embryo transfer. Recipientscarrying

embryo transfer. Recipientscarryingapalpable corpus luteum ([0.8 cm) at day 7 after estrus detection were selected for embryo transfer. Morulae or blastocysts were nonsurgically transferred to the uterine horn ipsilateral to the corpus luteum (two embryos per recipient). Ultrasonic testing was performed approximately 50 days after embryo transfer.
Mfat1 gene insertion analysis
Genomic DNA was extracted from tissue or blood of the cloned calves named fat1 1-20 using Genomic DNA extraction Kit. Primers were designed to analyze the insertion of the mfat1 gene (P1, 50-GGACCTGGT GAAGAGCATCCG-30; P2, 5 0-GCGTCGCAGAAGC CAAAC-30, corresponding to 210–230 and 630– 647 bp of C. elegans fat1 gene, respectively).
Expression analysis of mfat1 gene
Total RNA from four tissues (muscle, liver, lung, and kidney)waspurifiedusingatotalRNAextractionkit.The reverse-transcriptionprocedurewas42 Cfor60 minand 70 C for 5 min. RT-PCR was performed using primers P1 and P2 and the procedure was described above. The 297 bp beta-actin band was amplified as a control for the quality of RT-PCR (P3, 50-CCAACCGTGAGAAGAT GAC-30; P4, 5 0-TGAGTCACGGACGATTTC-30).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ถ่ายฝากตัวอ่อน Recipientscarryingapalpable คอร์พัสคริ luteum ([0.8 ซม.) ที่ 7 วันหลังจากตรวจสอบ estrus ถูกเลือกสำหรับการถ่ายฝากตัวอ่อน Nonsurgically morulae หรือ blastocysts ถูกโอนไปแตรมดลูก ipsilateral การ luteum คอร์พัสคริ (สองโคลนต่อผู้รับ) ทดสอบอัลตราโซนิกถูกทำประมาณ 50 วันหลังจากการถ่ายฝากตัวอ่อนวิเคราะห์การแทรกยีน Mfat1Genomic DNA ที่สกัดจากเนื้อเยื่อหรือเลือดวัวโคลนที่มีชื่อว่า fat1 1-20 ใช้ Genomic DNA แยกชุด ไพรเมอร์ออกแบบมาเพื่อวิเคราะห์การแทรกยีน mfat1 (P1, 50-GGACCTGGT GAAGAGCATCCG-30 P 2, 5, 0-GCGTCGCAGAAGC CAAAC-30 ที่สอดคล้องกับ 210-230 และ 630– 647 bp ของ C. elegans fat1 ยีน ตามลำดับ)นิพจน์การวิเคราะห์ยีน mfat1อาร์เอ็นเอรวมจากเนื้อเยื่อ 4 (กล้ามเนื้อ ตับ ปอด และ kidney)waspurifiedusingatotalRNAextractionkit.The กลับ transcriptionprocedurewas42 Cfor60 minand ทำ C 70 สำหรับ 5 นาที RT-PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่ P1 และ p 2 และกระบวนการถูกอธิบายไว้ข้างต้น วงดนตรีแอกตินเบต้า bp 297 มี amplified เป็นตัวควบคุมคุณภาพของ RT-PCR (P3, 50-CCAACCGTGAGAAGAT GAC-30 P4, 5 0-TGAGTCACGGACGATTTC-30)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ย้ายตัวอ่อน คลังข้อมูล luteum Recipientscarryingapalpable ([0.8 ซม.) ในวันที่ 7 หลังจากการตรวจสอบตกมันถูกเลือกสำหรับการย้ายตัวอ่อน Morulae หรือตัวอ่อนถูกย้าย nonsurgically แตรมดลูก ipsilateral เพื่อ luteum คลัง (สองตัวอ่อนต่อผู้รับ) การทดสอบอัลตราโซนิกที่ได้ดำเนินการประมาณ 50 วันหลังจากย้ายตัวอ่อน.
Mfat1 วิเคราะห์แทรกยีน
จีโนมดีเอ็นเอที่สกัดจากเนื้อเยื่อหรือเลือดของลูกโคลนชื่อ FAT1 1-20 โดยใช้การสกัดดีเอ็นเอจีโนมชุด ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบมาเพื่อวิเคราะห์การแทรกของยีน mfat1 (P1, 50 GGACCTGGT GAAGAGCATCCG-30; P2, 5 0 GCGTCGCAGAAGC CAAAC-30 ซึ่งสอดคล้องกับ 210-230 และ 630- 647 bp ซี elegans ยีน FAT1 ตามลำดับ) .
การวิเคราะห์การแสดงออกของยีน mfat1
รวม RNA จากสี่เนื้อเยื่อ (กล้ามเนื้อ, ตับ, ปอดและไต) waspuri edusingatotalRNAextractionkit.The ไฟย้อนกลับ transcriptionprocedurewas42? Cfor60 Minand 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที RT-PCR ได้รับการดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์ P1 และ P2 และขั้นตอนที่ถูกอธิบายไว้ข้างต้น วง 297 bp เบต้าโปรตีนเป็นเอ็ดสาย Ampli การควบคุมคุณภาพของการ RT-PCR (P3, 50 CCAACCGTGAGAAGAT GAC-30; P4 5 0 TGAGTCACGGACGATTTC-30)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การย้ายตัวอ่อน . recipientscarryingapalpable รังไข่คอร์ปัสลูเตียม ( [ 0.8 เซนติเมตร ) ในวันที่ 7 หลังการเป็นสัดได้คัดเลือกการย้ายตัวอ่อน . morulae หรือโตเป็น nonsurgically ย้ายไป ipsilateral มดลูกกับรังไข่คอร์ปัสลูเตียม ( สองตัว ต่อผู้รับ ) การทดสอบอัลตราโซนิกได้ประมาณ 50 วัน หลังการย้ายตัวอ่อน .

mfat1 การวิเคราะห์การแทรกยีนจีโนมดีเอ็นเอจากเนื้อเยื่อหรือเลือดของโคลนนิ่งลูกวัวชื่อ fat1 1-20 โดยใช้ดีเอ็นเอแยกชุด ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อวิเคราะห์ความสัมพันธ์ mfat1 ยีน ( P1 , P2 , 50-ggacctggt gaagagcatccg-30 ; 5 0-gcgtcgcagaagc caaac-30 ที่ 210 - 230 และ 630 –คุณ BP ของ ถิ่น fat1 ยีนตามลำดับ )

mfat1 การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนอาร์เอ็นเอรวมจากสี่เนื้อเยื่อกล้ามเนื้อ ตับ ปอด และไต ) waspuri จึง edusingatotalrnaextractionkit.the reverse-transcriptionprocedurewas42  cfor60 minand 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที  RT-PCR การใช้ไพรเมอร์ P1 P2 และ และขั้นตอนที่อธิบายไว้ข้างต้น ส่วนเบต้าแอคติน 297 BP วง ampli จึงเอ็ดเป็น การควบคุม คุณภาพของ RT-PCR ( P3 P4 50-ccaaccgtgagaagat gac-30 ;5
0-tgagtcacggacgatttc-30 )