Isolation and identification of bac

Isolation and identification of bacteriocin-producing lactic acid bacteria
Two different samples of boza from Belogratchik in the North-West of Bulgaria were screened for lactic acid bacteria that produce bacteriocins. Isolation of bacteriocinogenic lactic acid bacteria was as described by Todorov and Dicks [10]. Serial dilutions of the samples were made and plated onto MRS agar [11] supplemented with 50 mg l−1 Delvocid (Gist-brocades, B.V., Delft, The Netherlands). The colonies were covered with a second layer of MRS agar containing the same concentration Delvocid. The plates were incubated anaerobically (OXOID, Gas Generation Kit, Hampshire, England) at 30 °C for 48 h. Plates with 50 or less colonies were covered with semi-solid BHI (Merck, Darmstadt, Germany), inoculated with Lactobacillus casei LHS. The plates were then incubated for a further 24 h at 37 °C. Colonies producing inhibition zones were isolated, cultured in MRS broth and tested for antimicrobial activity by using the agar spot-test and the diffusion method, described by Schillinger and Lücke [12] and Tagg and McGiven [13]. The antimicrobial effect of lactic acid was eliminated by adjusting the pH of the supernatants to 6.0 with sterile 1N NaOH. Activity was expressed as arbitrary units (AU) ml−1. One AU was defined as the reciprocal of the highest serial two-fold dilution showing a clear zone of growth inhibition of the indicator strain [14].

Strains were identified based on carbohydrate fermentation reactions recorded with API 50 CHL (bio Merieux, France) and phenotypic characteristics described by Schillinger and Lücke [15] and Stiles and Holzapfel [16]. Further identification was by PCR-generated DNA banding patterns obtained with species-specific primers for Lactobacillus plantarum, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus pentosus and Lactobacillus rhamnosus. The methods of Torriani et al. [17] and Ward and Timmins [18] were used. The spectrum of antimicrobial activity was recorded by using the agar-spot method, as described elsewhere. The indicator strains are listed in Table 1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกและรหัสของแบคทีเรียกรดแลกติกที่ผลิต bacteriocinสองแตกต่างกันตัวอย่างของ boza จาก Belogratchik ใน North-West บัลแกเรียได้ฉายสำหรับแบคทีเรียกรดแลกติกที่ผลิต bacteriocins แยกของแบคทีเรียกรดแลคติ bacteriocinogenic ได้อธิบายไว้โดย Todorov Dicks [10] Dilutions ประจำอย่างที่ทำ และชุบบน MRS agar [11] เสริม ด้วย 50 mg Delvocid l−1 (เนื้อ brocades, B.V., Delft ประเทศเนเธอร์แลนด์) อาณานิคมถูกปกคลุม ด้วยชั้นที่สองของ MRS agar ที่ประกอบด้วยความเข้มข้นเดียวกัน Delvocid แผ่นที่ incubated anaerobically (OXOID ชุด อุปกรณ์สร้างแก๊ส แฮมเชียร์ อังกฤษ) ที่ 30 ° C สำหรับแผ่น 48 h. กับ 50 