- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2. Materials and methods2.1. Raw ma
2. Materials and methods
2.1. Raw materials and chemicals
A. platensis powder (89.27 ± 0.16 g/100 g dry matter) was purchased
from Bioalgal Society (Mahdia, Tunisia). Analytical grade
imidazole (C3H4N2), acetic acid, sodium azide (NaN3), sodium
hydroxide (NaOH), and hydrochloric acid (HCl) were purchased
from Sigma Aldrich Chimie (Lyon, France).
2.2. Extraction of A. platensis proteins
A. platensis protein isolate (API) was extracted from algal powder
by dissolution in imidazole/acetate buffer (0.005 mol/L, pH
10). After centrifugation for 30 min at 25 C and 10,000g, the
supernatant containing soluble proteins was collected (supernatant
A). The pellet was dissolved again in the same buffer and
centrifuged under the same conditions and the supernatant was
collected (supernatant B). Both supernatants A and B were mixed
and adjusted at pH 3 with 0.1 mol/L HCl. The precipitated proteins
were then collected by centrifugation (10,000g, 30 min, 25 C)
and dried under a laminar flow hood overnight at room temperature.
The protein isolate residual moisture content after drying
was 6.39 ± 0.24 g/100 g of API. The other components were:
proteins (69.62 ± 0.75 g/100 g of dry matter); ash (17.79 ±
0.44 g/100 g of dry matter); carbohydrates (8.90 ± 0.88 g/100 g of
dry matter), and fats (3.70 ± 0.35 g/100 g of dry matter). All these
analyses were determined according to AOAC International (1995).
2.3. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis
(SDS–PAGE)
SDS–PAGE was performed by the method of Laemmli (1970),
using a 12% polyacrylamide gel and a Bio-Rad apparatus (Mini-
Protean Tetra Cell). Proteins were stained with Coomassie Brilliant
Blue R-250. The SDS–PAGE analysis of proteins was carried out in
the presence and absence of beta-mercaptoethanol as reducing
agent.
2.4. Fluorescence and UV spectra
The extracted API was suspended at a 1% (w/w) concentration
in imidazole/acetate buffer (0.005 mol/L) adjusted to suitable pH
values ranging from 3 to 10. The solutions were stirred for 2 h with
a magnetic stirrer until the proper hydration was reached and the
pH was adjusted by adding HCl (1 mol/L) or NaOH (1 mol/L). Fluorescence
spectra at 20 C were measured while stirring with a LS
55 spectrofluorometer (Perkin Elmer, France) equipped with FL
Winlab software. Excitation and emission wavelengths were
280 nm and 300–500 nm, respectively. UV absorption spectra at
20 C of API solutions (0.05% (w/w) in imidazole/acetate buffer
(0.005 mol/L, pH 10)), prepared in the same way as for the fluorescence
study, were measured from 200 nm to 350 nm with an
UV/Vis spectrophotometer (LIBRA, Biochrom, Cambridge, UK) in a
1 cm quartz cuvette against imidazole–acetate buffer (0.005 mol/
L, pH 10).
2.5. Zeta potential (ZP)
The zeta potential (f-potential) of extracted proteins was determined
using a Zetasizer NanoZS90 (Malvern Instruments, Malvern,
UK). The samples were diluted (0.5% (w/w)) with imidazole/acetate
buffer adjusted to the suitable pH value. The mean f-potential (ZP)
values (±SD (standard deviation)) were obtained from the
instrument.
2.6. Nitrogen solubility (NS)
Nitrogen solubility profile was determined according to
Nirmala et al. (1992). Briefly, samples of 1 g of API powder were
mixed with 10 mL of water, magnetically stirred for 10 min at
250 rpm at room temperature, and the suspension pH was
adjusted to 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, and 10 by addition of 0.1 mol/L
HCI or 0.1 mol/L NaOH. Then, the suspensions were magnetically
stirred at 250 rpm for 30 min at room temperature and centrifuged
at 8000g for 20 min. A 5 mL aliquot of the supernatant was used
to quantify the nitrogen content by the Kjeldahl method (conversion
factor: 6.25). The solubilized nitrogen was calculated and
expressed as a percentage of the total nitrogen.
2.7. Water absorption capacity (WAC)
The WAC of API was determined using the method described by
MacConnell, Eastwood, and Mitchell (1974) slightly modified. One
hundred milligrams of API were added to 10 mL of imidazole/acetate
buffer (0.005 mol/L) adjusted to pH 3, 7, or 10 in a 50 mL centrifuge
tube and stirred overnight at 4 C using a rotary shaker.
Then, the mixture was centrifuged at 1400g for 20 min and the
supernatant was removed by tilting the tube gently to avoid losing
proteins. WAC was expressed as g of absorbed water per 100 g of
sample.
2.8. Oil absorption capacity (OAC)
The OAC of API was measured using the method described by
Lin, Humbert, and Sosulski (1974) slightly modified. Fifteen milliliters
of corn oil were added to 0.5 g of API powder in a 50 mL centrifuge
tube and then stirred at 100 rpm at room temperature
during 30 min using a rotary shaker. The obtained mixture was
centrifuged at 1600g for 25 min. After centrifugation, a part of
the oil was absorbed by proteins at the bottom of the tube, and
the other part remained free in the form of a clear layer at the
top of the tube. This free oil (not absorbed by the protein isolate)
was removed carefully by tilting the tube to get rid of the last oil
drop. OAC was expressed as g of oil held per 100 g of sample
2.1. Raw materials and chemicals
A. platensis powder (89.27 ± 0.16 g/100 g dry matter) was purchased
from Bioalgal Society (Mahdia, Tunisia). Analytical grade
imidazole (C3H4N2), acetic acid, sodium azide (NaN3), sodium
hydroxide (NaOH), and hydrochloric acid (HCl) were purchased
from Sigma Aldrich Chimie (Lyon, France).
