At days 1, 2, 3, 5 and 7 pv, trout

At days 1, 2, 3, 5 and 7 pv, trout were sacrificed (n ¼ 3) and the
head kidneys were processed for RNA extraction. We analysed the
expression of five genes by RT-qPCR, three belonging to interferonrelated
pathways (IFN-1 [36], IFNg [37] and Mx-1 [38e40] and two
interleukins IL8 [41] and IL12 [42]). On days 15 and 30 pv, the
kidney of trout (n ¼ 3) from each group was also processed to
evaluate the expression of genes related to adaptive immune responses,
such as IgM [43] and IgT [44]. All the primers used had
been reported and optimized in previous studies [34,35]. The
transcription of CD4 and CD8 Th cell markers was also assessed
using the primers CCTGCTCATCCACAGCCTAT (F) and
CTTCTCCTGGCTGTCTGACC (R) for CD4 and AGTCGTGCAAAGTGGGAAAG
(F) and GGTTGCAATGGCATACAGTC (R) for CD8. The corresponding
accession numbers are AY973030.1 and NM_001124263,
respectively. All qPCR reactions were performed in triplicate and for
each mRNA, and gene expression was normalized to that of the
endogenous control (elongation factor 1-a; EF1-a) and expressed as
2DCt, where DCt was determined by subtracting the average EF1-a
Ct value from the average target Ct. The change in expression
relative to the empty plasmid pcDNAwas also determined for some
of the samples by applying the formula 2DDCt [45] where
DDCt ¼ DCt of samples of target gene DCt of the calibrator (pcDNA
control).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในวันที่ 1, 2, 3, 5 และ 7 อาทิตย์ เทราต์เสียสละ (n ¼ 3) และไตใหญ่ถูกประมวลผลสำหรับสกัดอาร์เอ็นเอ เรา analysedของยีนห้าโดย RT-qPCR สามของ interferonrelatedมนต์ (IFN-1 [36], IFNg [37] และ Mx-1 [38e40] และสองinterleukins IL8 [41] และ IL12 [42]) ในวันที่ 15 และ 30 pv การไตของเทราต์ (n ¼ 3) จากแต่ละกลุ่มมีการประมวลผลไปยังประเมินค่าของยีนที่เกี่ยวข้องกับการตอบสนองภูมิคุ้มกันแบบอะแดปทีฟระบาดของโรค [43] และ IgT [44] ไพรเมอร์ทั้งหมดที่ใช้ได้การรายงาน และเพิ่มประสิทธิภาพในการศึกษาก่อนหน้านี้ [34,35] ที่นอกจากนี้ยังได้ประเมิน transcription ของเครื่องหมายเซลล์ CD4 และ CD8 Thใช้ไพรเมอร์ CCTGCTCATCCACAGCCTAT (F) และCTTCTCCTGGCTGTCTGACC (R) CD4 และ AGTCGTGCAAAGTGGGAAAG(F) และ GGTTGCAATGGCATACAGTC (R) สำหรับ CD8 ให้สอดคล้องกับทะเบียนเลข AY973030.1 และ NM_001124263ตามลำดับ ดำเนิน qPCR ปฏิกิริยาทั้งหมด ใน triplicate และแต่ละ mRNA และการแสดงออกของยีนได้ตามปกติกับการควบคุม endogenous (elongation ปัจจัย 1-a EF1-a) และแสดงเป็นDCt 2 ที่กำหนด โดยการลบค่าเฉลี่ย DCt EF1 ได้ค่า ct จากเป้าหมายเฉลี่ยกะรัตการเปลี่ยนแปลงในนิพจน์สัมพันธ์กับ pcDNAwas เปล่า plasmid ที่มี กำหนดสำหรับบางตัวอย่างโดยใช้สูตร 2 DDCt [45] ซึ่งDCt DDCt ¼ของตัวอย่างของยีนเป้าหมาย DCt ของอัพโหลด (pcDNAควบคุม)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในวันที่ 1, 2, 3, 5 และ 7 pv, ปลาเทราท์ได้รับการเสียสละ (n ¼ 3) และ
