2. Materials and MethodsVegetable w

2. Materials and Methods
Vegetable wastes: Tomato (Lycopersicon esculentum variety “Hybrid Rome”), lemon (Citrum limon), fennel
(Foeniculum vulgare) and carrot (Daucus carota) were kindly supplied from Fontanella Industry (Sa), Solagri
s.c. (Sant' Agnello di Sorrento, Na), Amato V. “Sammy Export” (Pagani, Sa), Tafuri Brothers for Polli Industry
(Battipaglia, Sa), respectively. Giant reed roots (Arundo donax) and cardoon (Cynara cardunculus) were
harvested at the experimental farm of the University “Federico II” and kindly supplied by prof. M. Fagnano. Every
waste was dried under vacuum, minced to comparable particle size and then used for bacterial growth.
Bacterial strains and culture conditions: Haloterrigena hispanica (type strain FP1T; DSM 18328 T; EMBL number
AM285297) (Romano et al., 2007), Geobacillus thermoleovorans subsp. stromboliensis, (type strain PizzoT;
DSM 15392T, DSMZ, Braunschweig, Germany; EMBL number AJ704828) (Romano et al., 2008), Halobacillus
alkaliphilus (type strain FP5T; DSM 18525T; EMBL number AM 295006) (Romano et al., 2005), Geobacillus
thermantarcticus, initially named Bacillus thermantarcticus (Coorevits et al., 2012; Lama et al., 2004) were
grown on their complex and minimal media with selected sugars as previously described (Di Donato et al.,
2011). For growth on waste as sole carbon source, 200 mL of each bacteria pre-cultures, prepared as above
mentioned, were transferred into the bioreactor filled with 1L minimal media containing 10 g L-1 waste for batch
cultivation (BF); for dialysis cultivation (DF), they were transferred in 875 mL minimal media in a bioreactor
including a dialysis tube (MWCO 12,000 – 14,000 Da) containing 10 g L-1 waste in 125 mL of the corresponding
minimal medium. Microbial biomass analysis: after 5, 4, 3 and 1 days of incubation for strains FP1, FP5, Pizzo
and M1, respectively, dialysis tube was removed and cells were harvested by centrifugation at 18,500 g × 20
min, washed with 50 mM Na-phosphate pH 7.0, centrifuged and freeze-dryed. Gravimetrical determinations of
dry cell weight were run in triplicate. Control experiments were carried out by measuring the dry cell weight after
growth of the four bacteria in the respective complex media.
Statistical analysis: significance of results was assessed by t test using SYSTAT 7.0 software. Total dry cell
weight obtained for all vegetable media was compared with complex media and sugar media results.
164
Carbohydrate and reducing sugars determination: Polysaccharides were extracted and their total carbohydrate
content was determined as previously described (Tommonaro et al., 2008). The reducing sugars concentration
was determined by means of the 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) method using appropriate sugar as standard
(Miller, 1959).
Poly-hydroxybutyric acid (PHB) production: PHB production by strain FP1, its isolation and structural
determination were performed as previously described (Di Donato et al., 2011).