2.2. Extraction of A. platensis proteins
A. platensis protein isolate (API) was extracted from algal powder
by dissolution in imidazole/acetate buffer (0.005 mol/L, pH
10). After centrifugation for 30 min at 25 C and 10,000g, the
supernatant containing soluble proteins was collected (supernatant
A). The pellet was dissolved again in the same buffer and
centrifuged under the same conditions and the supernatant was
collected (supernatant B). Both supernatants A and B were mixed
and adjusted at pH 3 with 0.1 mol/L HCl. The precipitated proteins
were then collected by centrifugation (10,000g, 30 min, 25 C)
and dried under a laminar flow hood overnight at room temperature.
The protein isolate residual moisture content after drying
was 6.39 ± 0.24 g/100 g of API. The other components were:
proteins (69.62 ± 0.75 g/100 g of dry matter); ash (17.79 ±
0.44 g/100 g of dry matter); carbohydrates (8.90 ± 0.88 g/100 g of
dry matter), and fats (3.70 ± 0.35 g/100 g of dry matter). All these
analyses were determined according to AOAC International (1995).
2.3. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis
(SDS–PAGE)
SDS–PAGE was performed by the method of Laemmli (1970),
using a 12% polyacrylamide gel and a Bio-Rad apparatus (Mini-
Protean Tetra Cell). Proteins were stained with Coomassie Brilliant
Blue R-250. The SDS–PAGE analysis of proteins was carried out in
the presence and absence of beta-mercaptoethanol as reducing
agent.
2.4. Fluorescence and UV spectra
The extracted API was suspended at a 1% (w/w) concentration
in imidazole/acetate buffer (0.005 mol/L) adjusted to suitable pH
values ranging from 3 to 10. The solutions were stirred for 2 h with
a magnetic stirrer until the proper hydration was reached and the
pH was adjusted by adding HCl (1 mol/L) or NaOH (1 mol/L). Fluorescence
spectra at 20 C were measured while stirring with a LS
55 spectrofluorometer (Perkin Elmer, France) equipped with FL
Winlab software. Excitation and emission wavelengths were
280 nm and 300–500 nm, respectively. UV absorption spectra at
20 C of API solutions (0.05% (w/w) in imidazole/acetate buffer
(0.005 mol/L, pH 10)), prepared in the same way as for the fluorescence
study, were measured from 200 nm to 350 nm with an
UV/Vis spectrophotometer (LIBRA, Biochrom, Cambridge, UK) in a
1 cm quartz cuvette against imidazole–acetate buffer (0.005 mol/
L, pH 10).
2.5. Zeta potential (ZP)
The zeta potential (f-potential) of extracted proteins was determined
using a Zetasizer NanoZS90 (Malvern Instruments, Malvern,
UK). The samples were diluted (0.5% (w/w)) with imidazole/acetate
buffer adjusted to the suitable pH value. The mean f-potential (ZP)
values (±SD (standard deviation)) were obtained from the
instrument.
2.6. Nitrogen solubility (NS)
Nitrogen solubility profile was determined according to
Nirmala et al. (1992). Briefly, samples of 1 g of API powder were
mixed with 10 mL of water, magnetically stirred for 10 min at
250 rpm at room temperature, and the suspension pH was
adjusted to 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, and 10 by addition of 0.1 mol/L
HCI or 0.1 mol/L NaOH. Then, the suspensions were magnetically
stirred at 250 rpm for 30 min at room temperature and centrifuged
at 8000g for 20 min. A 5 mL aliquot of the supernatant was used
to quantify the nitrogen content by the Kjeldahl method (conversion
factor: 6.25). The solubilized nitrogen was calculated and
expressed as a percentage of the total nitrogen.
2.7. Water absorption capacity (WAC)
The WAC of API was determined using the method described by
MacConnell, Eastwood, and Mitchell (1974) slightly modified. One
hundred milligrams of API were added to 10 mL of imidazole/acetate
buffer (0.005 mol/L) adjusted to pH 3, 7, or 10 in a 50 mL centrifuge
tube and stirred overnight at 4 C using a rotary shaker.
Then, the mixture was centrifuged at 1400g for 20 min and the
supernatant was removed by tilting the tube gently to avoid losing
proteins. WAC was expressed as g of absorbed water per 100 g of
sample.
