The HPLCsystem consisted of a Dione

The HPLC
system consisted of a Dionex (Germering, Germany) P 580
gradient pump, a Dionex Ultimate WPS-3000TSL analytical
autosampler with in-line split-loop injection and thermostat
and a Dionex RF 2000 fluorescence detector set at 445 nm
emission and 330 nm excitation wavelength with medium
sensitivity.
An autosampler designed for automated pre-column
derivatisation was used because of the need of a high
injection precision and an effective external needle wash
for eliminating carryover. Another autosampler tested
(Dionex ASI 100) yielded poor reproducibility. Vials
with OPA reagent and samples as well as vials for
preparation were stored in the autosampler at 15°C. For
derivatisation, 50 μl OPA reagent and 30 μl sample were
mixed in a preparation vial, and after 120 s reaction time,
15 μl of the indole derivates were injected.
The mobile phase consisted of two eluents. Eluent A was
a 97.8/0.7/1.5 (v/v/v) mixture of a water phase, methanol
and tetrahydrofuran (THF). The water phase contained
52 mmol sodium citrate and 4 mmol sodium acetate,
adjusted to pH 5.3 with HCl. Then, methanol and THF
were added. Eluent B consisted of 50% water and 50%
methanol (v/v). For degassing and sterilisation, both eluents
were filtered over 0.2-μm-pore size hydrophilic propylene
membrane filters. The mobile phase was delivered at a flow
rate of 1.5 ml min−1. The amino sugar separation was
performed isocratically, but a gradient was used for
cleaning the column after every run. Every run was starting
at an eluent A/B v/v composition of 93/7 for 19 min. A
linear gradient was run to reach 80% B after 3 min and
remaining isocratic for 3 min. A reverse gradient to 93/7
within 3 min was followed by 2 min isocratic run after
which the column is preconditioned for the next sample. It
is important to start the OPA derivatisation only at the
beginning of every run and not during column preconditioning
of the previous run. Otherwise, the equilibration

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

HPLC
ระบบประกอบด้วย Dionex (Germering เยอรมนี) 580 P
ปั๊มไล่โทนสี การ Dionex สุด WPS-3000TSL วิเคราะห์
autosampler ฉีดแยกวงในบรรทัดและอุณหภูมิ
และเครื่องตรวจจับ fluorescence Dionex RF 2000 ที่ตั้ง 445 nm
มลพิษและความยาวคลื่นในการกระตุ้น nm 330 กับกลาง
ไว
autosampler ออกแบบมาสำหรับคอลัมน์อัตโนมัติก่อน
derivatisation ถูกใช้เนื่องจากจำเป็นต้องมาก
ความแม่นยำในการฉีดและการล้างภายนอกเข็มมีประสิทธิภาพ
สำหรับกำจัด carryover Autosampler อื่นทดสอบ
(Dionex อาซี 100) หา reproducibility จน Vials
กับรีเอเจนต์ OPA และตัวอย่าง เช่นเป็น vials สำหรับ
เตรียมถูกเก็บไว้ใน autosampler ที่ 15 องศาเซลเซียส สำหรับ
derivatisation การ 50 รีเอเจนต์ OPA μl และตัวอย่าง 30 μl
ผสม ในคอนแทคเตรียม และ 120 ปฏิกิริยา เวลา,
μl 15 ของ derivates อินโดลถูกฉีด
เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย eluents 2 เป็น Eluent A
97.8/0.7/1.5 (v/v/v) ส่วนผสมของน้ำเฟส เมทานอล
tetrahydrofuran (THF) และ เฟสน้ำอยู่
mmol โซเดียมซิเตรตและ 4 mmol โซเดียม acetate, 52
ปรับ pH 5.3 กับ HCl นั้น เมทานอล และ THF
เพิ่ม Eluent B ประกอบด้วย 50% และ 50%
เมทานอล (v/v) การ degassing sterilisation, eluents ทั้ง
ถูกกรองผ่านโพรพิลีน hydrophilic ขนาด 0.2-μm-รูขุมขน
แผ่นกรองเมมเบรน เฟสเคลื่อนที่ส่งขั้นตอนการ
อัตรา min−1 1.5 ml แยกน้ำตาลอะมิโนถูก
ทำ isocratically แต่ใช้การไล่ระดับสีสำหรับ
ซักคอลัมน์หลังจากทำทุก เริ่มต้นรันทุก
ที่ eluent A / ส่วน v/v B 93/7 สำหรับ 19 min A
ไล่ระดับเส้นรันถึง 80% B หลังจาก 3 นาที และ
isocratic คิดใน 3 นาทีคงเหลือ ไล่ย้อนไป 93/7
ภายใน 3 นาทีถูกตาม isocratic คิด 2 นาทีหลังจากรัน
ซึ่งคอลัมน์เป็น preconditioned ในตัวอย่างถัดไป มัน
เริ่ม derivatisation OPA ที่สำคัญคือการ
เริ่มรันทุก และไม่ ในคอลัมน์ preconditioning
ของดำเนินการก่อนหน้านี้ มิฉะนั้น equilibration ที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

