A nested PCR (Platinumw Taq DNA Pol

A nested PCR (Platinumw Taq DNA Polymerase High Fidelity, Invitrogen) was subsequently run with the primers 2584L34 (5′-TGG ATA TCT TTT GGG CCA TCC ATT CCT GGC TTT A-3′) and 2173U34 (5′-AGC TGT ACA TTT GGG GAA GAG ACA ACA ACT CCC T-3′). The nucleotides corresponding to the restriction sites used for cloning are underlined in the above sequences. PCR-amplified fragments of HIV-1 protease from infected subjects were digested with the restriction enzymes BsrGI and EcoRV, and the resulting 421 bp fragment was then ligated into a BsrGI/EcoRV pre-digested pcDNA3_GFPDPR vector. After transformation of competent Escherichia
coli cells, population protease-recombinant plasmids were obtained and their protease genotypes verified by DNA sequencing.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PCR ซ้อนกัน (ความเที่ยงตรงสูงดีเอ็นเอพอลิเมอเรส Taq Platinumw, Invitrogen) ต่อมารัน ด้วยไพรเมอร์ 2584L 34 (5 ′-TGG ATA TCT TTT GGG CCA TCC ATT CCT GGC TTT A-3′) และ 2173U34 (5 ′-AGC TGT ACA TTT GGG ไหว้ปิดปาก ACA ACA ACT CCC T-3′) นิวคลีโอไทด์ที่สอดคล้องกับเว็บไซต์จำกัดใช้สำหรับการโคลนจะขีดเส้นใต้ในลำดับข้างต้น PCR ขยายชิ้นส่วนของเชื้อเอชไอวี-1 โปรติเอสจากวัตถุที่ติดไวรัสถูกย่อย ด้วยเอนไซม์จำกัด BsrGI และ EcoRV และจากนั้นแก้ไขกเดี่ยวส่วน bp 421 ผลลัพธ์เป็นเวกเตอร์ย่อยล่วงหน้า pcDNA3_GFPDPR BsrGI/EcoRV หลังจากการเปลี่ยนแปลงของอำนาจ Escherichiaโคไลเซลล์ ประชากร recombinant โปรติเอส plasmids ได้รับ และศึกษาจีโนไทป์โปรติเอสของพวกเขาตรวจสอบตามลำดับดีเอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ซ้อนกัน PCR (Platinumw Taq DNA Polymerase ไฮไฟ, Invitrogen) ต่อมาทำงานกับไพรเมอร์ 2584L34 (5'-TGG ATA TCT TTT GGG CCA TCC ATT CCT GGC TTT A-3) และ 2173U34 (5'-AGC TGT ACA TTT GGG GAA GAG ACA ACA ACT CCC T-3) นิวคลีโอที่สอดคล้องกับข้อ จำกัด เว็บไซต์ที่ใช้สำหรับการโคลนขีดเส้นใต้ในลำดับข้างต้น เศษ PCR-ขยายของเชื้อ HIV-1 protease จากอาสาสมัครที่ติดเชื้อถูกย่อยด้วยเอนไซม์ข้อ จำกัด BsrGI และ EcoRV และส่งผลให้ชิ้นส่วน 421 bp ถูกผูกแล้วเป็น BsrGI / EcoRV pre-ย่อย pcDNA3_GFPDPR เวกเตอร์ หลังจากการเปลี่ยนแปลงของอำนาจ Escherichia
เซลล์ coli ประชากรพลาสมิดน้ำย่อย-recombinant ที่ได้รับและยีนน้ำย่อยของพวกเขาตรวจสอบโดยลำดับดีเอ็นเอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เป็นวิธีที่ซ้อนกัน ( platinumw แทคดีเอ็นเอพอลิเมอเรสสูงความจงรักภักดี Invitrogen ) ต่อมาได้ใช้ไพรเมอร์ 2584l34 ( 5 ’ - tgg TTT ATA TCT GGG CCA TCC ATT CCT ggc TTT A-3 School ) และ 2173u34 ( 5 ’ - AGC TGT ACA TTT GGG GAA มุข ACA WAY ทำ CCC t-3 School ) ที่สำคัญที่สอดคล้องกับข้อ จำกัด เว็บไซต์ที่ใช้สำหรับการขีดเส้นใต้ในลำดับข้างต้น ชิ้นส่วนของดีเอ็นเอของเชื้อจากผู้ติดเชื้อสามารถถูกย่อยด้วยเอนไซม์ และ ecorv bsrgi และผล 421 BP fragment ก็ผูกเป็น bsrgi / ecorv ก่อนย่อยเวกเตอร์ pcdna3_gfpdpr . หลังจากการเปลี่ยนแปลงของพนักงานเจ้าหน้าที่ Escherichiaเซลล์โปรตีนรีคอมบิแนนท์พลาสมิดประชากรได้ และเมื่อตรวจสอบลำดับโปรตีนดีเอ็นเอ