Three LAB strains (AC-1, AC-5 and A

Three LAB strains (AC-1, AC-5 and AC-6) were selected based on the results of the freeze challenge and were considered as potential inhibitors of the chosen target pathogenic microorganisms (Table 1). These strains could potentially produce bacteriocin or bacteriocin-like substances with antimicrobial activity. Target pathogens were chosen on the basis of their notable deleterious influence on the safety of food products. The presumed LAB strains were cultured overnight in MRS broth at 37 °C. Cells were then removed by centrifuging at 9000 g for 15 min at 4 °C. To rule out any inhibition due to pH reduction caused by organic acid production, the supernatant was adjusted to pH 6.0 with sterilized 2.5 mole/l NaOH. Later, the supernatant was filtered through a syringe filter with a pore size of 0.22 µm (Merck Millipore) and maintained in sterile conditions. The screening for antimicrobial activity was carried out according to Vaconcelos, Gomes de Andrade Lima, and Torres Calazans (2010) with some modifications. The cell-free supernatants were treated by addition of a sterile solution of catalase (Sigma) (1 mg/ml) for 30 min to eliminate any possible inhibitory action of hydrogen peroxide. They were then added at the same volume to MH (Mueller–Hinton) (Acumedia) broth inoculated with 10% (v/v) of a diluted 1:10 (v/v) overnight culture (37 °C) of the target pathogenic strains. This extract was placed into a 96-well plate, and the inhibitory growth test was measured after 3 and 6 h of growth at 37 °C using a detection absorbance reader microplate spectrophotometer model PowerWave XS at 630 nm (Biotek, Winooski, VT, USA). Tests were performed in duplicate, and the percentage of growth inhibition was calculated using the following equation:

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สามสายพันธุ์ห้องปฏิบัติการ (AC 1, AC-5 และ AC 6) เลือกตามผลลัพธ์ของความท้าทายหยุด และได้ถือเป็น inhibitors เป็นไปได้ของการเลือกเป้าหมายจุลินทรีย์ก่อโรค (ตารางที่ 1) สายพันธุ์เหล่านี้ไม่อาจผลิต bacteriocin หรือสาร bacteriocin เหมือนกับกิจกรรมจุลินทรีย์ โรคเป้าหมายได้เลือกตามอิทธิพลสุดโดดเด่นในด้านความปลอดภัยของผลิตภัณฑ์อาหาร สายพันธุ์แล็บ presumed อยู่อ่างค้างคืนในซุป MRS ที่ 37 องศาเซลเซียส เซลล์แล้วถูกลบ โดย centrifuging ที่ g 9000 สำหรับ 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ออกเพื่อยับยั้งการใด ๆ เนื่องจากการลดค่า pH ที่เกิดจากการผลิตกรดอินทรีย์ supernatant ถูกปรับให้ค่า pH 6.0 มี sterilized 2.5 โมล/l NaOH ภายหลัง supernatant มีกรองผ่านตัวกรองเข็มขนาด 0.22 µm (เมอร์คมาก) รูขุมขน และรักษาสภาพฆ่าเชื้อ ตรวจกิจกรรมจุลินทรีย์ถูกดำเนินการตาม Vaconcelos ม่ายูโกมีส de Andrade และ Calazans ทอร์เรส (2010) กับปรับเปลี่ยนบางอย่าง Supernatants ฟรีเซลล์ถูกถือ โดยเพิ่มโซลูชันของ catalase (ซิกมา) (1 mg/ml) ใส่ใน 30 นาทีเพื่อกำจัดการกระทำลิปกลอสไขใด ๆ เป็นไปได้ของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ พวกเขาถูกเพิ่มในไดรฟ์ข้อมูลเดียวกันกับ MH (เลอร์ – Hinton) (Acumedia) ซุป inoculated กับ 10% (v/v) แตกออก 1:10 (v/v) นอนวัฒนธรรม (37 ° C) ของสายพันธุ์อุบัติของเป้าหมาย สารสกัดนี้มีอยู่ในแผ่นดี 96 และการทดสอบการเจริญเติบโตของลิปกลอสไขถูกวัดจาก 3 และ 6 h ของการเติบโตที่ 37 ° C ใช้ตรวจ absorbance อ่าน microplate เครื่องทดสอบกรดด่างแบบ PowerWave XS ที่ 630 nm (Biotek, Winooski, VT สหรัฐอเมริกา) ได้ดำเนินการทดสอบในซ้ำ และมีคำนวณเปอร์เซ็นต์การยับยั้งการเจริญเติบโตใช้สมการต่อไปนี้:

