Analyses of aflatoxins were perform

Analyses of aflatoxins were performed using immunoaffinity
columns, described as follows. Identification and determination of
aflatoxins B1, B2, G1 and G2 in peanut and corn samples were carried
out by high performance liquid chromatography (HPLC). An aliquot
of the sample (25 g or 50 g for peanut or corn, respectively) was
weighted in an Erlenmeyer flask containing 5 g of sodium chloride
and 125 mL of methanol/water (70:30, v/v) for peanut or 100 mL of
methanol/water (80:20, v/v) for corn were added. The flask was
placed in an orbital shaker (Tecnal, Piracicaba, Brazil) for 30 min,
filtered, and to an aliquot (20 or 10 mL for peanut or corn,
respectively), 20 mL or 40 mL of ultra-pure water were added and
the mixture homogenized. An aliquot (10 mL) was then passed
through the immunoaffinity column (Vicam, Watertown, MA, USA)
at flow rate of 1e2 drops per second. After washing with 20 mL of
ultra-pure water, aflatoxins were eluted from the column with 1 mL
of methanol and the eluate was collected in an amber vial. The
eluate was evaporated to dryness under nitrogen flow. Derivatisation
of AFB1 and AFG1 was obtained by adding 200 mL of n-hexane
and 200 mL of trifluoroacetic acid (TFA). The mixture was kept at
40 C for 10 min, evaporated to near-dryness and diluted in 1 mL of
methanol:water (50:50, v/v). Final extracts were filtered through a
0.45 mm PTFEmembrane prior to injection into HPLC column.
Bean samples were extracted exactly by the same method
described for corn samples, except that 20 mL were eluted through
the immunoaffinity column.
AFM1 was determined in milk as proposed by the manufacturer
of the immunoaffinity columns (Aflatest, Vicam, Watertown, MA,
USA) with minor modifications. Forty milliliter of sample was
heated at 37 C for 10 min, added of 1 g of sodium chloride and
centrifuged at 3500 rpm for 5 min. The upper fat layer was removed
and the sample was centrifuged again to remove remaining fat. The
sample was filtered under vacuum through Whatman no. 4 filter
paper and 30 mL applied to immunoaffinity column, which was
connected to a glass syringe and a vacuum system (flow of 2e
3 mL min1
). The column was washed with 20 mL of ultra-pure
water and AFM1 was eluted with 1 mL of methanol. The eluate
was evaporated to near-dryness under nitrogen flow and the dried
extract was resuspended in 1 mL of methanol/water (50:50, v/v).
The determination of AFM1 in yoghurt and cheese was performed
by the method proposed by Iha, Barbosa, Favaro, et al. (2011) and Iha,
Barbosa, Okada, et al. (2011), with minor modifications. Eight g of
grinded cheese or yoghurt were added of 2 g of sodium chloride,
22 mL of methanol and 13 or 12 mL of water for cheese or yoghurt,
respectively. The mixture was homogenized in a mixer for 1 min,
centrifuged at 3500 rpm for 10 min. The supernatants of cheese
samples were filtered through Whatman no. 4 filter paper. Twenty
mL of previous extract were diluted with 40 mL of ultra-pure water