Enzyme activities production: Intracellular alpha-glucosidase (E.C. 3.2.1.20) from strain FP5 was recovered
after cell sonication (Di Donato et al., 2011). Extracellular alpha-amylase (E.C. 3.2.1.1) from strain Pizzo was
recovered by ammonium sulphate (80%) precipitation, and partially purified by dialysis (MWCO 12,000-14,000
Da) against 50 mM sodium acetate buffer pH 5.6. Alpha-amylase activity was determined as previously
described (Finore et al., 2011). Extracellular xylanase (E.C. 3.2.1.8) from strain M1 was determined in the
extracellular milieu without any fractionation step (Lama et al., 2004).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการกากผัก: มะเขือเทศ (Lycopersicon esculentum หลากหลาย "ไฮบริโรม") ยี่หร่า มะนาว (ลิมอน Citrum)(Foeniculum vulgare) และแครอท (Daucus carota) ได้กรุณามาจาก Fontanella อุตสาหกรรม (Sa), Solagriเอส (ลีโอ ' Agnello di ซอร์เรนโต นา), Amato V. "Sammy ส่งออก" (Pagani, Sa), บราเดอร์อุตสาหกรรม Polli Tafuri(Battipaglia, Sa), ตามลำดับ รากกกยักษ์ (Arundo donax) และ cardoon (Cynara cardunculus)เก็บเกี่ยวผลผลิตในฟาร์มทดลองของมหาวิทยาลัย "Federico II" และกรุณาจัดทำ โดยศาสตราจารย์ Fagnano เมตร ทุกเสียแห้งภายใต้สุญญากาศ สับขนาดอนุภาคเทียบ และใช้สำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียสายพันธุ์แบคทีเรียและวัฒนธรรมเงื่อนไข: hispanica Haloterrigena (ต้องใช้ชนิด FP1T DSM 18328 T หมายเลข EMBLAM285297) (โรมาโนและ al., 2007), Geobacillus thermoleovorans ถั่ว stromboliensis, (ต้องใช้ชนิด PizzoT15392T, DSMZ เบราน์ชไวก์ เยอรมนี DSM EMBL หมายเลข AJ704828) (โรมาโนและ al., 2008), Halobacillusalkaliphilus (ต้องใช้ชนิด FP5T DSM 18525T หมายเลข EMBL AM 295006) (โรมาโนและ al., 2005), Geobacillusthermantarcticus เริ่มต้นชื่อคัด thermantarcticus (Coorevits et al., 2012 Lama et al., 2004) ได้โตกับน้ำตาลเลือกที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็น สื่อที่ซับซ้อน และน้อยที่สุดของพวกเขา (ดิโดนาโต et al.,2011) สำหรับการเจริญเติบโตบนเสียเป็นแหล่งคาร์บอนแต่เพียงผู้เดียว 200 mL ของวัฒนธรรมแต่ละก่อนแบคทีเรีย เตรียมดังกล่าวกล่าว ถูกโอนเข้า bioreactor ที่เต็มไป ด้วยสื่อน้อย 1L ประกอบด้วยเสีย 10 g L-1 สำหรับชุดงานเพาะปลูก (เอฟ); สำหรับปลูกพืชในหน่วย (DF), จะถูกโอนย้ายใน 875 มล. bioreactor น้อยที่สุดสื่อรวมทั้งท่อหน่วย (MWCO 12000 – 14000 ดา) ประกอบด้วย 10 g L-1 เสียใน 125 mL ของให้สอดคล้องกับปานกลางน้อยที่สุด ชีวมวลจุลินทรีย์วิเคราะห์: หลัง 5, 4, 3 และ 1 วันของคณะทันตแพทยศาสตร์สายพันธุ์ FP1, FP5, Pizzoและ M1 ตามลำดับ หน่วยหลอดถูกเอาออก และเซลล์เก็บเกี่ยว โดย centrifugation ที่ 18500 g × 20นาที ล้าง ด้วย 50 มม.