The mol wt of the pine PAL subunit,

The mol wt of the pine PAL subunit, estimated from the
mobility on SDS-PAGE, is 74,000. The native mol wt of PAL,
estimated by gel filtration chromatography on Sephacryl S-
300, is 280,000, in agreement with the tetrameric nature of
PAL in all organisms examined to date. Flat bed isoelectric
focusing of purified PAL next to a set of standards yielded an
estimate of pl 5.8.
The purified enzyme follows Michaelis-Menten kinetics,
with a Km of 27 ,uM for L-phenylalanine. A double reciprocal
(Lineweaver-Burk) plot shows no sign of an inflection point,
and the Hill coefficient was approximately unity. This observation
contrasts with observations on PAL purified from
many other higher plants. The enzyme is commonly described
as showing negative cooperativity (10).
Purified PAL protein was submitted to N-terminal amino
acid sequence analysis, and 22 amino acids of sequence were
obtained. A degenerate nucleotide sequence that could encode
the observed amino acids was inferred, and an oligonucleotide
primer was synthesized from a portion of the sequence, using
inosine in positions where any of three or four nucleotides
might occur (Fig. 2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Wt โมลของ PAL ย่อยสน ประเมินจากการเคลื่อนไหวใน SDS-หน้า เป็น 74,000 Wt โมลดั้งเดิมของ PALประมาณการ โดยเจ chromatography กรองบน Sephacryl S-300, 280,000 ข้อตกลงลักษณะ tetrameric ของเป็นเพื่อนในสิ่งมีชีวิตทั้งหมดที่ตรวจสอบวันที่ เตียง isoelectric แบนโฟกัสของ PAL บริสุทธิ์ถัดจากมาตรฐานผลการประเมินของ pl 5.8เอนไซม์บริสุทธิ์ต่อจลนพลศาสตร์ Michaelis Mentenด้วยกมของ 27, uM สำหรับ L phenylalanine เป็นต้นคู่(Lineweaver-Burk) แสดงไม่ลงจุดโรคติดเชื้อและค่าสัมประสิทธิ์ฮิลล์ ประมาณสามัคคี ข้อสังเกตนี้ความแตกต่างที่สังเกตใน PAL บริสุทธิ์จากสูงกว่าต้นไม้ชนิดอื่น ๆ เอนไซม์นี้จะอธิบายกันเป็นการแสดงค่าลบ cooperativity (10)ส่งไป N-อะมิโนโปรตีนบริสุทธิ์ PALการวิเคราะห์กรด และกรดอะมิโน 22 ของลำดับรับ ลำดับของนิวคลีโอไทด์ degenerate ที่สามารถเข้ารหัสกรดอะมิโนสังเกตถูกสรุป และเป็น oligonucleotideไพรเมอร์ถูกสังเคราะห์จากส่วนของลำดับ ใช้inosine ในตำแหน่งของนิวคลีโอไทด์สาม หรือสี่อาจเกิดขึ้น (รูป 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รุ่น WT mol ของ subunit สน PAL, ประมาณจาก
การเคลื่อนไหวในระบบ SDS-PAGE เป็น 74,000 รุ่น WT mol ชนพื้นเมืองของ PAL,
ประมาณโดยโครมาโตกรองเจล Sephacryl S-
300 เป็น 280,000 ในข้อตกลงกับธรรมชาติ tetrameric ของ
PAL ในสิ่งมีชีวิตทุกวันที่ตรวจสอบ Isoelectric แบนเตียง
มุ่งเน้นของ PAL บริสุทธิ์ติดกับชุดของมาตรฐานส่งผลให้
ประมาณการของ PL 5.8.
เอนไซม์บริสุทธิ์ดังนี้จลนพลศาสตร์ Michaelis-Menten,
มีกิโลเมตรที่ 27 UM สำหรับ L-phenylalanine ซึ่งกันและกันคู่
(Lineweaver-Burk) พล็อตแสดงให้เห็นสัญญาณของจุดโรคติดเชื้อไม่มี
และค่าสัมประสิทธิ์ฮิลล์ประมาณสามัคคี ข้อสังเกตนี้
ขัดแย้งกับข้อสังเกตเกี่ยวกับระบบ PAL บริสุทธิ์จาก
หลายพืชอื่น ๆ ที่สูงขึ้น เอนไซม์ที่จะร่วมกันอธิบาย
การแสดง cooperativity ลบ (10).
โปรตีน PAL บริสุทธิ์ถูกส่งไปยังสถานี N-Amino
วิเคราะห์ลำดับกรดและกรดอะมิโน 22 ของลำดับถูก
ได้ ลำดับเลวเบื่อหน่ายที่สามารถเข้ารหัส
กรดอะมิโนที่สังเกตได้รับการสรุปและ oligonucleotide
ไพรเมอร์สังเคราะห์จากส่วนหนึ่งของลำดับการใช้
inosine ในตำแหน่งที่ใด ๆ ของสามหรือสี่นิวคลีโอ
อาจเกิดขึ้น (รูปที่. 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

WT โมลของต้นสนพัลย่อยประมาณจากการเคลื่อนไหวบน SDS-PAGE , 74000 WT mol พื้นเมืองของเพื่อนด้วยวิธี Gel filtration chromatography ใน sephacryl S -300 , 280 , ในข้อตกลงกับ tetrameric ธรรมชาติของเพื่อนทั้งหมดสิ่งมีชีวิตตรวจสอบวันที่ แบนเตียงไอโซอิเล็กทริกเน้นให้เพื่อนข้างๆ ว่าเป็นชุดของมาตรฐานประมาณการของ PL 5.8 .เอนไซม์ คือ มิคาเ ิส menten จลนศาสตร์กับ กม. 27 . สำหรับฟีนิลอะลา . คู่ซึ่งกันและกัน( ไลน์วีเวอร์ เบิร์ก ) พล็อตแสดงสัญญาณของการผันคำจุดและเนินเขา จำนวนประมาณ ความสามัคคี การสำรวจครั้งนี้แตกต่างกับวิธีสังเกต พาลหลาย ๆ อุดมพืช เอนไซม์โดยทั่วไปอธิบายการแสดง cooperativity ลบ ( 10 )บริสุทธิ์โปรตีนกรดอะมิโนกรดอะมิโนที่เป็นพาลการวิเคราะห์ลำดับกรด และ 22 กรดอะมิโนของลำดับคือที่ได้รับ มีการลำดับนิวคลีโอไทด์ที่สามารถเข้ารหัสและกรดอะมิโน ซึ่งเป็นทั้ง และไพรเมอร์ที่สังเคราะห์จากส่วนของลำดับ โดยใช้โนซีนในตำแหน่งที่ 3 หรือ 4 นิวคลีโอไทด์ที่อาจจะเกิดขึ้น ( รูปที่ 2 )