlavonoid ที่รวมเนื้อหาของสารสกัดจากข้าวที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธีอธิบาย โดยเจีย ถัง และวู (1998) สารสกัดจากข้าว (250 μl) ถูกผสมกับ 1.25 ml ของน้ำกลั่นแล้วเพิ่ม μl 75 ของโซลูชัน 5% NaNO2 กระจายตัวที่อนุญาตให้ยืนสำหรับ 6 นาทีตาม ด้วยการเพิ่ม μl 150 10% AlCl3 อุณหภูมิห้อง อีก กระจายตัวนี้ได้รับอนุญาตให้ยืนใน 5 นาทีเพิ่มเติม และเพิ่ม 0.5 ml ของ 1 M NaOH โซลูชันถูกเขย่าโยคะ และถูกวัด absorbance ที่ 510 nm ผลลัพธ์ได้แสดงเป็นเทียบเท่าสารสกัดจาก μg ต่อกรัมของข้าว2.9.4 กำหนดกิจกรรม scavenging DPPH รุนแรง (DPPH)DPPH รุนแรง scavenging กิจกรรมที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธีอธิบาย โดย Blois (1958) ส่วน (0.1 มล.) ของสารสกัดมีทั้งผสมกับ 3.9 ml ของเมทานอล และ 1.0 ml ของโซลูชัน (DPPH) 2,2-ฟีนิลได-1-picrylhydrazyl (1.0 mM ในเมทานอล) กระจายตัวถูกเก็บไว้ในความมืดที่อุณหภูมิใน 30 นาที และลดใน absorbance ที่ถูกอ่านที่ 517 nm กิจกรรม scavenging ได้คำนวณ โดยสมการต่อไปนี้
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุสามสายพันธุ์ข้าวที่นำมาใช้ในการศึกษาครั้งนี้คือ Jehlum, SKAU-345 และ SKAU-382 ถูกเก็บมาจากเชอร์อีแคชเมียร์มหาวิทยาลัยเกษตรวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีแคชเมียร์อินเดีย เมล็ดแห้งและทำความสะอาดด้วยตนเองเพื่อเอาสิ่งแปลกปลอมและเก็บไว้ที่ 5 องศาเซลเซียสแล้วนำสำหรับการทดลอง. 2.2 การจัดทำข้าวพองข้าวถูกแช่ในน้ำก่อนอุ่นที่ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 ชั่วโมง น้ำที่ถูกระบายออกและแช่ข้าวที่แผ่บนถาดลวดตาข่ายขนาดเล็กและนึ่งในหม้อนึ่งความดันที่ความดัน 1.5 กก. / cm2 เป็นเวลา 10 นาที ข้าวเปลือกแห้งแล้วที่ 40 ° C ในถาดแห้งความชื้น 14% และ de-ข้าวกล้องข้าวในการทดสอบ Satake กะเทาะ (พฤหัสบดี-34A, Satake ญี่ปุ่น) หลังจากนั้นได้มีการขยายข้าวในกระทะเหล็กที่มีหาดทรายที่ ~220 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45-60 และกวนอย่างจริงจังด้วยทรายเพื่อให้ความร้อนสม่ำเสมอ อุณหภูมิทรายที่ถูกวัดด้วยเครื่องวัดอุณหภูมิอิเล็กทรอนิกส์ ข้าวขยายตัวที่วางอยู่บนพื้นหินอ่อนสะอาดเพื่อนำมาไว้ที่อุณหภูมิห้อง. 2.3 อัตราส่วนความยาว / กว้างสีน้ำตาลเมล็ดข้าวในแต่ละขั้นตอนของการพองตัว(ดิบข้าวนึ่งขยาย) ได้รับการสุ่มเลือกจากแต่ละพันธุ์และระยะเวลาของพวกเขาและความกว้างวัดโดยใช้คาลิเปอร์ Vernier. 2.4 ความหนาแน่นหนาแน่นเป็นกลุ่มที่ถูกกำหนดโดยใช้มวล / ความสัมพันธ์ปริมาณโดยการกรอกภาชนะพลาสติกเปล่าของปริมาณที่กำหนดไว้และน้ำหนักภาชนะที่มีธัญพืชโดยการเทจากที่สูงอย่างต่อเนื่องที่โดดเด่นออกระดับบนสุดและมีน้ำหนัก (เมียร์, บอสโกและ Sunooj, 2013). 2.5 สีสีของตัวอย่างข้าวที่ขั้นตอนต่างๆของการพองถูกกำหนดโดยสี CIE ชั่ง L *, a * และ b * โดยใช้ Hunter Lab ดิจิตอล colourimeter (รุ่น D25M เธ่ห้องปฏิบัติการแอสโซเรสตัน, VA) ที่ไหน L * บ่งบอกถึงระดับของความสว่างหรือความมืดของกลุ่มตัวอย่างที่ยื่นออกมาจาก 0 (สีดำ) 100 (สีขาว), a * และ b * บ่งชี้ระดับของสีแดง (+) เพื่ออ่อนหัด (-a) และในขณะที่ b * ระบุ ระดับของสีเหลือง (+ b) สีน้ำเงิน (-b) ตามลำดับ. 2.6 X-ray diffraction วิเคราะห์การเลี้ยวเบนรังสีเอกซ์ของกลุ่มตัวอย่างได้รับการดำเนินการโดยใช้มาตรการเลี้ยวเบนรังสีเอกซ์ (Shimadzu, XRD 7000) ดำเนินการวันที่ 30 มิลลิแอมป์ (หลอดในปัจจุบัน) และ 40 กิโลโวลต์ (แรงดันเป้าหมาย) มี Cu Kαกรองรังสี ช่วงสแกน2θค่าถูกกำหนดจาก 10 °ถึง 70 °เพื่อให้ครอบคลุมทุกยอดการเลี้ยวเบนที่สำคัญของ crystallites ตัวอย่างที่มีความเร็วในการสแกน 2 ° / นาที. 