Frozen isolates were inoculated on

Frozen isolates were inoculated on nutrient agar plates
and incubated at 30°C for 24 h. Half a colony was transferred
into an Eppendorf tube containing 200 ll sterile
water. The tubes were placed for 15 min in a water bath
at 100°C. The detection of the ces cluster was tested
with two different primer pairs, under the conditions
described by Ehling-Schulz et al. (2004, 2005). The
primers EM1F (50-GACAAGAGAAATTTCTACGAGC
AAGTACAAT-30) and EM1R (50-GCAGCCTTCCAAT
TACTCCTTCTGCCACAGT-30) amplified a fragment of
635 bp from emetic B. cereus DNA (Ehling-Schulz et al.
2004).The primers cesF1 (50-GGTGACACATTATCATA
TAAGGTG-30) and cesR2 (50-GTAAGCGAACCTGTCTG
TAACAACA-30) amplified a fragment of 1271 bp from
emetic B. cereus DNA (Ehling-Schulz et al. 2005). The
final PCR mixture contained 12
5 ll of Maxima Hot Start Green PCR Master Mix (Fisher Scientific, Erembodegem-
Aalst, Belgium), 1 ll of 50 ng DNA template, 0
25 ll of
100 pmol of each primer from the set and finally adjusted
to 25 ll with water. Thermal cycling was carried out in a
PCR thermocycler (Veriti96-Well Thermal Cycler; Applied
Biosystems, Gent, Belgium) with the following run: a
starting cycle of 5 min at 95°C, followed by 30 cycles of
15 s at 95°C, 30 s at 58°C and 30 s at 72°C, and a final
extension of 8 min at 72°C. Ten microlitres of the PCR
products were separated on 1
5% agarose gel (100 V,
45 min) in TBE 1X (Sigma Aldrich, Diegem, Belgium)
together with the DNA Smart Ladder SF molecular weight
marker (Eurogentec, Seraing, Belgium). Gels were stained
with ethidium bromide (Sigma Aldrich) and digitized
using a gel imager (Proxima, Illkirch, France) under UV
light.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกแช่แข็งถูก inoculated บนแผ่นวุ้นสารอาหารและรับการกกที่ 30° C สำหรับ 24 h. ครึ่งอาณานิคมถูกถ่ายโอนลงในหลอด Eppendorf ประกอบด้วย 200 จะเป็นหมันน้ำ หลอดถูกวางในอ่างน้ำ 15 นาทีที่ 100 องศาเซลเซียส ทดสอบการตรวจสอบของคลัสเตอร์งาน cesกับรองพื้นต่างกันคู่ที่สอง ภายใต้เงื่อนไขอธิบายโดย Ehling ยนต์ et al. (2004, 2005) การไพรเมอร์ EM1F (50-GACAAGAGAAATTTCTACGAGCAAGTACAAT-30) และ EM1R (50-GCAGCCTTCCAATTACTCCTTCTGCCACAGT-30) ขยายส่วนของ635 bp จาก emetic B. cereus DNA (Ehling ยนต์ et al2004) CesF1 ไพรเมอร์ (50-GGTGACACATTATCATATAAGGTG-30) และ cesR2 (50-GTAAGCGAACCTGTCTGTAACAACA-30) ขยายส่วนของ bp 1271 จากemetic B. cereus ที่ดีเอ็นเอ (Ehling ยนต์ et al. 2005) การสุดท้ายผสม PCR อยู่ 12 5 ll ของ Maxima เริ่มเขียว PCR หลักผสมร้อน (วิทยาศาสตร์ Fisher, Erembodegem-อัลท์ เบลเยี่ยม), 1 ll 50 ฉบับดีเอ็นเอต้นแบบ 0 25 ll ของpmol 100 แต่ละพื้นจากการตั้งค่า และปรับปรุงในที่สุด25 ll ด้วยน้ำ ความร้อนขี่จักรยานถูกดำเนินการPCR thermocycler (ดี Veriti96 ความร้อน Cycler นำไปใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ Gent เบลเยียม) กับการทำงานต่อไปนี้: การเริ่มรอบ 5 นาทีที่ 95° C ตาม ด้วย 30 รอบ15 s 95° c, 30 s 58° C และ 30 s ที่ 72° C และเป็นครั้งสุดท้ายส่วนขยายของ 8 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียส Microlitres สิบของการ PCRผลิตภัณฑ์แยกตัวบน 1 5% agarose เจล (100 V45 นาที) ใน TBE 1 X (Sigma Aldrich, Diegem เบลเยียม)พร้อมกับน้ำหนักโมเลกุลดีเอ็นเอสมาร์ทบันได SFเครื่องหมาย (Eurogentec, Seraing เบลเยียม) ภาพเจมีโบรไมด์ ethidium (Sigma Aldrich) และดิจิตอลใช้ imager เป็นเจล (Proxima ได้ ฝรั่งเศส) ได้ภายใต้รังสียูวีแสง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไอโซเลทแช่แข็งถูกเชื้อบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อสารอาหาร
และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ครึ่งหนึ่งเป็นอาณานิคมถูกย้าย
เข้าไปในหลอด Eppendorf มี 200 LL ผ่านการฆ่าเชื้อ
น้ำ หลอดถูกวางไว้เป็นเวลา 15 นาทีในอ่างน้ำ
ที่อุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียส การตรวจสอบของคลัสเตอร์งาน CES ได้รับการทดสอบ
กับสองคู่ไพรเมอร์ที่แตกต่างกันภายใต้เงื่อนไขที่
อธิบายโดย Ehling-Schulz, et al (2004, 2005)
ไพรเมอร์ EM1F (50 GACAAGAGAAATTTCTACGAGC
AAGTACAAT-30) และ EM1R (50 GCAGCCTTCCAAT
TACTCCTTCTGCCACAGT-30) ขยายเศษ
635 bp จากอาเจียน B. cereus ดีเอ็นเอ (Ehling-Schulz et al.
