Parasite culture and culture supern

Parasite culture and culture supernatant. P. falciparum asexual stages (3D7 strain) were cultured in vitro in human erythrocytes (blood group O+ or A+) obtained from the Japanese Red Cross Society as previously described (6). To harvest parasite pellets, mature schizonts were purified by using Percoll (GE Healthcare, Camarillo, CA) density gradient centrifugation and further treated with tetanolysin, washed with phosphate-buffered saline (PBS) containing Complete protease inhibitor (Roche, Mannheim, Germany), and stored at −80°C until used. For culture supernatant preparation, tightly synchronized, purified schizonts were cultured for 20 h at 37°C in the absence of erythrocytes for rupture and merozoite release. The culture medium was centrifuged at 3,000 × g for 20 min at 4°C to remove cellular debris, and subsequently, the supernatant was concentrated 5-fold in a centrifugal filter (Amicon Ultra 10K device; Millipore, Billerica, MA) and stored in aliquots at −80°C until used.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปรสิตวัฒนธรรมและวัฒนธรรม supernatant ขั้น asexual P. falciparum (3D 7 สายพันธุ์) มีอ่างเพาะเลี้ยงในมนุษย์ erythrocytes (เลือดกรุ๊ป O หรือ A) ได้รับมาจากญี่ปุ่นกาชาดอธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็น (6) เกี่ยวขี้ปรสิต schizonts ผู้ใหญ่ได้บริสุทธิ์โดย Percoll (GE สุขภาพ Camarillo CA) centrifugation ไล่ระดับความหนาแน่น และเพิ่มเติมรับ tetanolysin ล้าง ด้วย buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS) ที่ประกอบด้วยผลสมบูรณ์รติเอส (โร มา เยอรมนี), และเก็บไว้ที่ −80 ° C จนกว่าจะใช้ สำหรับเตรียมสอบ supernatant วัฒนธรรม schizonts บริสุทธิ์ ซิงโครไนซ์แน่นมีอ่างสำหรับ h 20 ที่ 37° C ของ erythrocytes สำหรับปล่อย merozoite และแตก สื่อวัฒนธรรมถูก centrifuged ที่ 3000 × g สำหรับ 20 นาทีที่ 4° C เพื่อเอาเศษโทรศัพท์มือถือ และในเวลาต่อมา supernatant ได้เข้มข้น 5-fold ในตัวแรงเหวี่ยง (อุปกรณ์ Amicon อัลตร้า 10K มาก Billerica, MA) และเก็บไว้ใน aliquots ที่ −80 ° C จนกว่าจะใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมปรสิตและวัฒนธรรมใส P. falciparum ขั้นตอนกะเทย (สายพันธุ์ 3D7) ถูกนำมาเลี้ยงในหลอดทดลองในเซลล์เม็ดเลือดแดงของมนุษย์ (O + กลุ่มเลือดหรือ A +) ที่ได้รับจากสภากาชาดญี่ปุ่นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (6) เพื่อเก็บเกี่ยวเม็ดปรสิต schizonts ผู้ใหญ่ถูกทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ Percoll (จีอีเฮล, แคมาริลโล, CA) การปั่นแยกลาดหนาแน่นและได้รับการรักษาต่อกับ tetanolysin ล้างด้วยสารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอส) ที่มีน้ำย่อยยับยั้งทั้งหมด (Roche, Mannheim, เยอรมนี) และเก็บไว้ที่ -80 ° C จนใช้ สำหรับการเตรียมวัฒนธรรมใส, ตรงแน่น schizonts บริสุทธิ์มาเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 20 ชั่วโมงที่ 37 ° C ในกรณีที่ไม่มีเม็ดเลือดแดงแตกและสำหรับ merozoite ปล่อย อาหารเลี้ยงเชื้อที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 3,000 ×กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 ° C ถึงเอาเศษเซลล์และต่อมาใสได้เข้มข้น 5 เท่าในกรองแรงเหวี่ยง (Amicon อุปกรณ์ 10K อัลตร้า; ค, บิลเลริกา, MA) และเก็บไว้ใน aliquots ที่ -80 ° C จนใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัฒนธรรมและปรสิตที่นำวัฒนธรรม มาลาเรียระยะไม่มีเพศ ( หน้า 3d7 เมื่อย ) เพาะเลี้ยงในหลอดทดลองในมนุษย์เม็ดเลือดแดง ( เลือดกรุ๊ป O หรือ ) ที่ได้รับจากสภากาชาดญี่ปุ่นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 6 ) การเก็บเกี่ยวเม็ดปรสิต , ผู้ใหญ่ schizonts ได้ทำให้บริสุทธิ์โดยใช้ percoll ( GE Camarillo , สุขภาพ ,แคลิฟอร์เนีย ) ปั่นไล่ระดับความหนาแน่น และเพิ่มเติม การรักษาด้วยเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์เตตาโนลัยซิน , ล้างด้วย ( PBS ) ประกอบด้วยสารโปรตีนสมบูรณ์ ( โรช Mannheim , เยอรมัน ) , และเก็บไว้ที่− 80 ° C จนใช้ สำหรับการเตรียมการ นำวัฒนธรรมแน่นตรงบริสุทธิ์ schizonts เพาะเลี้ยงเป็นเวลา 20 ชั่วโมง 37 ° C ในการขาดงานของเม็ดเลือดแดงที่แตก merozoite และปล่อยวัฒนธรรมระดับกลางอยู่ที่ 3000 × G สำหรับ 20 นาทีที่ 4 ° C เพื่อเอาเศษเซลล์และต่อมา , นำจากผู้อื่นในกรองแรงเหวี่ยง ( amicon เกิน 10k อุปกรณ์ ; มิลลิ , โตเกียว , MA ) และเก็บไว้ในส่วนที่หารลงตัวที่ 80 ° C −จนใช้