2.8. Oil absorption capacity (OAC)
The OAC of API was measured using the method described by
Lin, Humbert, and Sosulski (1974) slightly modified. Fifteen milliliters
of corn oil were added to 0.5 g of API powder in a 50 mL centrifuge
tube and then stirred at 100 rpm at room temperature
during 30 min using a rotary shaker. The obtained mixture was
centrifuged at 1600g for 25 min. After centrifugation, a part of
the oil was absorbed by proteins at the bottom of the tube, and
the other part remained free in the form of a clear layer at the
top of the tube. This free oil (not absorbed by the protein isolate)
was removed carefully by tilting the tube to get rid of the last oil
drop. OAC was expressed as g of oil held per 100 g of sample
0/5000
2. วัสดุและวิธีการ2.1 การวัตถุดิบและสารเคมีร้านอ. platensis ผง (89.27 ± 0.16 กรัม/100 กรัมแห้งเรื่อง)จาก Bioalgal สังคม (Mahdia ตูนิเซีย) ชั้นประถมศึกษาปีที่วิเคราะห์อิมิดาโซล (C3H4N2), กรดอะซิติก โซเดียม azide (NaN3), โซเดียมซื้อไฮดรอกไซด์ (NaOH), และกรดไฮโดรคลอริก (HCl)จากซิก Aldrich Chimie (ลียง ฝรั่งเศส)2.2 การสกัดโปรตีน platensis อ.อ. platensis (API) โปรตีนที่สกัดจากผง algalโดยยุบในบัฟเฟอร์ acetate/อิ มิดาโซล (0.005 โมล/L ค่า pH10) หลังจาก centrifugation 30 นาทีที่ 25 C และ g 10000 การsupernatant ที่ประกอบด้วยโปรตีนละลายน้ำได้ (supernatant รวบรวมA) เม็ดถูกละลายอีกในบัฟเฟอร์ที่เดียวกัน และcentrifuged ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันและ supernatant ถูกรวบรวม (supernatant B) รวม supernatants ทั้ง A และ Bและปรับปรุงที่ pH 3 กับโมล 0.1 L HCl โปรตีน precipitatedถูกแล้วเก็บรวบรวม โดย centrifugation (10000 g, 30 นาที 25 C)และอบแห้งภายใต้ฮูด laminar ไหลข้ามคืนที่อุณหภูมิห้องโปรตีนแยกชื้นส่วนที่เหลือหลังจากการอบแห้งมี 6.39 ± 0.24 g/100 g ของ API มีส่วนประกอบอื่น ๆ:โปรตีน (69.62 ± 0.75 g/100 g ของแห้งเรื่อง); เถ้า (17.79 ±0.44 กรัม/100 กรัมแห้งเรื่อง); คาร์โบไฮเดรต (8.90 ± 0.88 g/100 g ของแห้งเรื่อง), และไขมัน (3.70 ± 0.35 g/100 g ของเรื่องแห้ง) ทั้งหมดนี้วิเคราะห์ได้กำหนดตามนานา AOAC (1995)2.3. โซเดียม dodecyl ซัลเฟตเจ polyacrylamide electrophoresis(SDS-หน้า)SDS-หน้าถูกดำเนินการ โดยวิธีการของ Laemmli (1970),ใช้เจ polyacrylamide 12% และเครื่องไบ-Rad (มินิ-Protean Tetra เซลล์) โปรตีนถูกสี ด้วย Coomassie ใสสีน้ำเงิน R-250 การวิเคราะห์องค์กร – หน้าโปรตีนถูกดำเนินการในสถานะการขาดงานของ beta-mercaptoethanol เป็นการลดตัวแทน2.4. fluorescence และ UV แรมสเป็คตราAPI แยกถูกระงับที่เข้มข้น 1% (w/w)ในบัฟเฟอร์ acetate/อิ มิดาโซล (0.005 โมล/L) ปรับ pH ที่เหมาะสมค่าตั้งแต่ 3 ถึง 10 โซลูชั่นได้ถูกกวนสำหรับ h 2 กับช้อนคนแม่เหล็กจนถึงไล่น้ำที่เหมาะสมและpH ถูกปรับปรุง โดยเพิ่ม HCl (1 โมล/L) หรือ NaOH (1 โมล/L) Fluorescenceแรมสเป็คตราที่ 20 C ถูกวัดขณะกวนกับ LS เป็น55 spectrofluorometer (เอลเมอเพอร์ ฝรั่งเศส) พร้อม FLWinlab ซอฟต์แวร์ มีความยาวคลื่นในการกระตุ้นและปล่อยก๊าซ280 nm และ 300 – 500 nm ตามลำดับ แรมสเป็คตราดูดซึมรังสียูวีที่20 C API โซลูชั่น (0.05% (w/w) ในบัฟเฟอร์ acetate/อิ มิดาโซล(0.005 โมล/L ค่า pH 10)), เตรียมเช่นเดียวกับ fluorescence ที่ศึกษา ถูกวัดจาก 200 nm ไป 350 nm มีการเครื่องทดสอบ UV/Vis (ตุล Biochrom เคมบริดจ์ สหราชอาณาจักร) กรดด่างในตัวซม. 1 ควอตซ์ cuvette กับบัฟเฟอร์ acetate-อิมิดาโซล (0.005 โมล /ลิตร pH 10)2.5. ซีตาศักยภาพ (ZP)กำหนดแคเธอรีนซีตามีศักยภาพ (f-ศักยภาพ) ของโปรตีนที่แยกใช้ Zetasizer NanoZS90 (เครื่องมัลเวิร์น มัลเวิร์นสหราชอาณาจักร) ตัวอย่างถูกแตกออก (0.5% (w/w)) ด้วยอิมิดา โซล/acetateบัฟเฟอร์ปรับค่า pH ที่เหมาะสม หมายความว่า f มีศักยภาพ (ZP)ค่า (±SD (ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน)) ได้รับจากการเครื่องมือ2.6. ไนโตรเจนละลาย (NS)กำหนดค่าไนโตรเจนละลายตามเนอมาลา et al. (1992) สั้น