ไตหัวที่ถูกประมวลผลในการสกัดอาร์เอ็นเอ เราวิเคราะห์
การแสดงออกของยีนที่ห้าโดย RT-qPCR สามที่อยู่ในประเภท interferonrelated
ทุลักทุเล (IFN-1 [36], IFNg [37] และ MX-1 [38e40] และสอง
interleukins IL8 [41] และ IL12 [42]) ในวันที่ 15 และ 30 pv,
ไตของปลาเทราท์ (n ¼ 3) จากแต่ละกลุ่มได้รับการประมวลผลยัง
ประเมินการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับการปรับตัวการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน
เช่น IgM [43] และ IGT [44] ไพรเมอร์ที่ใช้ทั้งหมดได้
รับรายงานและเพิ่มประสิทธิภาพในการศึกษาก่อนหน้านี้ [34,35]
ถอดความของ CD4 และ CD8 Th เครื่องหมายเซลล์มีการประเมิน
โดยใช้ไพรเมอร์ CCTGCTCATCCACAGCCTAT (F) และ
CTTCTCCTGGCTGTCTGACC (R) สำหรับการตรวจ CD4 และ AGTCGTGCAAAGTGGGAAAG
(F) และ GGTTGCAATGGCATACAGTC (R) สำหรับ CD8 สอดคล้อง
หมายเลขภาคยานุวัติเป็น AY973030.1 และ NM_001124263,
ตามลำดับ ทั้งหมดปฏิกิริยา qPCR ได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าและ
mRNA ในแต่ละครั้งและการแสดงออกของยีนที่ถูกปกติกับที่ของ
การควบคุมภายนอก (การยืดตัวปัจจัย 1; EF1-) และแสดงเป็น
2 DCT ที่ DCT ถูกกำหนดโดยการลบ EF1 เฉลี่ย? -a
มูลค่ากะรัตจากเป้าหมายเฉลี่ยกะรัต การเปลี่ยนแปลงในการแสดงออก
เทียบกับ pcDNAwas พลาสมิดที่ว่างเปล่ายังกำหนดสำหรับบางคน
ของกลุ่มตัวอย่างโดยใช้สูตรที่ 2 หรือไม่? DDCt [45] ที่
DDCt ¼ DCT ตัวอย่างของยีนเป้าหมาย? DCT ของสอบเทียบ (pcDNA
ควบคุม)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วันที่ 1 , 2 , 3 , 5 และ 7 ใน PV , ปลาเทราท์พลีชีพ ( N ¼ 3 )
หัวไตถูกแปรรูปเพื่อการสกัด RNA เราได้วิเคราะห์การแสดงออกของยีน RT
5 qpcr สามของ interferonrelated
วิถี ( ifn-1 [ 36 ] ifng [ 37 ] และ mx-1 [ 38e40 ] 2
อินเตอร์ลิวคิน il8 [ 41 ] และ il12 [ 42 ] ) ในวันที่ 15 และ 30 PV
ไตของปลาเทราท์ ( N ¼ 3 ) จากแต่ละกลุ่มยังแปรรูป
ศึกษาการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน เช่น 1
, [ 43 ] และ IGT [ 44 ] ไพรเมอร์ที่ใช้ทั้งหมดมีการรายงานและการเพิ่มประสิทธิภาพในหน้า
34,35 [ การศึกษา ]
ถอดความ CD4 CD8 th และเซลล์เครื่องหมายยังประเมินการใช้ไพรเมอร์ cctgctcatccacagcctat
( F )
cttctcctggctgtctgacc ( R ) และค่า agtcgtgcaaagtgggaaag
( F ) และ ggttgcaatggcatacagtc ( R ) สำหรับ .ตัวเลขที่เพิ่มขึ้นที่สอดคล้องกันและมี ay973030.1 nm_001124263

, ) ปฏิกิริยา qpcr มีการปฏิบัติทั้งสามใบและ
แต่ละยีนและการแสดงออกของยีนที่เป็นปกติของการควบคุม ( การพบปัจจัยกระเทียมดอง
; ef1-a ) และแสดงเป็น
2  DCT ที่ข้อมูลถูกกำหนดโดยแบ่งเฉลี่ยค่า CT ef1-a
จาก CT เป้าหมายเฉลี่ย การเปลี่ยนแปลงในการแสดงออก
เทียบกับพลาสมิดพบว่าง pcdnawas บาง
ของกลุ่มตัวอย่างโดยใช้สูตร 2  ddct [ 45 ] ที่ไหน
ddct ¼ DCT ตัวอย่างของยีนเป้าหมาย  DCT ของคาลิเบรเตอร์ ( pcdna
ควบคุม )