2.7 กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกนโครงสร้างของเมล็ดข้าวในแต่ละขั้นตอนที่แตกต่างกันพองได้รับการวิเคราะห์จากกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (HITACHI รุ่น S-3000H) กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการติดตั้งบนต้นขั้วอลูมิเนียมกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกนโดยใช้เทปกาวสองด้านที่เป็นตัวอย่างได้รับการแก้ไขและเคลือบด้วยชั้นบาง ๆ ของทอง เร่ง 15 กิโลโวลต์และขยาย× 100 ถูกนำมาใช้ในช่วง micrography. 2.8 สเปคโทรรามันสเปกตรัมรามันถูกบันทึกไว้ด้วยสเปกโตรมิเตอร์รามัน (รูปแบบ inVia) ผลิตโดย Renishaw (UK), การทำงานในโหมด confocal ตัวอย่างข้าวถูกวางไว้บนผู้ถืออลูมิเนียมและรู้สึกตื่นเต้นกับ 785 นาโนเมตรเลเซอร์สายของ HP NIR เลเซอร์ไดโอด Renishaw (สหราชอาณาจักร) พลังงานเลเซอร์ถูกเก็บไว้ต่ำพอที่จะให้แน่ใจว่ามันไม่ได้สร้างความเสียหายตัวอย่าง วัดได้ดำเนินการด้วยกล้องจุลทรรศน์และสเปกตรัมถูกนำมาจากจุดเดียวกันขนาดของกลุ่มตัวอย่างในแต่ละช่วงของ 1600-400 ซม. -1. 2.9 ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ2.9.1 การเตรียมสารสกัดจากข้าวกล้องตัวอย่างข้าวมาบดเป็นอย่างดีโดยใช้โรงสีข้าวขนาดเล็ก (A11B, IKA Inc) และร่อนผ่านตะแกรง 125 ไมโครเมตร สิบกรัมของแต่ละตัวอย่างผงสกัดเป็นเวลา 8 ชั่วโมง 50 มล. ของเมทานอลกรดในเครื่องปั่นไฟฟ้า (Technico, อินเดีย) ที่ 30 ° C สารสกัดจากถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาที และสารละลายที่ถูกเก็บไว้ในภาชนะที่ปิดสนิทที่ -4 ° C จนใช้สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป. 2.9.2 การหาปริมาณฟีนอลรวมรวมเนื้อหาฟีนอลของกลุ่มตัวอย่างถูกกำหนดโดยใช้วิธี Folin-Ciocalteu (หลิวและยาว, 2007) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง 200 ไมโครลิตรของสารสกัดจากข้าวกล้องผสมกับ 1 มลสาร Folin-Ciocalteu เจือจางด้วยน้ำ 01:10 กระจายเขย่าแรง ๆ และ 1 มิลลิลิตร 10% Na2CO3 ถูกบันทึกและเล่มสุดท้ายที่ถูกสร้างขึ้นถึง 5 มล. ด้วยน้ำกลั่น กระจายจากนั้นก็ทิ้งไว้เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องและการดูดกลืนแสงที่ 765 นาโนเมตรได้รับการวัดโดยใช้ UV-Vis Spectrophotometer (UV-1800, Shimadzu, ญี่ปุ่น) ผลของการรวมเนื้อหาฟีนอลถูกแสดงเป็นมิลลิกรัมเทียบเท่าฝรั่งเศสกรดต่อกรัมของสารสกัดจากข้าวกล้อง. 2.9.3 การหาปริมาณรวม flavonoid เนื้อหา flavonoid รวมของสารสกัดจากข้าวถูกกำหนดโดยใช้วิธีการอธิบายโดยเจี่ย, ถังและวู (1998) สารสกัดจากข้าว (250 ไมโครลิตร) ถูกเจือจางด้วย 1.25 มล. ของน้ำกลั่นและ 75 ไมโครลิตร 5% วิธีการแก้ปัญหา NaNO2 ถูกเพิ่มเข้ามาแล้ว กระจายได้รับอนุญาตให้อยู่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 6 นาทีตามด้วยนอกเหนือจาก 150 ไมโครลิตร 10% AlCl3 อีกครั้งที่การกระจายตัวนี้ได้รับอนุญาตให้ยืนอีก 5 นาทีและ 0.5 มิลลิลิตร 1 M NaOH ถูกบันทึก การแก้ปัญหาเขย่าแรง ๆ และดูดกลืนแสงวัดที่ 510 นาโนเมตร ผลการวิจัยแสดงเป็นรายการเทียบเท่าไมโครกรัมต่อกรัม catechin ข้าวกล้อง. 2.9.4 การกำหนดกิจกรรมต้านอนุมูล DPPH (DPPH) DPPH ต้านอนุมูลอิสระถูกกำหนดโดยใช้วิธีการอธิบายโดยบลัว (1958) ส่วนหนึ่ง (0.1 ml) ของการแก้ปัญหาสารสกัดเป็นอย่างดีผสมกับ 3.9 มล. ของเมทานอลและ 1.0 มิลลิลิตร 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) วิธีการแก้ปัญหา (1.0 มิลลิในเมทานอล) การกระจายตัวที่ได้รับการเก็บรักษาไว้ในที่มืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาทีและการลดลงในการดูดกลืนแสงที่ถูกอ่านได้ที่ 517 นาโนเมตร กิจกรรมไล่ที่คำนวณได้จากสมการต่อไปนี้
การแปล กรุณารอสักครู่..