นาฟอสเฟต pH 7.0, centrifuged และตรึง dryed Determinations gravimetrical ของน้ำหนักเซลล์แห้งถูกเรียกใช้ใน triplicate ควบคุมการทดลองได้ดำเนินการ โดยการวัดน้ำหนักเซลล์แห้งหลังจากเจริญเติบโตของแบคทีเรีย 4 สื่อที่ซับซ้อนตามลำดับสถิติวิเคราะห์: ความสำคัญของผลลัพธ์ถูกประเมิน โดยใช้ซอฟแวร์ SYSTAT 7.0 ทดสอบ t เซลล์แห้งรวมน้ำหนักที่รับสื่อทั้งหมดผักถูกเปรียบเทียบกับสื่อที่ซับซ้อนและผลสื่อน้ำตาล164คาร์โบไฮเดรตและการลดการกำหนดน้ำตาล: Polysaccharides ถูกสกัด และคาร์โบไฮเดรตทั้งหมดของพวกเขาเนื้อหาที่ถูกกำหนดเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Tommonaro et al., 2008) ความเข้มข้นของน้ำตาลลดลงกำหนด โดยวิธีกรด (DNS) 3,5-dinitrosalicylic การใช้น้ำตาลที่เหมาะสมเป็นมาตรฐาน(มิลเลอร์ 1959)ผลิตโพลี hydroxybutyric กรด (PHB): ผลิต PHB โดยต้องใช้ FP1 แยก และโครงสร้างกำหนดได้ดำเนินการเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Di โดนาโตและ al., 2011)ผลิตเอนไซม์กิจกรรม: Intracellular alpha-glucosidase (E.C. 3.2.1.20) จากต้องใช้ FP5 ถูกกู้คืนหลังจากเซลล์ sonication (ดิโดนาโตและ al., 2011) Extracellular อัลฟา-amylase (E.C. 3.2.1.1) จากต้องใช้ Pizzo ได้กู้ โดยฝนแอมโมเนียมซัลเฟต (80%) และบริสุทธิ์บางส่วน โดยหน่วย (MWCO 12000 14000ดา) กับ 50 mM โซเดียม acetate บัฟเฟอร์ pH 5.6 กำหนดกิจกรรม alpha amylase เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย (Finore et al., 2011) (E.C. 3.2.1.8) ไซลาเนส extracellular จาก M1 ต้องใช้กำหนดในการฤทธิ์ extracellular โดยไม่แยกส่วนทุกขั้นตอน (Lama et al., 2004)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.
วัสดุและวิธีการเสียผัก: มะเขือเทศ (Lycopersicon esculentum หลากหลาย "ไฮบริดโรม") มะนาว (Citrum ลิ) ยี่หร่า
(Foeniculum vulgare) และแครอท (Daucus Carota) ได้รับการจัดจำหน่ายกรุณาจาก Fontanella อุตสาหกรรม (Sa) Solagri
เซาท์แคโรไลนา (Sant 'Agnello ดิซอร์เรนนา), อะโวลต์ "แซมมี่ส่งออก" (Pagani, Sa) Tafuri พี่น้อง Polli อุตสาหกรรม
(Battipaglia, Sa) ตามลำดับ รากยักษ์กก (Arundo donax) และ cardoon (Cynara cardunculus)
ได้รับการเก็บเกี่ยวที่ฟาร์มทดลองของมหาวิทยาลัย"Federico II" และจัดจำหน่ายโดยศาสตราจารย์กรุณา เอ็ม Fagnano
ทุกขยะแห้งภายใต้สุญญากาศสับให้มีขนาดอนุภาคที่เทียบเคียงและนำไปใช้ในการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย.
สายพันธุ์แบคทีเรียและเงื่อนไขวัฒนธรรม: Haloterrigena Hispanica (ชนิด FP1T ความเครียด; DSM 18328 T จำนวน EMBL
(. โรมาโน, et al, 2007) AM285297) Geobacillus thermoleovorans subsp stromboliensis (ชนิดสายพันธุ์ PizzoT;
DSM 15392T, DSMZ, รอนชเยอรมนีจำนวน EMBL AJ704828) Halobacillus (โรมาโน, et al, 2008).
