2. Materials and methods2.1. Coral

2. Materials and methods
2.1. Coral specimens
Colonies of the branching coral M. digitata were collected from a
coastal region of Okinawa Island, Japan with permission from the
Okinawa prefectural government (No. 22-5). Coral branch tips
(ca. 4 cm long) from large coral colonies were cut and attached to a
polyethylene net. Brancheswere kept for 2 weeks in an outdoor aquariumwith
running seawater, to allow for recovery fromsampling stress.
2.2. Bacterial strains
Five species of bacteria, V. coralliilyticus (AB490821), Vibrio harveyi
(AB490822), Paracoccus carotinifaciens (AB490820), Pseudoalteromonas
sp. (AB691769), and Sulfitobacter sp. (AB691770), were prepared for
this experiment. These bacteria are naturally found in coastal regions
of Okinawa, Japan. V. coralliilyticus and V. harveyi were isolated from
seawater in Sesoko, Okinawa. P. carotinifaciens was isolated from
bleached M. digitata. Pseudoalteromonas sp. and Sulfitobacter sp. were
isolated from the water surrounding bleached M. digitata. All bacteria
were cultured separately to stationary growth phase (108 cells ml−1)
in liquid marine broth medium. Every day, the cultures were mixed,
washed through three consecutive centrifugations to remove themedium,
and diluted in filtered seawater before being mixed. The mixed
solution containing the five cultured bacterial species was used for
the inoculation experiment. After inoculation, the total abundance of
bacteria in each incubation vessel was counted using flow cytometry
(Beckman Coulter) with SYBR Green. The numbers of bacteria
(cells ml−1) under the different conditions were: 6.7×105 at 27 °C
without bacteria, 1.3×106 at 27 °C with bacteria, 5.5×105 at 32 °C
without bacteria, and 1.2×106 at 32 °C with bacteria. To confirm the
effects of each bacterial species, individual species (V. coralliilyticus,
V. harveyi, Pseudoalteromonas sp., and Sulfitobacter sp.) and a mix of
three species (V. coralliilyticus, V. harveyi, and P. carotinifaciens) were
also tested, using a final abundance of approximately 106 cells ml−1.
2.3. Experimental design
A continuous-flow complete-mixing (CFCM) experimental system,
described by Fujimura et al. (2008), was used for incubation
of the coral colonies. Seawater temperatures were set at 27 °C or
32 °C, and two levels of bacterial abundance (no addition and