and passed through immunoaffinity column. The following extraction
steps were the same as described for milk samples.
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ aflatoxins ถูกดำเนินการโดยใช้ immunoaffinityคอลัมน์ อธิบายได้ดังนี้ ระบุและกำหนดได้ดำเนินการ aflatoxins B1, B2, G1 และ G2 ในตัวอย่างถั่วลิสงและข้าวโพดด้วยประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ออก ส่วนลงตัวของตัวอย่าง (25 กรัมหรือ 50 กรัมถั่วลิสงหรือข้าวโพด ตามลำดับ) ได้ถ่วงน้ำหนักในการหนาว Erlenmeyer ประกอบด้วย 5 กรัมของโซเดียมคลอไรด์125 mL ของเมทานอล/น้ำ (70:30, v/v สำหรับถั่วลิสง) หรือ 100 mL ของมีเพิ่มเมทานอล/น้ำ (80:20, v/v) ข้าวโพด หนาวมีวางในที่โคจรเชคเกอร์ (Tecnal, Piracicaba บราซิล) สำหรับ 30 นาทีกรอง และส่วนลงตัว (10 หรือ 20 มล.สำหรับถั่วลิสงหรือข้าวโพดตามลำดับ), เพิ่มปริมาณ 20 mL หรือ 40 mL ของน้ำบริสุทธิ์พิเศษ และผสม homogenized เป็นกลุ่ม ส่วนลงตัว (10 มล.) แล้วส่งผ่านคอลัมน์ immunoaffinity (Vicam, Watertown, MA สหรัฐอเมริกา)ที่อัตราการไหลของ 1e2 หยดต่อวินาที หลังจากการซักผ้าด้วย 20 mL ของน้ำบริสุทธิ์พิเศษ aflatoxins ถูก eluted จากคอลัมน์ที่มี 1 mLเมทานอลและ eluate ได้รวบรวมในคอนแทคเป็นสีเหลืองอำพัน ที่eluate ได้หายไปกับความแห้งกร้านภายใต้กระแสไนโตรเจน DerivatisationAFB1 และ AFG1 ได้รับ โดยการเพิ่ม 200 mL ของเอ็นเฮกเซนและ 200 มิลลิลิตรของกรด trifluoroacetic (TFA) ส่วนผสมถูกเก็บไว้ที่40 C สำหรับ 10 นาที ที่หายไปให้ใกล้ความแห้งกร้าน และทำให้ใน 1 มิลลิลิตรของเมทานอล: น้ำ (คนละครึ่ง v/v) สารสกัดสุดท้ายถูกกรองผ่าน0.45 มม. PTFEmembrane ก่อนที่จะฉีดลงในคอลัมน์ HPLCตัวอย่างถั่วถูกสกัด โดยวิธีเดียวกันทุกประการอธิบายตัวอย่างข้าวโพด ยกเว้นว่า 20 mL มี eluted ผ่านคอลัมน์ immunoaffinityกำหนด AFM1 ในน้ำนมตามที่เสนอโดยผู้ผลิตคอลัมน์ immunoaffinity (Aflatest, Vicam, Watertown, MAสหรัฐอเมริกา) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สี่สิบ milliliter ของตัวอย่างได้อุ่นที่ 37 C สำหรับ 10 นาที เพิ่มของ 1 กรัมของโซเดียมคลอไรด์ และcentrifuged ที่ 3500 rpm สำหรับ 5 นาที ชั้นไขมันบนถูกเอาออกและตัวอย่างถูก centrifuged อีกเพื่อเอาไขมันส่วนที่เหลือ ที่ตัวอย่างถูกกรองภายใต้สุญญากาศผ่านตัวกรอง Whatman หมายเลข 4ใช้กระดาษและ 30 mL กับคอลัมน์ immunoaffinity ซึ่งเป็นเชื่อมต่อกับระบบสูญญากาศ (กระแสของ 2e และเข็มแก้วmin1 3 mL). มีล้างคอลัมน์ ด้วย 20 mL ของแท้ทันน้ำและ AFM1 ถูก eluted กับ mL 1 ของเมทานอล Eluateหายไปให้ใกล้ความแห้งกร้านภายใต้กระแสไนโตรเจนและที่แห้งแยกเป็น resuspended ใน 1 mL ของเมทานอล/น้ำ (คนละครึ่ง v/v)ทำการกำหนด AFM1 ในโยเกิร์ตและชีสโดยวิธีการที่เสนอ โดย Iha, Barbosa ฟาวา โร Iha และ al. et (2011)Barbosa โอคาดะ et al. (2011), มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย G 8 ของมีเพิ่ม grinded ชีสหรือโยเกิร์ตของ 2 กรัมของโซเดียมคลอไรด์22 mL ของเมทานอลและ 13 หรือ 12 mL น้ำชีสหรือโยเกิร์ตตามลำดับ ส่วนผสมถูก homogenized เป็นกลุ่มในผสมใน 1 นาทีcentrifuged ที่ 3500 rpm สำหรับ 10 นาที Supernatants ของชีสตัวอย่างที่กรองโดยใช้กระดาษกรอง Whatman หมายเลข 4 20mL สารสกัดจากก่อนหน้านี้ได้ถูกผสมกับ 40 mL ของน้ำบริสุทธิ์พิเศษและผ่านทางคอลัมน์ immunoaffinity แยกต่อไปนี้ขั้นตอนเหมือนกับที่อธิบายไว้ในตัวอย่างนม2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ aflatoxins ถูกดำเนินการโดยใช้ immunoaffinity
