2.9. Ferric reducing antioxidant po

2.9. Ferric reducing antioxidant power (FRAP)
The FRAP reagentwas prepared minutes prior to initiation of the
assay by mixing 10 mM TPTZ (1 mL, dissolved in 40 mM HCl),
20 mM FeCl3 (1 mL) and 300 mM acetate buffer, pH 3.6 (10 mL)
(Benzie & Strain, 1996). The sample (200 mL) was mixed with FRAP
reagent (1.5 mL). The reactionwas incubated at 37 C for 5 min and
measured at 593 nm. The results are expressed as mg of trolox
equivalents per gram of extract (dw).
2.10. High-performance liquid chromatography coupled with
electrospray ionization and mass detection (HPLC-ESI-TOF)
The seed and peel extracts were dissolved in methanol-water
(3:1) at a concentration of 5 mg/mL; the polyphenol standards
(epicatechin, catechin, caffeic acid, ferulic acid, quercetin, gallic
acid, and rutin) were prepared in the same manner as the extracts.
HPLC analyses were performed with the Ultimate 3000 Basic
Automated (ThermoScientific-Dionex, CA, USA), and a Poroshell
120 EC-C18 column (2.7 mm, 4.6  50 mm; Agilent Technologies,
Santa Clara, CA, USA). Mobile phasewas carried out using a gradient
of methanol and acetonitrile with a flow of 0.5 mL/min at 25 C. The
liquid chromatography was coupled to an electrospray mass spectrometer
ESI-MS MicroTOF (Bruker Daltonik, Bremen, Germany),
utilizing an electrospray interface operated in negative mode with a
voltage of 4.5 kV. The drying gas temperature was 190 C, the
drying gas flow was 8 L/min, and the nebulizer gas pressure was
3 bar. The data obtained from the molecular ions were processed by
means of Compass Data Analysis 4.1 (Bruker Daltonik) software and
the SmartFormula Editor tool.
2.11. Antimicrobial activity
Bacterial strains: Listeria innocua (ATCC 33090), Escherichia coli
(JMP101), Lactobacillus sakei, Weissella viridescens, and Leuconostoc
mesenteroides were isolated from meat products and identified by
rDNA16S in our laboratory. The antimicrobial activity of extracts
alone or in combination with nisin was determined by the brothbased
turbidimetric method (Othman et al., 2011) with some
modifications. Forty microliters of inoculum (103 colony-forming
units per mL) was mixed with one hundred and sixty microliters
of extracts, nisin, or as a combination and then they were incubated
at 35 C. The optical densitywas monitored at 600 nmevery 30 min
with a 10 s agitation prior to each measurement for 24 h in a
Synergy HT microplate reader. Lag time and maximum growth rate
were calculated using Gen5™software. Lag time was considered in
the mixture design because it is the time during which a bacterium
does not grow. The antimicrobial activity of nisin and its combination
with the extracts was measured only with L. innocua.
2.12. Simplex lattice mixture design for optimization of
antimicrobial and antioxidant response
A simplex lattice augment mixture design was utilized to
determine the effect of interactions among nisin, seed extract, and
peel extract on antimicrobial and antioxidant properties. Component
proportions were expressed as a fraction of the mixture with a
sum of one. Response variables comprised antioxidant (ORAC
method) and antimicrobial (turbidimetric assay, measured as lag
time) activities. Mixture design experiments were designed and
analyzed using Statgraphics Centurion XV, version 15.2.6 (StatPoint
Technologies, USA). A total of 10 combinations are presented in
Table 1. The following polynomial equation of function Xi was fitted
for each factor assessed at each experimental point, where Y is the
predicted response and b1, b2, b3, b12, b13, and b23 are constant
coefficients for each linear and non-linear interaction terms:
Y ¼ b1X1 þ b2X2 þ b3X3 þ b12X1X2 þ b13X1X3 þ b23X2X3 (1)
The data were analyzed by a general linear model. Optimum
values of the independent variables were elucidated by conducting
a three-dimensional response surface analysis of the independent
and dependent variables.