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. ปะการังไว้เป็นตัวอย่างอาณานิคมของ digitata เมตรปะการังโยงหัวข้อรวบรวมจากการพื้นที่ชายฝั่งของเกาะโอกินาว่า ญี่ปุ่นได้รับอนุญาตจากการโอกินาวารัฐบาล (หมายเลข 22-5) เคล็ดลับสาขาปะการัง(ca. ยาว 4 cm) จากปะการังใหญ่ อาณานิคมถูกตัด และแนบกับตัวเอทิลีสุทธิ Brancheswere เก็บไว้ 2 สัปดาห์ในการ aquariumwith กลางแจ้งใช้น้ำทะเล เพื่อให้การกู้คืน fromsampling ความเครียด2.2. แบคทีเรียสายพันธุ์พันธุ์แบคทีเรีย V. coralliilyticus (AB490821), harveyi ผลห้า(AB490822), Paracoccus carotinifaciens (AB490820), Pseudoalteromonassp. (AB691769), และ Sulfitobacter sp. (AB691770), ถูกเตรียมไว้สำหรับการทดลองนี้ แบคทีเรียเหล่านี้จะพบตามธรรมชาติในพื้นที่ชายฝั่งของโอกินาว่า ญี่ปุ่น V. coralliilyticus และ V. harveyi ได้แยกต่างหากจากทะเลใน Sesoko โอกินาว่า P. carotinifaciens ถูกแยกต่างหากจากเซล digitata เมตร Pseudoalteromonas sp.และ Sulfitobacter spแยกต่างหากจากน้ำรอบเซล digitata เมตร แบคทีเรียทั้งหมดมีอ่างแยกต่างหากกับระยะการเจริญเติบโตของเครื่องเขียน (108 เซลล์ ml−1)ในซุปน้ำทะเล ทุกวัน รวมวัฒนธรรมล้างผ่าน centrifugations ติดกันสามเอา themediumและแตกออกในน้ำทะเลกรองก่อนการผสม การผสมใช้สำหรับโซลูชันที่ประกอบด้วยห้าสายพันธุ์แบคทีเรียอ่างทดลอง inoculation หลังจาก inoculation รวมมายในเรือแต่ละคณะทันตแพทยศาสตร์ถูกนับโดยใช้เซลล์กระแส(Beckman Coulter) กับ SYBR Green จำนวนแบคทีเรีย(เซลล์ ml−1) ภายใต้เงื่อนไขแตกต่างกันได้: 6.7 × 105 ที่ 27 ° Cโดยแบคทีเรีย 1.3 × 106 ที่ 27 ° C มีแบคทีเรีย 5.5 × 105 ที่ 32 ° Cโดยแบคทีเรีย และ 1.2 × 106 ที่ 32 ° C กับแบคทีเรีย เพื่อยืนยันการลักษณะพิเศษของแต่ละสายพันธุ์แบคทีเรีย แต่ละชนิด (V. coralliilyticusV. harveyi, Pseudoalteromonas sp. และ Sulfitobacter sp) และผสมสามสายพันธุ์ (V. coralliilyticus, V. harveyi และ P. carotinifaciens) ได้นอกจากนี้ยัง ทดสอบ ใช้มาย ml−1 ประมาณ 106 เซลล์สุดท้าย2.3 การทดลองออกแบบขั้นตอนที่ต่อเนื่องสมบูรณ์ผสม (CFCM) ทดลองระบบอธิบายโดย Fujimura et al. (2008) ใช้ในคณะทันตแพทยศาสตร์ของอาณานิคมปะการัง อุณหภูมิน้ำทะเลถูกตั้งที่ 27 ° C หรือ32 ° C และระดับสองของแบคทีเรียมากมาย (ไม่เพิ่ม และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ตัวอย่างของอาณานิคม
ปะการังปะการังกิ่งก้าน ม. digitata ถูกรวบรวมจากพื้นที่ชายฝั่งของเกาะโอกินาวา
ญี่ปุ่นได้รับอนุญาตจากรัฐบาล Prefectural โอกินาวา
( ไม่ 22-5 ) เคล็ดลับปะการัง
( ยาวประมาณ 4 ซม. ) จากโคโลนีปะการังขนาดใหญ่ที่ถูกตัดและแนบกับ
พลาสติกสุทธิ brancheswere เก็บไว้เป็นเวลา 2 สัปดาห์ ในการสระ aquariumwith
หนีน้ำทะเลเพื่อให้สามารถกู้คืน fromsampling ความเครียด .
2.2 . สายพันธุ์เชื้อ สายพันธุ์ของแบคทีเรีย
5 V coralliilyticus ( ab490821 ) , Vibrio harveyi
( ab490822 ) paracoccus carotinifaciens ( ab490820 ) pseudoalteromonas
sp . ( ab691769 ) และ sulfitobacter sp . ( ab691770 ) ถูกเตรียมไว้สำหรับ
การทดลองนี้ แบคทีเรียเหล่านี้จะพบตามธรรมชาติในภูมิภาคชายฝั่ง
โอกินาว่า ประเทศญี่ปุ่น coralliilyticus และ V Vที่แยกได้จากน้ำทะเลใน 5
sesoko , โอกินาว่า . หน้า carotinifaciens ถูกแยกจาก
ฟอกขาวม. digitata . pseudoalteromonas sp . และ sulfitobacter sp . ที่แยกได้จากน้ำรอบๆ
digitata ฟอกขาวเมตร . แบคทีเรียทั้งหมด
เพาะเลี้ยงแยกระยะการเจริญเติบโตคงที่ ( 108 เซลล์ ml − 1 )
ในกลางทะเลน้ำของเหลว ทุกๆ วัน วัฒนธรรมที่ถูกผสม ,
ล้างผ่านสาม centrifugations ติดต่อกันเพื่อลบปานกลาง
เจือจางในกรองน้ำทะเล , และก่อนที่จะถูกผสม ผสมสารละลายที่มีการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียนี้

( ชนิดที่ใช้สำหรับการทดลอง หลังจากที่ได้รับปริมาณรวมของแบคทีเรียในแต่ละบ่ม
เรือนับใช้กระแส (
( Beckman Coulter ) กับ SYBR กรีน ตัวเลขของแบคทีเรีย
( เซลล์ ml − 1 ) ภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่างกัน : 6.7 × 105 ที่ 27 ° C
ปราศจากแบคทีเรีย 1.3 × 106 ที่ 27 ° C กับแบคทีเรีย , 5.5 × 105 ที่ 32 ° C
ปราศจากแบคทีเรีย และ 1.2 × 106 ที่ 32 ° C กับแบคทีเรีย เพื่อยืนยันผลของแบคทีเรียแต่ละชนิด แต่ละชนิด ( coralliilyticus
V , V . harveyi pseudoalteromonas sp . , และ sulfitobacter sp . ) และส่วนผสมของ
3 ชนิด ( V . V . harveyi coralliilyticus , ,และ P . carotinifaciens )
นอกจากนี้ ทดสอบโดยใช้สุดท้ายมากมายประมาณ 106 เซลล์ ml − 1 .
2.3 การออกแบบการทดลองการไหลอย่างต่อเนื่องสมบูรณ์ผสม ( cfcm ) ระบบทดลอง
อธิบายโดยฟุจิ et al . ( 2008 ) , ใช้สำหรับการบ่ม
อาณานิคมของปะการัง อุณหภูมิน้ำทะเลที่ถูกตั้งที่ 27 ° C หรือ
32 °องศาเซลเซียสและสองระดับของแบคทีเรียมากมาย ( ไม่มีการบวกและ