คอลัมน์อธิบายดังนี้ บัตรประจำตัวและความมุ่งมั่นของ
aflatoxins B1, B2, G1 และ G2
ในถั่วลิสงและข้าวโพดตัวอย่างได้ดำเนินการโดยมีประสิทธิภาพสูงของเหลวchromatography (HPLC) aliquot
ของกลุ่มตัวอย่าง (25 กรัมหรือ 50 กรัมถั่วลิสงข้าวโพดหรือตามลำดับ)
ได้รับการถ่วงน้ำหนักในขวดที่มีErlenmeyer 5
กรัมโซเดียมคลอไรด์และ125 มิลลิลิตรของเมทานอล / น้ำ (70:30, v / v) สำหรับถั่วลิสงหรือ 100
มิลลิลิตรเมทานอล/ น้ำ (80:20, v / v) สำหรับข้าวโพดที่ถูกเพิ่ม ขวดถูกวางไว้ในเครื่องปั่นโคจร (Tecnal, Piracicaba, บราซิล) เป็นเวลา 30 นาที, กรองและไปยัง aliquot (20 หรือ 10 มิลลิลิตรสำหรับถั่วลิสงหรือข้าวโพดตามลำดับ) 20 มลหรือ 40 มิลลิลิตรของน้ำบริสุทธิ์ที่ถูกเพิ่ม และส่วนผสมหดหาย หาร (10 มิลลิลิตร) ก็ผ่านไปแล้วผ่านคอลัมน์immunoaffinity (Vicam ทาวน์, MA, USA) ในอัตราการไหลของ 1e2 หยดต่อวินาที หลังจากล้างด้วย 20 มลของน้ำบริสุทธิ์, aflatoxins ถูกชะจากคอลัมน์ที่มี 1 มิลลิลิตรของเมทานอลและeluate ถูกเก็บรวบรวมไว้ในสีเหลืองอำพันขวด eluate ถูกระเหยแห้งภายใต้การไหลของไนโตรเจน Derivatisation ของ AFB1 และ AFG1 ได้โดยการเพิ่ม 200 มิลลิลิตร n-เฮกเซนและ200 มิลลิลิตรของกรด TRIFLUOROACETIC (TFA) ส่วนผสมที่ถูกเก็บไว้ที่40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีในการระเหยใกล้แห้งกร้านและเจือจางใน 1 มิลลิลิตรของเมทานอล: น้ำ (50:50 v / v) สารสกัดจากรอบชิงชนะเลิศได้รับการกรองผ่าน0.45 มม PTFEmembrane ก่อนที่จะฉีดลงในคอลัมน์ HPLC. ตัวอย่าง Bean สกัดว่าโดยวิธีการเดียวกันอธิบายตัวอย่างข้าวโพดยกเว้นว่า20 มลถูกชะผ่านคอลัมน์immunoaffinity ได้. AFM1 ถูกกำหนดในนมตามข้อเสนอของ ผู้ผลิตของคอลัมน์immunoaffinity (Aflatest, Vicam ทาวน์, MA, USA) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สี่สิบมิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่างได้รับความร้อนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีเพิ่ม 1 กรัมของโซเดียมคลอไรด์และหมุนเหวี่ยงที่3500 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที ชั้นไขมันบนจะถูกลบออกและตัวอย่างที่ถูกปั่นอีกครั้งเพื่อเอาไขมันที่เหลือ ตัวอย่างถูกกรองผ่านภายใต้สุญญากาศไม่มีเบอร์ 4 กรองกระดาษและ30 มิลลิลิตรนำไปใช้กับคอลัมน์ immunoaffinity ซึ่งได้รับการเชื่อมต่อกับเข็มฉีดยาแก้วและระบบสูญญากาศ(การไหลของ 2e 3 มิลลิลิตร min1) คอลัมน์ถูกล้างด้วย 20 มลบริสุทธิ์ของน้ำและAFM1 ถูกชะ 1 มิลลิลิตรของเมทานอล eluate ได้ระเหยไปใกล้แห้งภายใต้การไหลของไนโตรเจนและแห้งสารสกัด resuspended ใน 1 มิลลิลิตรของเมทานอล / น้ำ (50:50 v / v). การกำหนด AFM1 ในโยเกิร์ตและชีสที่ได้ดำเนินการโดยวิธีการที่เสนอโดยIha , แป Favaro, et al (2011) และ Iha, แปดะ, et al (2011) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย แปดกรัมของชีสโยเกิร์ตหรือบดถูกเพิ่ม 2 กรัมโซเดียมคลอไรด์ 22 มิลลิลิตรของเมทานอลและ 13 หรือ 12 มิลลิลิตรน้ำชีสหรือโยเกิร์ตตามลำดับ ส่วนผสมที่ถูกปั่นในเครื่องผสมสำหรับ 1 นาที, หมุนเหวี่ยงที่ 3500 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที supernatants ของชีสตัวอย่างที่ถูกกรองผ่านเบอร์ไม่มี 4 กระดาษกรอง ยี่สิบมิลลิลิตรของสารสกัดจากที่ก่อนหน้านี้ถูกเจือจางด้วย 40 มิลลิลิตรน้ำบริสุทธิ์และผ่านคอลัมน์immunoaffinity การสกัดต่อไปตามขั้นตอนที่เป็นคนเดียวกับที่อธิบายตัวอย่างนม. 2