Cell walls were degraded using 0.05

Cell walls were degraded using 0.05 g·ml−1 lysozyme (Merck, Darmstadt, Germany) and 250 units·ml−1 mutanolysin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) in 100 mM K2HPO4− buffer (pH 6.2) under agitation at 10 rpm for 3 h at 44°C (RPN2511E hybridization oven/shaker; Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, United Kingdom). The cells were collected by centrifugation at 4,000 × g for 10 min at 23°C, and the cell membranes were harvested by dissolving the pellets thoroughly in 3 ml diethyl ether-heptane (1:1) acidified with 2.5 M sulfuric acid. Following centrifugation at 500 × g for 5 min at 23°C, the upper organic phase was collected for total fatty acid methyl ester (FAME) analysis. FAMEs were generated and analyzed according to the method of Badings and Dejong (3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผนังเซลล์ที่เสื่อมโทรมใช้ 0.05 g·ml−1 lysozyme (Merck ดาร์มสตัดท์ เยอรมนี) และ 250 units·ml−1 mutanolysin (Sigma Aldrich เซนต์หลุยส์ MO) 100 mM K2HPO4− บัฟเฟอร์ (pH 6.2) ภายใต้ความปั่นป่วนที่ 10 rpm สำหรับ 3 h 44° c (RPN2511E hybridization เตาอบ/ปั่น Amersham ฟาร์ไบโอเทค ชาร์ฟอร์นเซนน้อย สหราชอาณาจักร) เซลล์ถูกจัดเก็บ โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4,000 × g 10 นาทีที่ 23° C และเยื่อหุ้มเซลล์ถูกเก็บเกี่ยว โดยละลายเม็ดละเอียดใน 3 ml อีเทอร์ diethyl-heptane (1:1) กรด ด้วยกรดกำมะถัน 2.5 M หมุนเหวี่ยงต่อไปที่ 500 × g 5 นาทีที่อุณหภูมิ 23° C เฟสอินทรีย์บนถูกรวบรวมสำหรับการวิเคราะห์รวมกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ (ชื่อเสียง) FAMEs ถูกสร้างขึ้น และวิเคราะห์ตามวิธีการของ Badings และ Dejong (3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผนังเซลล์ถูกย่อยสลายโดยใช้ 0.05 กรัม· ML-1 ไลโซไซม์ (เมอร์ค, ดาร์มสตัด, เยอรมนี) และ 250 หน่วย· ML-1 mutanolysin (Sigma-Aldrich, St. Louis, มิสซูรี) ใน 100 มิลลิเมตร K2HPO4- บัฟเฟอร์ (pH 6.2) ภายใต้การกวน ที่ 10 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 ชั่วโมงที่ 44 ° C (เตาอบผสมพันธุ์ RPN2511E / ปั่น; Amersham Pharmacia ไบโอเทคเล็ก ๆ น้อย ๆ Chalfont, สหราชอาณาจักร) เซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4,000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่ 23 ° C และเยื่อหุ้มเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการละลายเม็ดอย่างทั่วถึงใน 3 มลอีเทอร์-heptane (1: 1) กรดด้วยกรดซัลฟูริก 2.5 ล้าน ต่อไปนี้การหมุนเหวี่ยงที่ 500 กรัม×เวลา 5 นาทีที่ 23 ° C, เฟสอินทรีย์บนถูกเก็บไว้สำหรับการรวมกรดไขมันเมทิลเอสเตอร์ (FAME) การวิเคราะห์ FAMEs ถูกสร้างและวิเคราะห์ตามวิธีการของ Badings และ DEJONG นี้ (3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผนังเซลล์ถูกสลายใช้ 0.05 กรัมต่อด้วย− 1 ไลโซไซม์ ( เมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) และ 250 มิลลิลิตร− 1 หน่วยด้วย mutanolysin ( ซิกม่า Aldrich St . Louis , MO ) 100 มิลลิเมตร k2hpo4 −บัฟเฟอร์ pH 6.2 ) ภายใต้ความปั่นป่วนที่ 10 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 ชั่วโมง 44 องศา C ( rpn2511e hybridization เตาอบ / เขย่า ; ที่มุ่งมั่น ไบโอเทคน้อย , ริดสีดวงทวาร , สหราชอาณาจักร ) เซลล์มีจำนวน 3 4000 × G สำหรับ 10 นาทีที่ 23 ° C และเยื่อหุ้มเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวโดยละลายเม็ดละเอียดใน 3 ml อีเทอร์เฮปเทน ( 1 : 1 ) ปรับ 2.5 เมตร กรดกำมะถัน ต่อไปนี้การปั่นเหวี่ยงที่ 500 × G สำหรับ 5 นาทีที่ 23 ° C ระยะอินทรีย์บน รวบรวมข้อมูลทั้งหมดกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ ( ชื่อเสียง ) การวิเคราะห์ ดีถูกสร้างขึ้น และวิเคราะห์ข้อมูลตามวิธีการของ badings และ เดอ ยอง ( 3 )