2004) ได้โดยง่ายไพรเมอร์ cesF1 (50 GGTGACACATTATCATA
TAAGGTG-30) และ cesR2 (50 GTAAGCGAACCTGTCTG
TAACAACA-30) ขยายส่วนของ BP 1271 จาก
ดีเอ็นเอทำให้อาเจียน B. cereus (Ehling-Schulz et al. 2005)
ส่วนผสม PCR สุดท้ายมี 12? 5 LL ของ Maxima เริ่มร้อนเขียว PCR โท Mix (ฟิชเชอร์วิทยาศาสตร์ Erembodegem-
Aalst, เบลเยียม) 1 LL 50 ng แม่แบบดีเอ็นเอ 0? 25 LL ของ
100 pmol ของแต่ละไพรเมอร์จากตลาดหลักทรัพย์แห่งประเทศไทยและ ในที่สุดก็มีการปรับ
ถึง 25 LL ด้วยน้ำ การขี่จักรยานการระบายความร้อนได้ดำเนินการใน
PCR thermocycler (Cycler ความร้อน Veriti96-Well; Applied
Biosystems, Gent, เบลเยียม) กับการทำงานดังต่อไปนี้
วงจรเริ่มต้นที่ 5 นาทีที่ 95 ° C ตามด้วย 30 รอบของ
15 วินาทีที่ 95 ° C , 30 วินาทีที่ 58 องศาเซลเซียสและ 30 วินาทีที่ 72 ° C และสุดท้าย
ส่วนขยายของ 8 นาทีที่ 72 ° C สิบ microlitres ของ PCR
ผลิตภัณฑ์ถูกแยกออกเมื่อวันที่ 1? 5% เจล agarose (100 V,
45 นาที) ใน TBE 1X (ซิกม่าดิช Diegem ในเบลเยียม)
ร่วมกับดีเอ็นเอของสมาร์ทบันได SF น้ำหนักโมเลกุล
เครื่องหมาย (Eurogentec, Seraing, เบลเยียม) . เจลมีการย้อม
ด้วย ethidium bromide (ซิกม่าดิช) และดิจิทัล
โดยใช้เจลอิมเมจ (พร็อกซิ Illkirch, ฝรั่งเศส) ภายใต้ยูวี
แสง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แช่แข็งเชื้อไอโซเลทบนแผ่น NUMB3RSบ่มที่ 30 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมงครึ่งอาณานิคมถูกโอนเป็นหลอดเพนดอร์ฟที่มี 200 จะเป็นหมันน้ำ หลอดอยู่ 15 นาทีในการอาบน้ำที่ 100 องศา C . การตรวจหางาน CES กลุ่มทดสอบกับสองคู่ไพรเมอร์ที่แตกต่างกัน ภายใต้เงื่อนไขอธิบายโดย ehling ชูลซ์ et al . ( 2004 , 2005 ) ที่ไพรเมอร์ em1f ( 50-gacaagagaaatttctacgagcaagtacaat-30 ) และ em1r ( 50-gcagccttccaattactccttctgccacagt-30 ) ส่วนของอัตราถ้าเบสจะมี B . cereus DNA ( ehling ชูลซ์ et al .2004 ) ไพรเมอร์ cesf1 ( 50-ggtgacacattatcatataaggtg-30 ) และ cesr2 ( 50-gtaagcgaacctgtctgtaacaaca-30 ) ขยายส่วนของดูเหมือนเบสB . cereus จะมีดีเอ็นเอ ( ehling ชูลซ์ et al . 2005 ) ที่ส่วนผสมวิธีสุดท้ายที่มีอยู่ 125 จะของ Maxima ร้อนเริ่มต้นสีเขียว PCR Master Mix ( ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ erembodegem -aalst , เบลเยียม ) 1 จะ 50 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ , 025 จะของ100 pmol ของแต่ละชุด และก็ปรับสีรองพื้นจาก25 จะอยู่กับน้ำ จักรยานถูกหามออกในความร้อนPCR เทอร์มอไซเคล ์ ( veriti96 ดีความร้อนรอบ ; ใช้ซึ่ง Gent , เบลเยียม ) , เรียกต่อไปนี้ :เริ่มรอบ 5 นาทีที่ 95 องศา C ตามด้วย 30 รอบ15 s ที่ 95 องศา C 30 วินาทีที่ 58 องศา C และ 30 s 72 ° C , และสุดท้ายส่วนขยายของ 8 นาทีที่ 72 องศา สิบ microlitres ของดีเอ็นเอผลิตภัณฑ์แยก 15 % เจล ( 100 V ,45 นาที ) ในทีบี 1x ( ซิกม่า Aldrich Diegem เบลเยียม )ด้วยกันกับดีเอ็นเอบันได SF น้ำหนักโมเลกุลสมาร์ทเครื่องหมาย ( eurogentec ไพรเมต , เบลเยียม ) เจลถูกเปรอะเปื้อนกับทิเดียมโบรไมด์ ( ซิกม่า Aldrich ) และดิจิตอลใช้เจล Imager ( Proxima illkirch , ฝรั่งเศส ) ภายใต้รังสีเหนือม่วงแสง