ๆ ตัวอย่าง 1 กรัมของผง API ได้ผสมกับ 10 mL ของน้ำ ชำระกวนสำหรับ 10 นาทีที่มี 250 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้อง และ pH ระงับปรับปรุง 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 และ 10 เพิ่ม 0.1 โมล/LHci หรือ 0.1 โมล/L NaOH แล้ว บริการได้ชำระกวนที่ 250 rpm ใน 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง และ centrifugedที่ g 8000 สำหรับ 20 นาที ส่วนลงตัว 5 mL ของ supernatant ถูกใช้การกำหนดปริมาณเนื้อหาไนโตรเจน โดยวิธี Kjeldahl (แปลงปัจจัย: 6.25) ไนโตรเจน solubilized คำนวณ และแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของไนโตรเจนทั้งหมด2.7 กำลังดูดซึมน้ำ (WAC)WAC API ถูกกำหนดโดยใช้วิธีอธิบายMacConnell อีสต์วูด และ Mitchell (1974) แก้ไขเล็กน้อย หนึ่งเพิ่มไป 10 mL ของอิมิดา โซล/acetate milligrams ร้อยของ APIบัฟเฟอร์ (0.005 โมล/L) ปรับ pH 3, 7 หรือ 10 ในเครื่องหมุนเหวี่ยงเป็น 50 mLหลอด และกวนข้ามคืนที่ 4 C ใช้เชคเกอร์หมุนแล้ว ส่วนผสมถูก centrifuged ที่ 1400 g สำหรับ 20 นาทีและsupernatant ถูกเอาออก โดยเอียงหลอดเบา ๆ เพื่อหลีกเลี่ยงการแพ้โปรตีน WAC ถูกแสดงเป็น g 100 g ของน้ำดูดซึมตัวอย่างการ2.8 กำลังดูดซึมน้ำมัน (OAC)OAC API ถูกวัดโดยใช้วิธีการอธิบายหลิน Humbert และ Sosulski (1974) แก้ไขเล็กน้อย Milliliters ห้าน้ำมันข้าวโพดถูกเพิ่ม 0.5 g ผง API ในเครื่องหมุนเหวี่ยงเป็น 50 mLหลอด และกวนแล้ว ที่ 100 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้องในช่วง 30 นาทีใช้เชคเกอร์โรตารี่ มีส่วนผสมที่ได้รับcentrifuged ที่ 1600 g สำหรับ 25 นาที หลังจาก centrifugation เป็นส่วนหนึ่งของน้ำมันถูกดูดซึม โดยโปรตีนที่ด้านล่างของท่อ และส่วนอื่น ๆ ยังคงอยู่ในรูปแบบของชั้นชัดเจนที่จะด้านบนของท่อ น้ำมันนี้ฟรี (ไม่สามารถดูดซึมได้ โดยแยกโปรตีน)ถูกเอาออกอย่างระมัดระวัง โดยเอียงหลอดกำจัดน้ำมันล่าสุดหยด OAC ถูกแสดงเป็นกรัมของน้ำมันขึ้นต่อ 100 กรัมของตัวอย่าง
การแปล กรุณารอสักครู่..
2. วัสดุและวิธีการ
2.1
วัตถุดิบและสารเคมีเอ ผง platensis (89.27 ± 0.16 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง)
ถูกซื้อจากBioalgal สังคม (มาห์เดีย, ตูนิเซีย) ชั้นประถมศึกษาวิเคราะห์
imidazole (C3H4N2) กรดอะซิติก azide โซเดียม (NaN3)
โซเดียมไฮดรอกไซ(NaOH) และกรดไฮโดรคลอ (HCl)
ที่ซื้อมาจากซิกChimie ดิช (ลียง, ฝรั่งเศส).
2.2 การสกัดโปรตีน platensis
เอเอ โปรตีน platensis แยก (API)
ถูกสกัดจากผงสาหร่ายจากการสลายตัวในimidazole / บัฟเฟอร์อะซิเตต (0.005 โมล / ลิตรค่า pH
10) หลังจากที่ปั่นเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสและ 10,000?
กรัมในสารละลายที่มีโปรตีนที่ละลายน้ำได้ถูกเก็บรวบรวม(ใส
A) เม็ดก็เลือนหายไปอีกครั้งในบัฟเฟอร์เดียวกันและปั่นภายใต้เงื่อนไขเดียวกันและใสถูกเก็บรวบรวม(ใส B) ทั้งสอง supernatants A และ B ถูกผสมและการตั้งค่าความเป็นกรดด่างที่3 กับ 0.1 โมล / ลิตร HCl โปรตีนที่ตกตะกอนที่ถูกเก็บรวบรวมแล้วโดยการหมุนเหวี่ยง (10,000? กรัม, 30 นาที, 25? C) และแห้งภายใต้เครื่องดูดควันไหลในชั่วข้ามคืนที่อุณหภูมิห้อง. โปรตีนแยกความชื้นที่เหลือหลังจากการอบแห้งเป็น 6.39 ± 0.24 กรัม / 100 กรัมของ API . ส่วนประกอบอื่น ๆ : โปรตีน (69.62 ± 0.75 กรัม / 100 กรัมของน้ำหนักแห้ง); เถ้า (17.79 ± 0.44 กรัม / 100 กรัมของน้ำหนักแห้ง); คาร์โบไฮเดรต (8.90 ± 0.88 กรัม / 100 กรัมของน้ำหนักแห้ง) และไขมัน (3.70 ± 0.35 กรัม / 100 กรัมของน้ำหนักแห้ง) ทั้งหมดเหล่านี้วิเคราะห์ได้รับการพิจารณาตาม AOAC อินเตอร์เนชั่นแนล (1995). 