HPLC
ระบบประกอบด้วย Dionex (Germering, เยอรมนี) P 580
ปั๊มลาดวิเคราะห์ Dionex ที่สุด WPS-3000TSL
autosampler ด้วยการฉีดแยกวงในบรรทัดและเทอร์โม
และ Dionex RF เครื่องตรวจจับแสง 2000 ตั้งอยู่ที่ 445 นาโนเมตร
ปล่อยและ 330 นาโนเมตร ความยาวคลื่นกระตุ้นกับสื่อ
ไว
อัตโนมัติสามารถออกแบบมาสำหรับก่อนคอลัมน์อัตโนมัติ
derivatisation ถูกนำมาใช้เพราะความต้องการของสูง
ความแม่นยำและการฉีดล้างเข็มที่มีประสิทธิภาพภายนอก
สำหรับการขจัดเปื้อน อัตโนมัติสามารถทดสอบอีก
(Dionex ASI 100) ผลการทำซ้ำที่ไม่ดี ขวด
ที่มีสาร OPA และตัวอย่างเช่นเดียวกับขวดสำหรับ
การเตรียมความพร้อมได้รับการจัดเก็บไว้ใน autosampler ที่ 15 ° C สำหรับ
derivatisation 50 ไมโครลิตรสาร OPA และ 30 ตัวอย่างไมโครลิตรถูก
ผสมในขวดเตรียมความพร้อมและหลังจาก 120 เวลาปฏิกิริยา
15 ไมโครลิตรของสารอนุพันธ์อินโดลฉีด
เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยสองตัวชะ ตัวชะเป็น
97.8 / 0.7 / 1.5 (v / v / v) ส่วนผสมของขั้นตอนการน้ำเมทานอล
และ tetrahydrofuran (THF) ขั้นตอนน้ำที่อยู่
52 มิลลิโมลซิเตรทโซเดียมและ 4 มิลลิโมลโซเดียมอะซิเตท,
ปรับค่า pH 5.3 ที่มี HCl จากนั้นเมทานอลและ THF
ถูกเพิ่ม ตัวชะ B ประกอบด้วยน้ำ 50% และ 50%
เมทานอล (v / v) สำหรับ degassing และการฆ่าเชื้อตัวชะที่ทั้งสอง
ได้รับการกรองผ่าน 0.2 ไมโครเมตรรูขุมขนขนาดโพรพิลีนกับน้ำ
กรองเมมเบรน เฟสเคลื่อนที่ถูกส่งกระแสที่
อัตรา 1.5 มลนาที 1 แยกน้ำตาลอะมิโนที่ได้รับการ
ดำเนินการ isocratically แต่การไล่ระดับสีที่ใช้สำหรับ
ทำความสะอาดคอลัมน์ทุกครั้งหลังจากการทำงาน วิ่งทุกคนก็เริ่ม
ที่ตัวชะ A / B องค์ประกอบ v / v ของ 93/7 สำหรับ 19 นาที
ลาดเชิงเส้นก็วิ่งไปถึง 80% B หลังจาก 3 นาทีและ
ที่เหลือ Isocratic เป็นเวลา 3 นาที ไล่กลับไปที่ 93/7
ภายใน 3 นาทีตามด้วย 2 นาทีระยะ Isocratic หลังจาก
ที่คอลัมน์ถูก preconditioned สำหรับตัวอย่างต่อไป มัน
เป็นสิ่งสำคัญที่จะเริ่มต้น derivatisation OPA เพียง
จุดเริ่มต้นของทุกการทำงานและไม่ได้ในช่วง preconditioning คอลัมน์
ของการทำงานก่อนหน้านี้ มิฉะนั้นสมดุล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ระบบ HPLC
ประกอบด้วย DIONEX ( Germering เยอรมนี ) P 580
ลาดปั๊ม , DIONEX สุดยอด wps-3000tsl วิเคราะห์
autosampler กับแยกวง และอุณหภูมิในการฉีด
และ DIONEX RF เครื่องตรวจจับไว้ที่ 2000 เรืองแสง 445 nm
การปล่อยและ 330 ความยาวคลื่นกระตุ้น nm มีความไวปานกลาง
.
เป็น autosampler ออกแบบอัตโนมัติจ้า
คอลัมน์derivatisation ถูกใช้ เพราะต้องฉีดที่แม่นยำและมีประสิทธิภาพสูง