alkaliphilus (ชนิดสายพันธุ์ FP5T; DSM 18525T; จำนวน EMBL AM 295006). (โรมาโน, et al, 2005) Geobacillus
thermantarcticus, ชื่อแรก Bacillus thermantarcticus (Coorevits et al, 2012;.. มะ, et al, 2004)
ถูก. ปลูกในสื่อที่ซับซ้อนและน้อยที่สุดของพวกเขาด้วยการคัดเลือกให้เป็นน้ำตาลอธิบายไว้ก่อนหน้า (ดิโดนา, et al,
2011) สำหรับการเจริญเติบโตของเสียเป็นแหล่งคาร์บอน แต่เพียงผู้เดียว 200
มิลลิลิตรของแต่ละแบคทีเรียก่อนวัฒนธรรมที่เตรียมไว้ข้างต้นกล่าวถูกโอนเข้ามาในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพที่เต็มไปด้วย1L สื่อที่มีน้อยที่สุด 10 กรัม L-1
เสียสำหรับชุดการเพาะปลูก(BF); สำหรับการเพาะปลูกการฟอกเลือด (DF) พวกเขาถูกย้ายใน 875
มิลลิลิตรสื่อน้อยที่สุดในระบบถังหมักรวมทั้งหลอดฟอกเลือด(MWCO 12,000 - 14,000 ดา) ที่มี 10 กรัม L-1 ของเสียใน 125
มิลลิลิตรที่สอดคล้องกันกลางน้อยที่สุด การวิเคราะห์ชีวมวลจุลินทรีย์: หลังจาก 5, 4, 3 และ 1 วันของการบ่มสำหรับสายพันธุ์ FP1, FP5, Pizzo
และ M1 ตามลำดับท่อล้างไตจะถูกลบออกและเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 18,500 กรัม× 20
นาทีล้างด้วย 50 มมนา ฟอสเฟต pH 7.0 ปั่นและแช่แข็ง dryed หาความ Gravimetrical
ของน้ำหนักเซลล์แห้งวิ่งในเพิ่มขึ้นสามเท่า
การทดลองควบคุมได้ดำเนินการโดยการวัดน้ำหนักเซลล์แห้งหลังจากการเจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียที่สี่ในสื่อที่ซับซ้อนที่เกี่ยวข้อง.
การวิเคราะห์ทางสถิติอย่างมีนัยสำคัญของผลที่ได้รับการประเมินโดยการทดสอบทีใช้ซอฟต์แวร์ซิสแตท 7.0
เซลล์แห้งรวมน้ำหนักได้สำหรับสื่อผักทั้งหมดเมื่อเทียบกับสื่อที่ซับซ้อนและน้ำตาลผลสื่อ.
164
คาร์โบไฮเดรตน้ำตาลและลดความมุ่งมั่น:
คาไรด์ถูกสกัดและคาร์โบไฮเดรตทั้งหมดของพวกเขาเนื้อหาถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(. Tommonaro et al, 2008) น้ำตาลความเข้มข้นลดถูกกำหนดโดยวิธีการของกรด 3,5-dinitrosalicylic (DNS) วิธีการใช้น้ำตาลที่เหมาะสมเป็นมาตรฐาน (มิลเลอร์, 1959). กรดโพลี hydroxybutyric (PHB) การผลิต: การผลิต PHB โดยสายพันธุ์ FP1 แยกและโครงสร้างความมุ่งมั่นที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Di Donato et al, 2011).. กิจกรรมการผลิตเอนไซม์: Intracellular alpha-glucosidase (EC 3.2.1.20) จากความเครียด FP5 หายหลังจากเซลล์sonication (. Di Donato et al, 2011) สารอัลฟาอะไมเลส (EC 3.2.1.1) จากความเครียด Pizzo ได้รับการกู้คืนโดยแอมโมเนียมซัลเฟต(80%) การเร่งรัดและบริสุทธิ์บางส่วนโดยการฟอกเลือด (MWCO 12,000-14,000 ดา) กับโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 50 มิลลิ 5.6 กิจกรรมอัลฟาอะไมเลสที่ถูกกำหนดไว้ก่อนหน้านี้ที่อธิบาย (Finore et al., 2011) นอกไซลาเนส (EC 3.2.1.8) จากความเครียด M1 ถูกกำหนดไว้ในสภาพแวดล้อมนอกโดยไม่ต้องแยกขั้นตอนใดๆ (มะ et al., 2004)