2.3 โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต polyacrylamide ข่าวคราว(SDS-PAGE) SDS-PAGE ได้ดำเนินการโดยวิธีการ Laemmli (1970) โดยใช้เจลอะคริเลต 12% และอุปกรณ์ Bio-Rad (มินิProtean เตตร้าเซลล์) โปรตีนที่ถูกย้อมด้วยสี Coomassie สดใสสีฟ้าR-250 การวิเคราะห์ระบบ SDS-PAGE ของโปรตีนที่ได้ดำเนินการในการแสดงตนและการขาดของเบต้าmercaptoethanol การลดตัวแทน. 2.4 เรืองแสงและรังสียูวี Spectra สกัด API ถูกระงับที่ 1% (w / w) ความเข้มข้นในimidazole / บัฟเฟอร์อะซิเตต (0.005 โมล / ลิตร) ปรับค่าพีเอชที่เหมาะสมค่าตั้งแต่3 ถึง 10 การแก้ปัญหาที่ถูกกวนเป็นเวลา 2 ชั่วโมงกับกวนแม่เหล็กจนความชุ่มชื้นที่เหมาะสมก็มาถึงและพีเอชมีการปรับโดยการเพิ่ม HCl (1 โมล / ลิตร) หรือ NaOH (1 โมล / ลิตร) เรืองแสงสเปกตรัมที่ 20 องศาเซลเซียสวัดในขณะที่กวนกับ LS 55 spectrofluorometer (Perkin Elmer ฝรั่งเศส) พร้อมกับฟลอริด้าซอฟแวร์Winlab และกระตุ้นการปล่อยก๊าซมีความยาวคลื่น280 นาโนเมตรและ 300-500 นาโนเมตรตามลำดับ สเปกตรัมการดูดซึมรังสียูวีที่20 องศาเซลเซียสของการแก้ปัญหา API (0.05% (w / w) ใน imidazole / บัฟเฟอร์อะซิเตต(0.005 โมล / ลิตรค่า pH 10)) จัดทำขึ้นในลักษณะเดียวกับการเรืองแสงการศึกษาถูกวัดจาก200 นาโนเมตร ถึง 350 นาโนเมตรที่มีspectrophotometer UV / Vis (LIBRA, Biochrom เคมบริดจ์สหราชอาณาจักร) ในcuvette ควอทซ์ 1 ซมกับบัฟเฟอร์ imidazole-อะซิเตต (0.005 โมล / ลิตรค่า pH 10). 2.5 ที่มีศักยภาพซีตา (ZP) ที่มีศักยภาพซีตา (ฉศักยภาพ) ของโปรตีนที่สกัดได้กำหนดใช้Zetasizer NanoZS90 (เวิร์นเครื่องมือเวิร์น, สหราชอาณาจักร) กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการปรับลด (0.5% (w / w)) กับ imidazole / อะซิเตตบัฟเฟอร์ปรับค่าพีเอชที่เหมาะสม ค่าเฉลี่ยฉศักยภาพ (ZP) ค่า (± SD (ความเบี่ยงเบนมาตรฐาน)) ที่ได้รับจากตราสาร. 2.6 สามารถในการละลายไนโตรเจน (NS) รายละเอียดสามารถในการละลายไนโตรเจนถูกกำหนดตามNirmala et al, (1992) สั้น ๆ , ตัวอย่าง 1 กรัมของผง API ถูกผสมกับ10 มิลลิลิตรน้ำกวนสนามแม่เหล็กเป็นเวลา 10 นาทีที่250 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้องและค่า pH ระงับได้รับการปรับให้2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 และ 10 โดยนอกเหนือจาก 0.1 โมล / ลิตรHCI หรือ 0.1 mol / L NaOH จากนั้นสารแขวนลอยที่ถูกสนามแม่เหล็กกวนที่ 250 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องและหมุนเหวี่ยงที่8000? กรัมเป็นเวลา 20 นาที หาร 5 มิลลิลิตรของสารละลายที่ใช้ในการปริมาณไนโตรเจนโดยวิธีKjeldahl (แปลงปัจจัย: 6.25) ไนโตรเจนละลายที่คำนวณและแสดงเป็นร้อยละของไนโตรเจนทั้งหมด. 2.7 ความสามารถในการดูดซึมน้ำ (WAC) WAC ของ API ที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการอธิบายโดยMacConnell อีสต์วู้ดและมิทเชล (1974) แก้ไขเล็กน้อย หนึ่งร้อยมิลลิกรัมของ API ที่ถูกเพิ่มเข้าไปใน 10 มิลลิลิตร imidazole / อะซิเตตบัฟเฟอร์(0.005 โมล / ลิตร) ปรับค่าพีเอช 3, 7, หรือ 10 ใน 50 centrifuge มิลลิลิตรหลอดและกวนค้างคืนที่4 องศาเซลเซียสโดยใช้เครื่องปั่นหมุน. แล้ว ส่วนผสมที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 1,400? กรัมเป็นเวลา 20 นาทีและใสจะถูกลบออกโดยการเอียงหลอดเบาๆ เพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียโปรตีน WAC ถูกแสดงเป็นกรัมของน้ำดูดซึมต่อ 100 กรัมของตัวอย่าง. 2.8 ความสามารถในการดูดซับน้ำมัน (OAC) OAC ของ API วัดโดยใช้วิธีการอธิบายโดยหลินฮัมเบิร์ตและSosulski (1974) แก้ไขเล็กน้อย สิบห้ามิลลิลิตรของน้ำมันข้าวโพดมีการเพิ่ม 0.5 กรัมของผง API ใน 50 มิลลิลิตร centrifuge หลอดแล้วขยับที่ 100 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้องในช่วง30 นาทีโดยใช้เครื่องปั่นหมุน ส่วนผสมที่ได้รับที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 1,600? กรัมเป็นเวลา 25 นาที หลังจากที่ปั่นเป็นส่วนหนึ่งของน้ำมันถูกดูดกลืนโดยโปรตีนที่ด้านล่างของท่อและส่วนอื่นๆ ยังคงเป็นอิสระในรูปแบบของชั้นที่ชัดเจนที่ด้านบนของท่อ น้ำมันฟรี (ไม่ดูดซึมโปรตีนแยก) ที่จะถูกลบออกอย่างระมัดระวังโดยการเอียงหลอดในการกำจัดน้ำมันที่ผ่านมาลดลง OAC ถูกแสดงเป็นกรัมของน้ำมันที่จัดขึ้นต่อ 100 กรัมของตัวอย่าง
2.1
วัตถุดิบและสารเคมีเอ ผง platensis (89.27 ± 0.16 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง)
ถูกซื้อจากBioalgal สังคม (มาห์เดีย, ตูนิเซีย) ชั้นประถมศึกษาวิเคราะห์
imidazole (C3H4N2) กรดอะซิติก azide โซเดียม (NaN3)
โซเดียมไฮดรอกไซ(NaOH) และกรดไฮโดรคลอ (HCl)
ที่ซื้อมาจากซิกChimie ดิช (ลียง, ฝรั่งเศส).