2.13. Statistical analysis
Radical scavenging activity and the characteristics of byproducts
and extracts were analyzed at least six times and data were
expressed as mean ± standard deviation. One-way ANOVA and the
Tukey's multiple comparisons test were conducted utilizing the
software Prism ver. 5.0 (GraphPad, San Diego, CA, USA). A p-value <
0.05 was considered statistically significant.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.9. เฟอร์ลดอนุมูลอิสระ (FRAP)FRAP reagentwas นาทีก่อนการเริ่มต้นของเตรียมการassay โดยผสม 10 มม. TPTZ (1 mL ละลายใน 40 มม. HCl),20 มม. FeCl3 (1 mL) และ 300 มม. บัฟเฟอร์ acetate, pH 3.6 (10 มล.)(Benzie & ต้องใช้ 1996) ตัวอย่าง (200 มล) ถูกผสมกับ FRAPรีเอเจนต์ (1.5 mL) Reactionwas ที่ incubated ที่ 37 C สำหรับ 5 นาที และวัดที่ 593 nm ผลลัพธ์จะแสดงเป็นมิลลิกรัมของ troloxเทียบเท่าต่อกรัมของสารสกัด (dw)2.10. ประสิทธิภาพสูง chromatography เหลวควบคู่กับวิธีพ่นละอองไฟฟ้าตรวจ ionization และมวล (HPLC ESI TOF)สารสกัดจากเมล็ดและเปลือกถูกละลายในเมทานอลน้ำ(3:1) ที่ความเข้มข้น 5 mg/mL มาตรฐาน polyphenol(epicatechin สารสกัดจาก กรด caffeic กรด ferulic, quercetin, gallicกรด และ rutin) ได้จัดทำในลักษณะเดียวกันเป็นการแยกดำเนิน ด้วยสุด 3000 พื้นฐานวิเคราะห์ HPLCอัตโนมัติ (ThermoScientific Dionex, CA, USA), และ Poroshell เป็นคอลัมน์ EC C18 120 (2.7 มม. 4.6 50 mm Agilent เทคโนโลยีซานตาคลารา CA สหรัฐอเมริกา) มือถือ phasewas ดำเนินการโดยใช้การไล่ระดับสีเมทานอลและ acetonitrile กับไหล 0.5 mL/min ที่ 25 C.chromatography เหลวถูกควบคู่กับการวิธีพ่นละอองไฟฟ้าโดยรวมสเปกโตรมิเตอร์MicroTOF ESI MS (Bruker Daltonik เบรเมน เยอรมนี),ใช้อินเทอร์เฟซวิธีพ่นละอองไฟฟ้าที่ดำเนินการในโหมดการลบกับการแรง 4.5 kV อุณหภูมิก๊าซแห้ง 190 C การกระแสก๊าซแห้งที่ถูก 8 L/min และฝอยละอองก๊าซดันถูก3 แถบ ข้อมูลที่ได้จากกันโมเลกุลถูกประมวลผลโดยหมายถึงซอฟต์แวร์ 4.1 วิเคราะห์ข้อมูลเข็มทิศ (Bruker Daltonik) และเครื่องมือแก้ไข SmartFormula2.11 การกิจกรรมยับยั้งจุลินทรีย์สายพันธุ์แบคทีเรีย: ออลิ innocua (ATCC 33090) Escherichia coli(JMP101), sakei แลคโตบาซิลลัส Weissella viridescens และ Leuconostocmesenteroides ถูกแยกต่างหากจากเนื้อผลิตภัณฑ์ และระบุrDNA16S ในห้องปฏิบัติการของเรา กิจกรรมการต้านจุลชีพของสารสกัดจากคนเดียว หรือร่วมกับ nisin ถูกกำหนด โดย brothbasedวิธี turbidimetric (อุษมาน et al., 2011) กับปรับเปลี่ยน Microliters สี่สิบของ inoculum (103 โคโลนีขึ้นรูปหน่วยต่อมิลลิลิตร) ถูกผสมกับหนึ่งร้อย และหก microlitersสารสกัด