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สามสายพันธุ์ LAB (AC-1, AC-5 และ AC-6) ได้รับการคัดเลือกขึ้นอยู่กับผลของความท้าทายแช่แข็งและได้รับการพิจารณาเป็นสารยับยั้งที่มีศักยภาพของจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคเป้าหมายได้รับการแต่งตั้ง (ตารางที่ 1) สายพันธุ์เหล่านี้อาจจะผลิต bacteriocin หรือสาร bacteriocin เหมือนที่มีฤทธิ์ต้านจุลชีพ เชื้อโรคเป้าหมายถูกเลือกบนพื้นฐานของการมีอิทธิพลต่ออันตรายของพวกเขาโดดเด่นในเรื่องความปลอดภัยของผลิตภัณฑ์อาหาร สายพันธุ์ LAB สันนิษฐานว่าถูกเลี้ยงค้างคืนในอาหาร MRS broth ที่อุณหภูมิ 37 ° C เซลล์ที่ถูกลบออกไปแล้วโดยการปั่นแยกที่ 9000 กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 ° C ที่จะออกกฎการยับยั้งใด ๆ เนื่องจากการลดลงของค่าความเป็นกรดที่เกิดจากการผลิตกรดอินทรีย์ใสได้รับการปรับให้มีค่า pH 6.0 ที่มีการฆ่าเชื้อ 2.5 โมล / ลิตร NaOH ต่อมาใสถูกกรองผ่านตัวกรองเข็มฉีดยาที่มีขนาดรูขุมขนของ 0.22 ไมครอน (เมอร์ค) และเก็บรักษาไว้ในสภาพปลอดเชื้อ คัดกรองฤทธิ์ต้านจุลชีพได้ดำเนินการตาม Vaconcelos, Gomes de Andrade ลิมาและตอร์เร Calazans (2010) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง supernatants ปราศจากเซลล์ได้รับการรักษาโดยนอกเหนือจากการแก้ปัญหาที่ผ่านการฆ่าเชื้อของ catalase (Sigma) (1 mg / ml) เป็นเวลา 30 นาทีเพื่อขจัดยับยั้งการกระทำใด ๆ ที่เป็นไปได้ของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ พวกเขาถูกเพิ่มแล้วในปริมาณเดียวกันกับ MH (Mueller-Hinton) (Acumedia) น้ำซุปเชื้อด้วย 10% (v / v) เจือจาง 1:10 (v / v) วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืน (37 ° C) ของเป้าหมายที่ทำให้เกิดโรค สายพันธุ์ สารสกัดนี้ถูกวางลงในแผ่น 96 ดีและการเจริญเติบโตของการทดสอบการยับยั้งวัดที่ 3 และ 6 ชั่วโมงของการเจริญเติบโตที่อุณหภูมิ 37 ° C โดยใช้การตรวจสอบการดูดกลืนแสงอ่าน microplate สเปกรุ่น POWERWAVE XS ที่ 630 นาโนเมตร (Biotek, นุ, VT, สหรัฐอเมริกา ) การทดสอบได้ดำเนินการในที่ซ้ำกันและร้อยละของการยับยั้งการเจริญเติบโตที่คำนวณได้จากสมการต่อไปนี้:

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 สายพันธุ์ ( ac-1 Lab , และ AC ac-6 ) ได้ถูกเลือกขึ้นอยู่กับผลของตรึงความท้าทายและถือว่าเป็นสารยับยั้งที่มีศักยภาพของการเลือกเป้าหมาย เชื้อโรค จุลินทรีย์ ( ตารางที่ 1 ) สายพันธุ์เหล่านี้อาจจะผลิตต่อหรือต่อ เช่น สารที่มีฤทธิ์ต้านจุลชีพ .เชื้อโรคเป้าหมายถูกเลือกบนพื้นฐานของอำนาจของพวกเขาคงเด่นในความปลอดภัยของผลิตภัณฑ์อาหาร สันนิษฐานแล็บเพาะเลี้ยงเชื้อในอาหารเหลว MRS ค้างคืนที่ 37  ° C เซลล์ถูกเอาออกโดยวรรณนาที่ 9000   G 15   นาทีที่ 4  ° C ออกกฎใด ๆเนื่องจาก pH ลดการยับยั้งที่เกิดจากการผลิตกรดอินทรีย์ เพื่อนำปรับ pH 6.0 กับฆ่าเชื้อ 25  โมล / ลิตร NaOH ต่อมา นำถูกกรองผ่านตัวกรองที่มีขนาดรูพรุนของเข็ม 0.22  µ M ( เมอร์คมิลลิพอร์ ) และเก็บรักษาในสภาพปลอดเชื้อ การคัดกรองฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ได้ดำเนินการตาม vaconcelos Gomes เดอ อันดราเด้ , ลิม่า และ ตอร์เรส calazans ( 2010 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนการสังเคราะห์ supernatants ได้รับการรักษาโดยการแก้หมันของคาตาเลส ( ซิกม่า ) ( 1   mg / ml ) 30  มินเพื่อกำจัดใด ๆที่เป็นไปได้ยับยั้งการกระทำของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ จากนั้นเพิ่มที่ปริมาณเดียวกันกับ MH ( Mueller ( เด็ก ) ( acumedia ) น้ำซุปที่ใส่ 10% ( v / v ) เจือจาง 1 : 10 ( v / v ) วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืน ( 37  ° C ) เป้าหมายของเชื้อโรคสายพันธุ์สารสกัดนี้จะถูกวางไว้ใน 96 ดีจาน และแบบทดสอบวัดการเจริญหลัง 3 และ 6   H ของการเจริญเติบโตที่ 37  ° C โดยใช้แบบจำลองเครื่องอ่านค่าการดูดกลืนแสงตรวจจับพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย powerwave XS ที่ 630   nm ( biotek Winooski , VT , USA ) ทดสอบในที่ซ้ำกัน และร้อยละของการยับยั้งการเจริญเติบโตคำนวณได้โดยใช้สมการต่อไปนี้