2.2 การสกัดโปรตีน platensis
เอเอ โปรตีน platensis แยก (API)
ถูกสกัดจากผงสาหร่ายจากการสลายตัวในimidazole / บัฟเฟอร์อะซิเตต (0.005 โมล / ลิตรค่า pH
10) หลังจากที่ปั่นเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสและ 10,000?
กรัมในสารละลายที่มีโปรตีนที่ละลายน้ำได้ถูกเก็บรวบรวม(ใส
A) เม็ดก็เลือนหายไปอีกครั้งในบัฟเฟอร์เดียวกันและปั่นภายใต้เงื่อนไขเดียวกันและใสถูกเก็บรวบรวม(ใส B) ทั้งสอง supernatants A และ B ถูกผสมและการตั้งค่าความเป็นกรดด่างที่3 กับ 0.1 โมล / ลิตร HCl โปรตีนที่ตกตะกอนที่ถูกเก็บรวบรวมแล้วโดยการหมุนเหวี่ยง (10,000? กรัม, 30 นาที, 25? C) และแห้งภายใต้เครื่องดูดควันไหลในชั่วข้ามคืนที่อุณหภูมิห้อง. โปรตีนแยกความชื้นที่เหลือหลังจากการอบแห้งเป็น 6.39 ± 0.24 กรัม / 100 กรัมของ API . ส่วนประกอบอื่น ๆ : โปรตีน (69.62 ± 0.75 กรัม / 100 กรัมของน้ำหนักแห้ง); เถ้า (17.79 ± 0.44 กรัม / 100 กรัมของน้ำหนักแห้ง); คาร์โบไฮเดรต (8.90 ± 0.88 กรัม / 100 กรัมของน้ำหนักแห้ง) และไขมัน (3.70 ± 0.35 กรัม / 100 กรัมของน้ำหนักแห้ง) ทั้งหมดเหล่านี้วิเคราะห์ได้รับการพิจารณาตาม AOAC อินเตอร์เนชั่นแนล (1995). 2.3 โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต polyacrylamide ข่าวคราว(SDS-PAGE) SDS-PAGE ได้ดำเนินการโดยวิธีการ Laemmli (1970) โดยใช้เจลอะคริเลต 12% และอุปกรณ์ Bio-Rad (มินิProtean เตตร้าเซลล์) โปรตีนที่ถูกย้อมด้วยสี Coomassie สดใสสีฟ้าR-250 การวิเคราะห์ระบบ SDS-PAGE ของโปรตีนที่ได้ดำเนินการในการแสดงตนและการขาดของเบต้าmercaptoethanol การลดตัวแทน. 2.4 เรืองแสงและรังสียูวี Spectra สกัด API ถูกระงับที่ 1% (w / w) ความเข้มข้นในimidazole / บัฟเฟอร์อะซิเตต (0.005 โมล / ลิตร) ปรับค่าพีเอชที่เหมาะสมค่าตั้งแต่3 ถึง 10 การแก้ปัญหาที่ถูกกวนเป็นเวลา 2 ชั่วโมงกับกวนแม่เหล็กจนความชุ่มชื้นที่เหมาะสมก็มาถึงและพีเอชมีการปรับโดยการเพิ่ม HCl (1 โมล / ลิตร) หรือ NaOH (1 โมล / ลิตร) เรืองแสงสเปกตรัมที่ 20 องศาเซลเซียสวัดในขณะที่กวนกับ LS 55 spectrofluorometer (Perkin Elmer ฝรั่งเศส) พร้อมกับฟลอริด้าซอฟแวร์Winlab และกระตุ้นการปล่อยก๊าซมีความยาวคลื่น280 นาโนเมตรและ 300-500 นาโนเมตรตามลำดับ สเปกตรัมการดูดซึมรังสียูวีที่20 องศาเซลเซียสของการแก้ปัญหา API (0.05% (w / w) ใน imidazole / บัฟเฟอร์อะซิเตต(0.005 โมล / ลิตรค่า pH 10)) จัดทำขึ้นในลักษณะเดียวกับการเรืองแสงการศึกษาถูกวัดจาก200 นาโนเมตร ถึง 350 นาโนเมตรที่มีspectrophotometer UV / Vis (LIBRA, Biochrom เคมบริดจ์สหราชอาณาจักร) ในcuvette ควอทซ์ 1 ซมกับบัฟเฟอร์ imidazole-อะซิเตต (0.005 โมล / ลิตรค่า pH 10). 2.5 ที่มีศักยภาพซีตา (ZP) ที่มีศักยภาพซีตา (ฉศักยภาพ) ของโปรตีนที่สกัดได้กำหนดใช้Zetasizer NanoZS90 (เวิร์นเครื่องมือเวิร์น, สหราชอาณาจักร) กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการปรับลด (0.5% (w / w)) กับ imidazole / อะซิเตตบัฟเฟอร์ปรับค่าพีเอชที่เหมาะสม ค่าเฉลี่ยฉศักยภาพ (ZP) ค่า (± SD (ความเบี่ยงเบนมาตรฐาน)) ที่ได้รับจากตราสาร. 2.6 สามารถในการละลายไนโตรเจน (NS) รายละเอียดสามารถในการละลายไนโตรเจนถูกกำหนดตามNirmala et al, (1992) สั้น ๆ , ตัวอย่าง 1 กรัมของผง API ถูกผสมกับ10 มิลลิลิตรน้ำกวนสนามแม่เหล็กเป็นเวลา 10 นาทีที่250 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้องและค่า pH ระงับได้รับการปรับให้2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 และ 10 โดยนอกเหนือจาก 0.1 โมล / ลิตรHCI หรือ 0.1 mol / L NaOH จากนั้นสารแขวนลอยที่ถูกสนามแม่เหล็กกวนที่ 250 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องและหมุนเหวี่ยงที่8000? กรัมเป็นเวลา 20 นาที หาร 5 มิลลิลิตรของสารละลายที่ใช้ในการปริมาณไนโตรเจนโดยวิธีKjeldahl (แปลงปัจจัย: 