คงไปล้างเข็มภายนอกเพื่อกำจัด . autosampler อื่นทดสอบ
( DIONEX อาซี 100 ) เป็นตัวยาไม่ดี ขวด
ด้วยรีเอเจนต์โอภาและตัวอย่างเป็นขวดสำหรับ
เตรียมถูกเก็บไว้ใน autosampler 15 ° C สำหรับ
derivatisation 50 μ L โอภารีเอเจนต์และ 30 μ l จำนวน
ผสมในการเตรียมยา และหลังจาก 120 เวลาปฏิกิริยา
15 μ L ของอินโดล derivates ฉีด .
เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยสองตัวชะ . นี้คือการ 97.8 / 1.4 / 1.5 ( V / V / V ) ส่วนผสมของระยะน้ำ เมทานอล และเตตระไฮโดรฟแรน
( เตตระไฮโดรฟูแรน ) น้ำระยะที่มีอยู่
52 mmol โซเดียมซิเตรตโซเดียมอะซีเตท mmol
4 , ค่า pH 5.3 กับ HCL . งั้น เมทานอลและเตตระไฮโดรฟูแรน
ถูกเพิ่มตัว B ประกอบด้วยน้ำ 50% และ 50%
เมทานอล ( v / v ) สำหรับและขจัด sterilisation ทั้งสองตัวชะ
ถูกกรองผ่าน 0.2 - μ m-pore ขนาดน้ำโพรพิลีน
เมมเบรนไส้กรอง ระยะเคลื่อนที่ส่งที่ไหล
อัตรา 1.5 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 การแยกน้ำตาลอะมิโน คือ isocratically
ดำเนินการ แต่การใช้
ทำความสะอาดคอลัมน์ทุกครั้งหลังใช้ ทุกคนเริ่ม
วิ่งที่ตัว A / B / v องค์ประกอบของ 93 / 7 19 นาที เป็น
ลาดเชิงวิ่งถึง 80% หลังจาก 3 นาที เหลือ 3 นาที
Isocratic ย้อนกลับระดับ 93 /
7 ภายใน 3 นาที ตามด้วย 2 นาที Isocratic วิ่งตาม
ซึ่งเสา preconditioned สำหรับ ตัวอย่างต่อไป มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะเริ่มต้นโอปา

derivatisation เท่านั้นที่จุดเริ่มต้นของทุกวิ่งและไม่ในคอลัมน์ preconditioning
ของรันก่อน มิฉะนั้น equilibration