2.3. Preparation and propagation of

2.3. Preparation and propagation of yeast cells

The dried yeast powder (S. cerevisiae) was aseptically inoculated into ten 150-ml Erlenmeyer flasks each containing 50 ml sterilized yeast malt extract (YM) broth. The flasks were incubated at 30 °C for 48 h and 100 rpm in an incubator shaker (Innova 4000, New Brinswick Scientific, USA). Ten percent of the inoculum was aseptically transferred to each of 10 sterilized 250-ml Erlenmeyer flasks containing 100 ml sterilized PYGAL medium composed of (%; w/v) peptone 0.3, yeast extract 0.3, KH2PO4 0.1, MgSO4·7H2O 0.1 and galactose 2.0. The pH of the medium was adjusted to 5.6 and the flasks were incubated at 35 °C for 24 h at 100 rpm in an incubator shaker. Fifty milliliters of the inoculum obtained from each flask after 24 h incubation was aseptically transferred to a 1-l flask containing 500 ml sterilized PYGAL medium. The 10 1-l flasks were incubated at 35 °C for 24 h at 100 rpm in an incubator shaker. PYGAL medium was prepared fresh each time, just prior to the fermentation experiments. Cells were concentrated by centrifugation of culture in sterilized centrifuge tubes at 10,000g at 4 °C for 10 min in a refrigerated centrifuge (Sorvall superspeed FCC B, Sorvall Inc., USA). The supernatant was discarded from the centrifuge tubes and the tubes containing pellets were votexed on a vortex shaker. The contents from all the tubes were aseptically transferred to two sterilized 50-ml centrifuge tubes. Depending upon the cell count in suspension, the process was repeated for further concentration of the cells. Since the objective of this study was to achieve high ethanol productivity, the cells were concentrated to a level of 3 × 109 cells/ml for inoculation purpose. Previous studies reported that S. cerevisiae grown on galactose helped in simultaneous fermentation of glucose and galactose in high cell density fermentation ( Ernandes et al., 1992). In a previous study we found a 30% increase in ethanol production from kinnow (Citrus reticulata) waste using S. cerevisiae cells grown on galactose compared with the cells grown on glucose in a SSF process (data not shown).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การเตรียมและการแพร่กระจายของเซลล์ยีสต์ผงยีสต์แห้ง (S. cerevisiae) มี inoculated เป็นสิบ 150 ml Erlenmeyer นำแต่ละ aseptically ประกอบด้วย 50 ml sterilized ยีสต์ข้าวมอลต์สกัดซุป (YM) น้ำมี incubated ที่ 30 ° C 48 h และ 100 รอบต่อนาทีในการบ่มเพาะวิสาหกิจเชคเกอร์ (4000 หัวใจ ใหม่ Brinswick วิทยาศาสตร์ สหรัฐอเมริกา) สิบเปอร์เซ็นต์ของ inoculum ถูกถ่ายโอนไป 10 sterilized 250 ml Erlenmeyer น้ำประกอบด้วยปานกลาง PYGAL 100 ml sterilized ประกอบด้วย aseptically (% w/v) peptone 0.3 ยีสต์สารสกัด 0.3, KH2PO4 0.1, MgSO4·7H2O 0.1 และกาแล็กโทส 2.0 PH ของตัวกลางมีการปรับปรุงการ 5.6 และน้ำมี incubated ที่ 35 ° C ใน 24 ชมที่ 100 rpm ในเชคเกอร์การบ่มเพาะวิสาหกิจ Milliliters 50 ของ inoculum ที่ได้รับจากแต่ละหนาวหลังจากบ่ม 24 h ถูกถ่ายโอนไปหนาว 1 l ที่ประกอบด้วยขนาดกลาง 500 ml sterilized PYGAL aseptically น้ำ 1 l 10 ได้ incubated ที่ 35 ° C ใน 24 ชมที่ 100 rpm ในเชคเกอร์การบ่มเพาะวิสาหกิจ PYGAL กลางถูกเตรียมสดกัน ก่อนทดลองหมัก เซลล์เข้มข้น โดย