6.25) ไนโตรเจนละลายที่คำนวณและแสดงเป็นร้อยละของไนโตรเจนทั้งหมด. 2.7 ความสามารถในการดูดซึมน้ำ (WAC) WAC ของ API ที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการอธิบายโดยMacConnell อีสต์วู้ดและมิทเชล (1974) แก้ไขเล็กน้อย หนึ่งร้อยมิลลิกรัมของ API ที่ถูกเพิ่มเข้าไปใน 10 มิลลิลิตร imidazole / อะซิเตตบัฟเฟอร์(0.005 โมล / ลิตร) ปรับค่าพีเอช 3, 7, หรือ 10 ใน 50 centrifuge มิลลิลิตรหลอดและกวนค้างคืนที่4 องศาเซลเซียสโดยใช้เครื่องปั่นหมุน. แล้ว ส่วนผสมที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 1,400? กรัมเป็นเวลา 20 นาทีและใสจะถูกลบออกโดยการเอียงหลอดเบาๆ เพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียโปรตีน WAC ถูกแสดงเป็นกรัมของน้ำดูดซึมต่อ 100 กรัมของตัวอย่าง. 2.8 ความสามารถในการดูดซับน้ำมัน (OAC) OAC ของ API วัดโดยใช้วิธีการอธิบายโดยหลินฮัมเบิร์ตและSosulski (1974) แก้ไขเล็กน้อย สิบห้ามิลลิลิตรของน้ำมันข้าวโพดมีการเพิ่ม 0.5 กรัมของผง API ใน 50 มิลลิลิตร centrifuge หลอดแล้วขยับที่ 100 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้องในช่วง30 นาทีโดยใช้เครื่องปั่นหมุน ส่วนผสมที่ได้รับที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 1,600? กรัมเป็นเวลา 25 นาที หลังจากที่ปั่นเป็นส่วนหนึ่งของน้ำมันถูกดูดกลืนโดยโปรตีนที่ด้านล่างของท่อและส่วนอื่นๆ ยังคงเป็นอิสระในรูปแบบของชั้นที่ชัดเจนที่ด้านบนของท่อ น้ำมันฟรี (ไม่ดูดซึมโปรตีนแยก) ที่จะถูกลบออกอย่างระมัดระวังโดยการเอียงหลอดในการกำจัดน้ำมันที่ผ่านมาลดลง OAC ถูกแสดงเป็นกรัมของน้ำมันที่จัดขึ้นต่อ 100 กรัมของตัวอย่าง
การแปล กรุณารอสักครู่..
2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัตถุดิบและสารเคมี
. platensis ผง ( สินค้า± 0.16 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ) ซื้อ
จากสังคม bioalgal ( มา เดีย , ตูนิเซีย ) อิมิดาโซลเกรด
วิเคราะห์ ( c3h4n2 ) , กรดโซเดียมไซด์ ( nan3 ) , โซเดียม
โซดาไฟ ( NaOH ) และกรดเกลือ ( HCl ) ซื้อจาก ซิกม่า Aldrich
chimie ( Lyon , ฝรั่งเศส ) .
2.2 . การสกัด . platensis โปรตีน
Aโปรตีน platensis แยก ( API ) คือ สารสกัดจากสาหร่าย โดยการละลายผง
ในอิมิดาโซลอาซีเตตบัฟเฟอร์ / ( 0.005 โมลพีเอช
10 ) หลังการปั่นเหวี่ยงสำหรับ 30 นาทีที่ 25 C และ 10 , 000 g ,
สูงประกอบด้วยโปรตีนที่ละลายน้ำได้รวบรวม ( น่าน
) เม็ดละลายอีกครั้งในบัฟเฟอร์เดียวกันและ
ไฟฟ้าภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน และสูงคือ
เก็บ ( นำ B ) ทั้ง supernatants A และ B มาผสมและปรับพีเอช 3
0.1 โมลต่อลิตร hcl . ตกตะกอนโปรตีน
แล้วจำนวน 3 , กรัม , 30 นาที , 25 C )
และอบแห้งภายใต้การไหลแบบราบเรียบฮูดค้างคืนที่อุณหภูมิห้อง
เหลือความชื้นแยกโปรตีนหลังการอบแห้ง
เป็น 6.39 ± 0.24 กรัม / 100 กรัมของ API ส่วนประกอบอื่น ๆ :
โปรตีน ( 6962 ± 0.75 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ) ; เถ้า ( 17.79 ±
0.44 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ) ; คาร์โบไฮเดรต ( 8.90 ± 0.88 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้งของ
) และไขมัน ( 3.70 ± 0.35 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ) การวิเคราะห์ทั้งหมดนี้
เป็นตามไม่ อินเตอร์เนชั่นแนล ( 1995 ) .
2.3 โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS polyacrylamide gel electrophoresis
( หน้า ) SDS –หน้าโดยใช้วิธี laemmli
( 1970 )ใช้ 12% polyacrylamide gel และไบโอ ราดเครื่อง ( Mini -
ซึ่งเปลี่ยนแปลงได้มากสี่เซลล์ ) โปรตีนที่ถูกย้อมด้วยสีเหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส
โดย SDS –หน้าการวิเคราะห์โปรตีนได้ดำเนินการในการแสดงและการขาดงานของเบต้า
mercaptoethanol ลดแทน .
