Adhesion assays was performed accor

Adhesion assays was performed according to a previously described method [21] with some modifications. Toxigenic C. difficile cells (0.1 mL; 2  106 cells; MOI ¼ 10) were inoculated onto 2  105 Caco-2 cells per well of 24-well plates and incubated for 2 h at 37
C with 5% CO2. Plates were then washed three times with PBS, followed by the addition of 0.1 mL of sterile 1% Tween 20 to detach the C. difficile cells that had adhered to the Caco-2 cells.The adherent C. difficile cells were enumerated using pre-reduced cycloserine cefoxitin mannitol agar (CCMA) EX plates (Nissui Pharmaceutical Co. Ltd, Tokyo, Japan). To estimate the degree of inhibition of C. difficile adhesion to Caco-2 cells caused by serum IgG and intestinal IgA, 0.01 mL of one of immunized mouse serum (ELISA titer ¼ 4000), control mouse serum (ELISA titer ¼ 20),immunized mouse intestinal fluid (ELISA titer ¼ 150), and control mouse intestinal fluid (ELISA titer ¼ 20) was mixed with the bacterial suspension, and incubated at room temperature for 1 h with shaking prior to inoculation in the intestinal cells.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยึดเกาะ assays ที่ดำเนินการตามวิธีอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [21] พร้อมปรับเปลี่ยนบางอย่าง Toxigenic C. difficile เซลล์ (0.1 มล. เซลล์ 2 106 อย¼ 10) inoculated ลง 2 105 Caco 2 เซลล์ต่อดีดี 24 แผ่น และ incubated สำหรับ h 2 ที่ 37 C กับ 5% CO2 แผ่นถูกแล้วล้างสามครั้ง ด้วย PBS ตาม ด้วยการเพิ่ม 0.1 มล.ใส่ 1% Tween 20 การแยกเซลล์ C. difficile ที่ได้ปฏิบัติตามเซลล์ Caco-2เซลล์นฤมล C. difficile ได้ระบุใช้ agar mannitol cefoxitin cycloserine ล่วงหน้าลดลง (CCMA) อดีตแผ่น (บริษัทนิสซุย Pharmaceutical Co. Ltd โตเกียว ญี่ปุ่น) การประเมินระดับของการยับยั้งของ C. difficile ยึดเกาะเซลล์ Caco-2 เกิดจากเซรั่ม IgG และอิกะลำไส้ 0.01 mL เซรั่ม immunized เมาส์หนึ่ง (ELISA titer ¼ 4000), ควบคุมเมาส์ซีรั่ม (ELISA titer ¼ 20), immunized เมาส์ลำไส้น้ำมัน (ELISA titer ¼ 150), และควบคุมเมาส์ลำไส้น้ำมัน (ELISA titer ¼ 20) ถูกผสมกับการระงับเชื้อแบคทีเรียและ incubated ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ h 1 กับสั่นก่อน inoculation ในเซลล์ลำไส้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจยึดติดได้ดำเนินการตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [21] ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง Toxigenic C. difficile เซลล์ (0.1 มิลลิลิตร;? 2 106 เซลล์; MOI ¼ 10) ถูกเชื้อเข้าสู่ 2 หรือไม่? 105 Caco-2 เซลล์ต่อกันดีของแผ่น 24 หลุมและบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสด้วย CO2 5% แผ่นถูกล้างแล้วสามครั้งด้วยพีบีเอส, ตามด้วยนอกเหนือจาก 0.1 มิลลิลิตรผ่านการฆ่าเชื้อ 20% Tween 1 ถึงแยก C. difficile เซลล์ที่ได้ยึดติดกับ Caco-2 cells.The สานุศิษย์ C. difficile เซลล์ถูกแจกแจงใช้ก่อน ลด cycloserine CEFOXITIN mannitol วุ้น (CCMA) แผ่น EX (Nissui ยา จำกัด , โตเกียว, ญี่ปุ่น) เพื่อประเมินระดับของการยับยั้งการยึดเกาะ C. difficile เพื่อ Caco-2 เซลล์ที่เกิดจากการ IgG ซีรั่มและลำไส้ IgA, 0.01 มิลลิลิตรของหนึ่งในซีรั่มภูมิคุ้มกันในหนูขาว (titer ELISA ¼ 4000), ซีรั่มควบคุมเมาส์ (titer ELISA ¼ 20), วัคซีน เมาส์ของเหลวในลำไส้ (titer ELISA ¼ 150) และการควบคุมของเหลวในลำไส้เมาส์ (titer ELISA ¼ 20) ผสมกับการระงับแบคทีเรียและบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับสั่นก่อนที่จะมีการฉีดวัคซีนในเซลล์ลำไส้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การพยายามแสดงตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้วิธี [ 21 ] กับการปรับเปลี่ยน toxigenic C difficile เซลล์ ( 0.1 ml 2  106 เซลล์ มอย¼ 10 ) ปลูกเชื้อลงบน 2  105 caco-2 เซลล์ต่อดี 24 ดีแผ่นและบ่ม 2 ชั่วโมง 37
องศาเซลเซียสคาร์บอนไดออกไซด์ 5% แผ่น ) จากนั้นล้างสามครั้งกับ PBS , ตามด้วยการเพิ่ม 0.1 มิลลิลิตรหมัน 1 tween 20 เพื่อถอด Cdifficile เซลล์ที่ยึดติดกับเซลล์ caco-2 . พลพรรค . difficile เซลล์มีการระบุการใช้ก่อนลดการบริหารเสริมมาตแมนนิทอล ( ccma ) แผ่น EX ( nissui เภสัชกรรม Co . Ltd , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) เพื่อประเมินระดับของการยับยั้งการยึดเกาะของ difficile caco-2 เซลล์เกิดจาก IgG และ IgA ใน 0.01 มิลลิลิตร ฉีดเซรั่มของเมาส์ ( ELISA ชนิด¼ 4000 )เซรั่มควบคุมเมาส์ ( ELISA ชนิด¼ 20 ) , เมาส์ ( ELISA ชนิดฉีดของเหลวในลำไส้¼ 150 ) , และเมาส์ควบคุมของเหลวในลำไส้ ( ELISA ชนิด¼ 20 ) ผสมกับการระงับแบคทีเรีย และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง เขย่าก่อนใช้ในเซลล์ลำไส้