Portions of the three mitochondrial

Portions of the three mitochondrial genes were amplified and sequenced: the 12S ribosomal DNA (rDNA) with the primers ly12s-F and ly12s-R, the 16S rDNA gene with the primers ly16s-F and ly16s-R and cytochrome c oxidase subunit 3 (cox3) with the primers ly cox3-F and ly cox3-R (Table 2). PCR reactions (25 μl) were performed in 2 mM of MgCl2; 2.5 μM of each primer; 2.5 μl of 10× PCR buffer; 0.2 μM each of dNTP, 1.25 U of Taq DNA polymerase (TAKARA); and 1 μl of DNA sample in a thermocycler under the following conditions: an initial denaturation at 94 °C for 4 min; then 33 cycles of 94 °C for 30 s (denaturation), 56 °C (for 12S, 16S and pcox3) for 30 s (annealing) and 72 °C for 45 s (extension); followed by a final extension at 72 °C for 6 min. Following PCR, each product (5 μl) was examined by 1% agarose gel electrophoresis to validate the amplification efficiency. Amplified fragments were purified and sequenced by the Shanghai Sangon Biological Engineering Technology & Service Co. Ltd.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บางส่วนของทั้งสามยีนยลถูกขยายและติดใจ: 12s โซมอลดีเอ็นเอ (rDNA) ที่มีไพรเมอร์ ly12s-F และ ly12s-r, 16s rDNA ยีนด้วยไพรเมอร์ ly16​​s-F และ ly16​​s-r และ cytochrome oxidase subunit ค 3 ( cox3) กับไพรเมอร์เหมือน cox3-F และเหมือน cox3-r (ตารางที่ 2) pcr ปฏิกิริยา (25 ไมโครลิตร) ได้ดำเนินการใน 2 มิลลิเมตรของ MgCl2; 2.5 ไมโครเมตรของแต่ละไพรเมอร์; 2.5 ไมโครลิตรจาก 10 ×บัฟเฟอร์ pcr; 02 ไมโครเมตรแต่ละ dntp 1.25 u ของ taq dna โพลิเมอร์ (TAKARA); และ 1 ไมโครลิตรของตัวอย่างดีเอ็นเอใน thermocycler ภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 นาทีแล้ว 33 รอบ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 s (denaturation) 56 ° C (เพื่อ 12s, 16s และ pcox3) เป็นเวลา 30 วินาที (หลอม) และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 วินาที (ส่วนต่อขยาย); ตามด้วยนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 นาที ต่อไปนี้ pcr,แต่ละผลิตภัณฑ์ (5 ไมโครลิตร) ถูกตรวจสอบโดย 1% เจล agarose ข่าวคราวในการตรวจสอบประสิทธิภาพของเครื่องขยายเสียง ชิ้นส่วนขยายและทำให้บริสุทธิ์และติดใจโดยเซี่ยงไฮ้ Sangon เทคโนโลยีวิศวกรรมชีวภาพ&บริการร่วม จำกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บางส่วนของยีน mitochondrial สามได้ขยาย และเรียงลำดับ: การ 12S ribosomal DNA (rDNA) ไพรเมอร์ ly12s-F และ ly12s-R ยีน rDNA 16S กับที่ไพรเมอร์ ly16s-F และ ly16s R และ cytochrome c oxidase ย่อย 3 (cox3) กับไพรเมอร์ลี cox3-F และลี cox3-R (ตารางที่ 2) ปฏิกิริยา PCR (25 μl) ได้ดำเนินการใน 2 มม.ของ MgCl2 ΜM 2.5 แต่ละพื้น Μl 2.5 10 × PCR บัฟเฟอร์ 02 ΜM ละของ dNTP, 1.25 U ของ Taq DNA พอลิเมอเรส (TAKARA); และ μl 1 ของดีเอ็นเอตัวอย่างใน thermocycler ภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้: denaturation เป็นเริ่มต้นที่ 94 ° C สำหรับ 4 นาที แล้ว 33 วงจรของ 94 ° C สำหรับ 30 s (denaturation), 56 ° C (สำหรับ 12S, 16S และ pcox3) สำหรับ 30 s (การอบเหนียว) และ 72 ° C สำหรับ 45 s (นามสกุล); ตาม ด้วยส่วนขยายที่ 72 ° C สำหรับ 6 นาทีสุดท้าย วิธี PCR แต่ละผลิตภัณฑ์ (5 μl) ถูกตรวจสอบ โดย electrophoresis เจล 1% agarose เพื่อตรวจสอบประสิทธิภาพการขยาย เอาต์ได้บริสุทธิ์ และเรียงลำดับตาม&เซี่ยงไฮ้ Sangon ชีวภาพวิศวกรรมบริการ จำกัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ส่วนต่างๆของสาม mitochondrial ยีนแอมพลิฟายและมีอักษรเรียงลำดับ\: 12 S ribosomal ดีเอ็นเอ( rdna )พร้อมด้วยที่ primers Ly 12 S - F และโดยอาการ 12 S - R ,ที่ 16 S rdna ยีนพร้อมด้วยที่ primers Ly 16 S - F และโดยอาการ 16 S - R และ cytochrome C oxidase subunit 3 ( Cox 3 )พร้อมด้วย primers Ly Cox 3 - F และโดยอาการ Cox 3 - R (ตารางที่ 2 ) ปฏิกิริยา pcr ( 25 μl )ได้ดำเนินการใน 2 มม.ของ mgcl 22.5 μ m ของเชื้อปะทุแต่ละ 2.5 μl ของบัฟเฟอร์ pcr 10 × 0 .2 μ m แต่ละครั้งของ dntp , 1.25 U ของดีเอ็นเอ taq polymerase ( takara );และ 1 μl ของตัวอย่างดีเอ็นเอใน thermocycler ภายใต้ เงื่อนไขต่อไปนี้:ที่เริ่มต้น denaturation ที่ 94 ° C สำหรับ 4 นาที;แล้ว 33 รอบ 94 ° C 30 S ( denaturation ), 56 ° C ( 12 S , 16 S และ pcox 3 )สำหรับ 30 S ( annealing )และ 72 ° C 45 S (ส่วนขยาย),ตามด้วยการขยายเวลาครั้งสุดท้ายที่ 72 ° C สำหรับ 6 นาทีต่อไปนี้ pcr ,แต่ละ ผลิตภัณฑ์ ( 5 μl )ก็ถูกตรวจสอบโดย electrophoresis agarose เจล 1% ในการตรวจสอบ ประสิทธิภาพ การขยายสัญญาณเสียง ไม่มีแอมพลิฟายบริสุทธิ์และอักษรเรียงลำดับ\โดย Shanghai sangon เทคโนโลยีวิศวกรรม ชีวภาพ . co . th &บริการที่จำกัด