The protocols of DNA extraction, pu

The protocols of DNA extraction, purification and ethanol
precipitation were done as described in Zolan and Pukkila (1986).
Briefly, single-spore cultures were placed on potato carrot agar
(PCA) medium at 30°C for 7 days. The mycelium and conidia were
transferred into a mortar and pestle and ground with liquid nitrogen
at room temperature, and transferred into a 1.5 ml Eppendorf tube
containing 600 μL extraction buffer [1% hexadecyltrimethylammonium
bromide, 0.7 M NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 10 mM
EDTA, 1% 2- mercaptoethanol], vortexed and incubated at 60°C for
30 min.
An equal volume of chloroform-isoamylalcohol (24:1, v/v) was
added, tubes were then centrifuged 5 min at maximum speed. The
aqueous phases were recovered into a fresh tubes containing
isopropanol and another centrifugation was done for 1 min. The
final DNA pellets were obtained by dissolving in 300 μL of TE buffer
[10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โพรโทคอลที่สกัดดีเอ็นเอ ฟอก และเอทานอลฝนก็ทำตามที่อธิบายไว้ใน Zolan และ Pukkila (1986)สั้น ๆ วัฒนธรรมเดียวสปอร์ถูกวางบนมันฝรั่งแครอท agarปานกลาง (PCA) ที่ 30° C 7 วัน Mycelium และ conidiaโอนย้ายเป็นปูน และ pestle และพื้นดินที่ มีไนโตรเจนเหลวที่อุณหภูมิห้อง และถูกโอนย้ายไป 1.5 ml หลอด Eppendorfประกอบด้วยบัฟเฟอร์การสกัด μL 600 [hexadecyltrimethylammonium 1%โบรไมด์ 0.7 M NaCl ทริสเรทติ้ง HCl 50 มม. (pH 8.0), 10 มม.EDTA, 1% 2 mercaptoethanol], vortexed และ incubated ที่ 60 ° C สำหรับ30 นาทีมีปริมาตรการเท่ากันของคลอโรฟอร์ม-isoamylalcohol (24:1, v/v)เพิ่ม หลอดได้แล้ว centrifuged 5 นาทีที่ความเร็วสูงสุด ที่ระยะอควีถูกกู้คืนในหลอดสดที่ประกอบด้วยisopropanol และ centrifugation อื่นเสร็จใน 1 นาทีสุดท้ายขี้ดีเอ็นเอได้รับมา โดยยุบใน μL 300 บัฟเฟอร์ TE[10 มม.ตรี- (pH 8.0), HCl 1 mM EDTA]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรโตคอลการสกัดดีเอ็นเอบริสุทธิ์และเอทานอลตกตะกอนได้ทำตามที่อธิบายไว้ใน ZOLAN และ Pukkila (1986). สั้น ๆ , วัฒนธรรมเดียวสปอร์ถูกวางไว้บนแครอทมันฝรั่งวุ้น(PCA) กลางที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 วัน เส้นใยและสปอร์ที่ถูกโอนเข้ามาในครกและสากและพื้นดินที่มีไนโตรเจนเหลวที่อุณหภูมิห้องและโอนเป็น1.5 มล. หลอด Eppendorf ที่มี 600 ไมโครลิตรบัฟเฟอร์สกัด [1% hexadecyltrimethylammonium โบรไมด์, 0.7 M NaCl 50 มิลลิ Tris-HCl (pH 8.0), 10 มิลลิEDTA, 1% 2 mercaptoethanol] การ vortex และบ่มที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา30 นาที. ปริมาณที่เท่ากันของคลอโรฟอร์ม isoamylalcohol (24: 1, v / v) ได้รับการเพิ่มท่อถูกปั่นจากนั้น5 นาที ที่ความเร็วสูงสุด ขั้นตอนน้ำหายเข้าไปในท่อที่มีความสดใหม่isopropanol และหมุนเหวี่ยงอีกก็ทำเวลา 1 นาที เม็ดดีเอ็นเอสุดท้ายที่ได้รับโดยการละลายใน 300 ไมโครลิตรของ buffer TE [10 มิลลิ Tris-HCl (pH 8.0) 1 มิลลิ EDTA]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ระบบการสกัดดีเอ็นเอบริสุทธิ์ และการตกตะกอนของเอทานอล
เสร็จตามที่อธิบายไว้ใน zolan และ pukkila ( 2529 ) .
สั้นวัฒนธรรมสปอร์เดียวถูกวางไว้บนมันฝรั่ง แครอท วุ้น
( PCA ) กลาง 30 ° C เป็นเวลา 7 วัน การเพาะเลี้ยงชนิดและถูก
ถ่ายโอนลงในครกและสาก และดินที่มีไนโตรเจนเหลว
อุณหภูมิห้องและถ่ายโอนลงในหลอด 1.5 ml
เพนดอร์ฟบรรจุ 600 μผมใช้สาร [ 1
% hexadecyltrimethylammonium โบรไมด์ , 0.7 M NaCl HCl จาก 50 มม. ( pH 8.0 ) , 10 mm
EDTA 1 % 2 - mercaptoethanol ] , vortexed และอุณหภูมิ 60 องศา C 30 นาที

ปริมาณเท่ากันของคลอโรฟอร์ม isoamylalcohol ( 24 : 1 v / v ) คือ
เพิ่มหลอดเป็นระดับ 5 นาที ที่ความเร็วสูงสุด ระยะที่พบในน้ำ

หลอดผสมสดและอีกอย่างคือ ไอโซโพรพานอลปั่นได้ 1 นาที
เม็ด DNA สุดท้ายที่ได้รับจากการละลายใน 300 μ l TE บัฟเฟอร์
[ 10 มม. นอกจากนี้ HCl ( pH 8.0 )
1 mM EDTA ]