จาก nisin หรือ เป็นการรวมกันแล้ว ก็ได้ incubatedที่ค. 35 Densitywas แสงที่ตรวจสอบที่ 600 nmevery 30 นาทีมีอาการกังวลต่อ s 10 ก่อนแต่ละวัดใน 24 ชมในการSynergy เอชที microplate reader ช้าและอัตราการเติบโตสูงสุดมีคำนวณโดยใช้ซอฟต์แวร์ Gen5 ™ ช้าถูกพิจารณาในออกแบบส่วนผสมเนื่องจากเป็นเวลาที่แบคทีเรียไม่เจริญเติบโต กิจกรรมจุลินทรีย์ nisin และมามีบางส่วนถูกวัดกับ L. innocua เท่า2.12. ออกแบบผสมผสานระหว่างโครงตาข่ายประกอบ simplex สำหรับเพิ่มประสิทธิภาพของตอบสนองต่อจุลินทรีย์และสารต้านอนุมูลอิสระมีใช้ส่วนผสมออกแบบ simplex โครงตาข่ายประกอบเพิ่มกำหนดผลของการโต้ตอบระหว่าง nisin สารสกัดจากเมล็ด และเปลือกแยกบนคุณสมบัติต้านจุลชีพและสารต้านอนุมูลอิสระ คอมโพเนนต์สัดส่วนที่แสดงเป็นเศษส่วนของผสมกับการผลรวมของหนึ่ง ตัวแปรตอบสนองที่ประกอบด้วยสารต้านอนุมูลอิสระ (ORACวิธี) และจุลินทรีย์ (turbidimetric assay วัดเป็นความล่าช้ากิจกรรมครั้ง) ทดลองออกแบบส่วนผสมที่ถูกออกแบบ และวิเคราะห์โดยใช้ Statgraphics อา XV รุ่น 15.2.6 (StatPointเทคโนโลยี สหรัฐอเมริกา) จะแสดงจำนวน 10 ชุดตารางที่ 1 สมการพหุนามต่อไปนี้ของฟังก์ชัน Xi ถูกติดตั้งสำหรับแต่ละปัจจัยที่ประเมินในแต่ละจุดทดลอง Y อยู่คำตอบที่คาดการณ์ และ b1, b2, b3, b12, b13 และ b23 จะคงค่าสัมประสิทธิ์สำหรับแต่ละเงื่อนไขเชิงเส้น และไม่เชิงเส้นการโต้ตอบ:Y ¼ b1X1 þ b2X2 þ b3X3 þ b12X1X2 þ b13X1X3 þ b23X2X3 (1)ข้อมูลถูกวิเคราะห์ โดยแบบจำลองเชิงเส้นทั่วไป เหมาะสมค่าของตัวแปรอิสระถูก elucidated โดยดำเนินการการวิเคราะห์พื้นผิวตอบสนองสามมิติของอิสระและขึ้นอยู่กับตัวแปร2.13. สถิติวิเคราะห์กิจกรรม scavenging รุนแรงและลักษณะของสัญญาบางส่วนก็วิเคราะห์น้อย 6 ครั้ง และได้ข้อมูลแสดงค่าส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน±หมายความว่าเป็น การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวและTukey ของทดสอบเปรียบเทียบหลายได้ดำเนินการใช้ประโยชน์จากการซอฟต์แวร์ปริซึมไม่ 5.0 (GraphPad, San Diego, CA, USA) P ค่า <0.05 ถูกพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.9 . สารต้านอนุมูลอิสระลดพลังงานเฟอริค ( VDO )
reagentwas Frap เตรียมนาทีก่อนเริ่มต้นของการทดสอบ โดยการผสม tptz
10 มม. ( 1 มิลลิลิตร ละลายใน 40 มม. , 20 มม. FeCl3 HCl )
( 1 มิลลิลิตร ) และอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 3.6 300 มม. ( 10 ml )
( benzie &สายพันธุ์ , 2539 ) . ตัวอย่าง ( 200 มิลลิลิตร ) ผสมกับ Frap
Reagent ( 1.5 ml ) ที่พบว่า  บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและ
วัดที่ 593 nm .ผลลัพธ์ที่ได้จะแสดงเป็นมิลลิกรัมสารสกัด 1 กรัม เทียบเท่า
( DW ) .