2.4 . การเรืองแสงและ UV Spectra
สกัด API ถูกระงับที่ 1% ( w / w )
/ ความเข้มข้นในอิมิดาโซลอาซีเตตบัฟเฟอร์ ( 0005 mol / L ) ปรับค่า PH
เหมาะตั้งแต่ 3 ถึง 10 โซลูชั่นถูกกวน 2 ชั่วโมงกับการ stirrer แม่เหล็กจนความชุ่มชื้นที่เหมาะสมก็มาถึง และจะปรับเพิ่ม
M HCl ( / L 1 mol ) หรือโซเดียมไฮดรอกไซด์ ( 1 โมล / ลิตร ) สเปกตรัมฟลูออเรสเซนซ์
ที่ 20 C ถูกวัดในขณะที่กวนด้วย -
55 spectrofluorometer ( เพอร์กินเอลเมอร์ ฝรั่งเศส ) พร้อมกับซอฟต์แวร์ winlab FL
2.1 . วัตถุดิบและสารเคมี
. platensis ผง ( สินค้า± 0.16 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ) ซื้อ
จากสังคม bioalgal ( มา เดีย , ตูนิเซีย ) อิมิดาโซลเกรด
วิเคราะห์ ( c3h4n2 ) , กรดโซเดียมไซด์ ( nan3 ) , โซเดียม
โซดาไฟ ( NaOH ) และกรดเกลือ ( HCl ) ซื้อจาก ซิกม่า Aldrich
chimie ( Lyon , ฝรั่งเศส ) .
2.2 . การสกัด . platensis โปรตีน
Aโปรตีน platensis แยก ( API ) คือ สารสกัดจากสาหร่าย โดยการละลายผง
ในอิมิดาโซลอาซีเตตบัฟเฟอร์ / ( 0.005 โมลพีเอช
10 ) หลังการปั่นเหวี่ยงสำหรับ 30 นาทีที่ 25 C และ 10 , 000 g ,
สูงประกอบด้วยโปรตีนที่ละลายน้ำได้รวบรวม ( น่าน
) เม็ดละลายอีกครั้งในบัฟเฟอร์เดียวกันและ
ไฟฟ้าภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน และสูงคือ
เก็บ ( นำ B ) ทั้ง supernatants A และ B มาผสมและปรับพีเอช 3
0.1 โมลต่อลิตร hcl . ตกตะกอนโปรตีน
แล้วจำนวน 3 , กรัม , 30 นาที , 25 C )
และอบแห้งภายใต้การไหลแบบราบเรียบฮูดค้างคืนที่อุณหภูมิห้อง
เหลือความชื้นแยกโปรตีนหลังการอบแห้ง
เป็น 6.39 ± 0.24 กรัม / 100 กรัมของ API ส่วนประกอบอื่น ๆ :
โปรตีน ( 6962 ± 0.75 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ) ; เถ้า ( 17.79 ±
0.44 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ) ; คาร์โบไฮเดรต ( 8.90 ± 0.88 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้งของ
) และไขมัน ( 3.70 ± 0.35 กรัม / 100 กรัมน้ำหนักแห้ง ) การวิเคราะห์ทั้งหมดนี้
เป็นตามไม่ อินเตอร์เนชั่นแนล ( 1995 ) .
2.3 โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS polyacrylamide gel electrophoresis
( หน้า ) SDS –หน้าโดยใช้วิธี laemmli
( 1970 )ใช้ 12% polyacrylamide gel และไบโอ ราดเครื่อง ( Mini -
ซึ่งเปลี่ยนแปลงได้มากสี่เซลล์ ) โปรตีนที่ถูกย้อมด้วยสีเหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส
โดย SDS –หน้าการวิเคราะห์โปรตีนได้ดำเนินการในการแสดงและการขาดงานของเบต้า
mercaptoethanol ลดแทน .
2.4 . การเรืองแสงและ UV Spectra
สกัด API ถูกระงับที่ 1% ( w / w )
/ ความเข้มข้นในอิมิดาโซลอาซีเตตบัฟเฟอร์ ( 0005 mol / L ) ปรับค่า PH
เหมาะตั้งแต่ 3 ถึง 10 โซลูชั่นถูกกวน 2 ชั่วโมงกับการ stirrer แม่เหล็กจนความชุ่มชื้นที่เหมาะสมก็มาถึง และจะปรับเพิ่ม
M HCl ( / L 1 mol ) หรือโซเดียมไฮดรอกไซด์ ( 1 โมล / ลิตร ) สเปกตรัมฟลูออเรสเซนซ์
ที่ 20 C ถูกวัดในขณะที่กวนด้วย -
55 spectrofluorometer ( เพอร์กินเอลเมอร์ ฝรั่งเศส ) พร้อมกับซอฟต์แวร์ winlab FL
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Travel far to school
- the few days we were friends
- แก่แล้ว
- ให้กดปุ่มสีแดง ที่3 (TILT-UP) ค้างไว้
- ใช้เวลา
- ขอให้มีแต่สิ่งดีๆเข้ามา
- I don't not difficult for me tryping
- เงินเดือนน้อยแต่ต้องทำงานหนัก
- NAV business setup
- การทำงานที่เกี่ยวกับ
- ยิ่งไปกว่านั้นราคาขายของคู่แข่งนั้นถูกกว
- ฉันยังหาไม่ได้เลยตอนนี้
- 洗檢
- It only happens when you breathe out, so
- yet heat treatment inhibits solubilizati
- still
- 1. Customer required origin as below.-Sp
- เลื่อนการประชุมวันพรุ่งนี้ จาก 3โมง เป็น
- คุณย้ายมาจากบริษัทอะไร
- Then I wearing dust mask for safety
- เมื่อคุณเห็นอะไรที่ประทับใจ หรือสิ่งที่น
- Thank you for joining our giveaway! We’l
- Travel far to school
- The Overlord