centrifugation วัฒนธรรมในหลอด sterilized เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 10000 g ที่ 4 ° C สำหรับ 10 นาทีในเครื่องหมุนเหวี่ยงควบคุมอุณหภูมิ (สหรัฐอเมริกา FCC B, Sorvall Inc., Sorvall superspeed) Supernatant ถูกละทิ้งจากหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยง และหลอดประกอบด้วยขี้มี votexed ในการเชคเกอร์ vortex เนื้อหาจากหลอดทั้งหมดได้ถูกโอนย้ายไปสองเครื่องหมุนเหวี่ยง 50 ml sterilized ท่อ aseptically ขึ้นอยู่กับจำนวนเซลล์ในการระงับ การถูกซ้ำสำหรับการเพิ่มเติมความเข้มข้นของเซลล์ เนื่องจากวัตถุประสงค์ของการศึกษานี้คือการ ให้ผลผลิตเอทานอลสูง เซลล์เข้มข้นระดับของ 3 × 109 เซลล์/มล. inoculation ประสงค์ การศึกษาก่อนหน้านี้รายงาน cerevisiae S. ที่ปลูกในกาแล็กโทสที่ช่วยในการหมักเกิดกาแล็กโทสและกลูโคสในเซลล์สูงความหนาแน่นหมัก (Ernandes et al., 1992) ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราพบการเพิ่มขึ้น 30% ในการผลิตเอทานอลจาก kinnow (ส้ม reticulata) ใช้ S. cerevisiae เซลล์เติบโตบนกาแล็กโทสเมื่อเทียบกับเซลล์ที่ปลูกในน้ำตาลกลูโคสในกระบวนการ SSF (ข้อมูลไม่แสดง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การเตรียมและการแพร่กระจายของเซลล์ยีสต์ผงยีสต์แห้ง (เอส cerevisiae) ได้รับเชื้อปลอดเชื้อเป็นสิบ 150 มล. ขวด Erlenmeyer แต่ละที่มี 50 มลสารสกัดจากมอลต์ผ่านการฆ่าเชื้อยีสต์ (YM) น้ำซุป ขวดถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงและ 100 รอบต่อนาทีในเครื่องปั่นศูนย์บ่มเพาะ (Innova 4000, ใหม่ Brinswick วิทยาศาสตร์สหรัฐอเมริกา) ร้อยละสิบของเชื้อถูกย้ายปลอดเชื้อให้กับแต่ละ 10 ฆ่าเชื้อ 250 มล. ขวด Erlenmeyer มี 100 มล. ฆ่าเชื้อกลาง PYGAL ประกอบด้วย (% w / v) เปปโตน 0.3 ยีสต์สกัด 0.3 KH2PO4 0.1, MgSO4 · 7H2O 0.1 และกาแลคโต 2.0 . ค่า pH ของกลางที่ได้รับการปรับให้ 5.6 และขวดที่ถูกบ่มที่ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 100 รอบต่อนาทีในเครื่องปั่นศูนย์บ่มเพาะ ห้าสิบมิลลิลิตรหัวเชื้อที่ได้รับจากแต่ละขวดหลังจากบ่ม 24 ชั่วโมงถูกย้ายไปที่ปลอดเชื้อขวด 1 ลิตรที่มีการฆ่าเชื้อ 500 มลกลาง PYGAL 10 1 ลิตรขวดถูกบ่มที่ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 100 รอบต่อนาทีในเครื่องปั่นศูนย์บ่มเพาะ กลาง PYGAL ถูกจัดทำสดใหม่ทุกครั้งก่อนที่จะทดลองการหมัก เซลล์ที่ถูกเข้มข้นโดยการหมุนเหวี่ยงของวัฒนธรรมในการฆ่าเชื้อหลอดหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g ที่ 4 ° C เป็นเวลา 10 นาทีในการหมุนเหวี่ยงตู้เย็น (Sorvall SuperSpeed ​​FCC B, Sorvall อิงค์สหรัฐอเมริกา) สารละลายทิ้งจากหลอดหมุนเหวี่ยงและท่อที่มีเม็ดถูก votexed ในเครื่องปั่นน้ำวน เนื้อหาจากหลอดทั้งหมดถูกโอนปลอดเชื้อสองฆ่าเชื้อ 50 มิลลิลิตรหลอดหมุนเหวี่ยง ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับจำนวนเซลล์ในการระงับกระบวนการซ้ำสำหรับความเข้มข้นต่อไปของเซลล์ เนื่องจากวัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้คือการผลิตเอทานอลประสบความสำเร็จสูงเซลล์มีความเข้มข้นถึงระดับของ 3 × 109 เซลล์ / มล. เพื่อจุดประสงค์ในการฉีดวัคซีน ศึกษาก่อนหน้านี้มีรายงานว่าเอส cerevisiae ที่ปลูกในกาแลคโตช่วยในการหมักพร้อมกันของกลูโคสและกาแลคโตในการหมักเซลล์ความหนาแน่นสูง (Ernandes et al., 1992) ในการศึกษาก่อนหน้านี้เราพบว่าเพิ่มขึ้น 30% ในการผลิตเอทานอลจาก kinnow (Citrus reticulata) เสียโดยใช้เซลล์ S. cerevisiae ที่ปลูกในกาแลคโตเมื่อเทียบกับเซลล์ที่ปลูกในกลูโคสในกระบวนการ SSF (ที่ไม่ได้แสดงข้อมูล)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับคนที่อยากเป็นผู้กำกับ