2.10 . โครมาโตกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงควบคู่กับวิธีพ่นละอองไฟฟ้ามีประจุและมวลการตรวจหา (

hplc-esi-tof ) สารสกัดจากเมล็ดและเปลือกถูกละลายในเมทานอลน้ำ
( 3 : 1 ) ที่ระดับความเข้มข้น 5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ; มาตรฐาน
( แคเทชิน Catechin , โพลีฟีนอล , กรด Caffeic กรด ferulic , quercetin , ฝรั่งเศส
กรดและรูติน ) เตรียมในลักษณะเดียวกันเป็นสารสกัด การวิเคราะห์ HPLC ได้ด้วย

สุดยอด 3000 พื้นฐานอัตโนมัติ ( thermoscientific DIONEX , CA , USA ) และ poroshell
120 ec-c18 คอลัมน์ ( 2.7 มม. 4.6  50 มม. ; Agilent Technologies ,
ซานตาคลารา แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) มือถือ phasewas โดยใช้การไล่ระดับสี
ของเมทานอลและไนกับการไหลของ 0.5 มล. / นาทีที่อุณหภูมิ 25 
Cวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวอยู่คู่กับ microtof วิธีพ่นละอองไฟฟ้าแมสสเปกโตรมิเตอร์ (
esi-ms BRUKER daltonik เบรเมน , เยอรมัน ) ,
การใช้วิธีพ่นละอองไฟฟ้าอินเตอร์เฟซที่ดำเนินการในโหมดลบด้วย
แรงดัน 4.5 กิโล . การอบแห้งอุณหภูมิของก๊าซคือ 190  C
แห้ง อัตราการไหลของแก๊สเป็นลิตร / นาทีและ nebulizer ความดันก๊าซเป็น
3 บาร์ ข้อมูลที่ได้จากการประจุโมเลกุลที่ถูกประมวลผลโดย
วิธีการวิเคราะห์ข้อมูลเข็มทิศ 4.1 ( BRUKER daltonik ) smartformula Editor เครื่องมือซอฟต์แวร์และ
.
2.11 . กิจกรรมการยับยั้งแบคทีเรีย Listeria
: innocua ( ATCC 33090 ) , Escherichia coli
( jmp101 ) , Lactobacillus sakei weissella , viridescens และลิวโคน ตอค
ฆ่าเชื้อแล้วผสมที่แยกได้จากเนื้อและผลิตภัณฑ์ที่ระบุโดย
rdna16s ในห้องปฏิบัติการของเรา กิจกรรมต้านจุลชีพของสารสกัด
คนเดียวหรือใช้ร่วมกับปุ่มกำหนดโดย brothbased
turbidimetric วิธี ( Othman et al . , 2011 ) กับบาง
การปรับเปลี่ยน จำนวนตัวเลขของเชื้อ ( 103 โคโลนีสร้าง
หน่วยต่อมิลลิลิตร ) ผสมกับหนึ่งร้อยหกสิบตัวเลข
สารสกัด , nisin , หรือรวมกัน จากนั้นทำการบ่ม
ที่ 35  C แสง densitywas ตรวจสอบที่ 600 nmevery
30 นาทีกับ 10 เขย่าก่อนแต่ละวัด 24 ชั่วโมง ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย HT
( อ่าน เวลาล่าช้าและอัตราการเติบโตสูงสุด
) คำนวณโดยใช้ซอฟต์แวร์™ gen5 . เวลาล่าช้าได้รับการพิจารณาในการออกแบบส่วนผสม
เพราะมันเป็นเวลาช่วงที่แบคทีเรีย
ไม่เติบโต กิจกรรมการต้านจุลชีพของไนซินและ
รวมกันกับสารสกัดจากวัดเท่านั้นที่มีแอล innocua .
2.12 .เริมขัดแตะผสมการออกแบบสำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพของยาต้านจุลชีพและ

การต้านอนุมูลอิสระเป็นเริมขัดแตะเพิ่มการออกแบบส่วนผสมใช้

ศึกษาผลของปฏิสัมพันธ์ระหว่าง nisin , สารสกัดจากเมล็ดและเปลือกในการยับยั้ง
คุณสมบัติและสารต้านอนุมูลอิสระ สัดส่วนองค์ประกอบ
ถูกแสดงเป็นส่วนผสมด้วย
ผลรวมหนึ่ง