หรือน้อยอาณานิคมถูกปกคลุมไป ด้วยของแข็งกึ่ง BHI (เมอร์ค ดาร์มส เยอรมนี), inoculated มีแลคโตบาซิลลัส casei LHS แผ่นได้แล้ว incubated สำหรับ 24 ชมเพิ่มเติมที่ 37 องศาเซลเซียส อาณานิคมผลิตโซนยับยั้งได้แยกต่างหาก อ่างในซุปนาง กทดสอบกิจกรรมจุลินทรีย์ โดยใช้ agar จุดทดสอบและวิธีการแพร่ อธิบาย โดย Schillinger และ Lücke [12] และ Tagg และ McGiven [13] ผลยับยั้งจุลินทรีย์ของกรดถูกตัดออก โดยการปรับ pH ของ supernatants กับ 6.0 กับกอซ 1N NaOH กิจกรรมที่แสดงเป็นหน่วยกำหนด (อู) ml−1 AU หนึ่งถูกกำหนดเป็นส่วนกลับของที่สูงที่สุดประจำสองพับเจือจางแสดงโซนชัดเจนของการยับยั้งการเจริญเติบโตของพันธุ์บ่งชี้ [14]สายพันธุ์ที่ระบุตามปฏิกิริยาการหมักคาร์โบไฮเดรตที่บันทึกกับ CHL 50 API (bio Merieux ฝรั่งเศส) และลักษณะไทป์โดย Schillinger และ Lücke [15] และ Stiles และ Holzapfel [16] ระบุเพิ่มเติม โดยแถบลวดลายได้ ด้วยไพรเมอร์ species-specific plantarum แลคโตบาซิลลัส แลคโตบาซิลลัส paracasei, pentosus แลคโตบาซิลลัส และแลคโตบาซิลลัส rhamnosus DNA PCR ที่มีสร้างขึ้น มีใช้วิธี Torriani et al. [17] และ Ward Timmins [18] สเปกตรัมของกิจกรรมจุลินทรีย์ถูกบันทึกโดยวิธี agar จุด ตามที่อธิบายไว้ที่อื่น สายพันธุ์ตัวบ่งชี้มีการระบุไว้ในตารางที่ 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกและบัตรประจำตัวของแบคทีเรียผลิตกรดแลคติกแบคทีเรียสองตัวอย่างที่แตกต่างกันของ Boza จาก Belogratchik ในทางตะวันตกเฉียงเหนือของประเทศบัลแกเรียถูกคัดกรองแบคทีเรียกรดแลคติกที่ผลิต bacteriocins
การแยกเชื้อแบคทีเรียกรดแลคติก bacteriocinogenic อธิบายว่าโดย Todorov และจู๋ [10] เจือจางอนุกรมของกลุ่มตัวอย่างที่ทำและชุบลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS [11] เสริมด้วย 50 มก. l-1 Delvocid (สรุปสาระสำคัญ-brocades, BV, เดลฟ์, เนเธอร์แลนด์) อาณานิคมถูกปกคลุมด้วยชั้นที่สองของอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS ที่มีความเข้มข้นเดียวกัน Delvocid แผ่นถูกบ่มแบบไม่ใช้อากาศ (OXOID รุ่นก๊าซชุดนิวแฮมป์เชียร์อังกฤษ) ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง แผ่น 50 หรือน้อยกว่าอาณานิคมถูกปกคลุมไปด้วย BHI กึ่งของแข็ง (เมอร์ค, ดาร์มสตัด, เยอรมนี) เชื้อด้วย Lactobacillus casei LHS แผ่นถูกบ่มจากนั้นอีก 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส อาณานิคมโซนยับยั้งการผลิตถูกแยกเลี้ยงในน้ำซุป MRS และทดสอบฤทธิ์ต้านจุลชีพสำหรับโดยใช้วุ้นจุดทดสอบและวิธีการแพร่กระจายอธิบายโดย Schillinger และLücke [12] และ Tagg และ McGiven [13] ผลต้านจุลชีพของกรดแลคติกถูกกำจัดโดยการปรับค่า pH ของ supernatants ที่ 6.0 ด้วย NaOH 1N ผ่านการฆ่าเชื้อ กิจกรรมได้รับการแสดงเป็นหน่วยพล (AU) มล. 1 หนึ่งในออสเตรเลียได้รับการกำหนดให้เป็นซึ่งกันและกันของอนุกรมสูงสุดเจือจางสองเท่าแสดงโซนที่ชัดเจนของการยับยั้งการเจริญเติบโตของสายพันธุ์ตัวบ่งชี้ที่ [14]. สายพันธุ์ที่ถูกระบุขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาการหมักคาร์โบไฮเดรตที่บันทึกด้วย API 50 CHL (ไบโอ Merieux ฝรั่งเศส) และ ลักษณะฟีโนไทป์อธิบายโดย Schillinger และLücke [15] และกั้นและ Holzapfel [16] บัตรประจำตัวต่อไปเป็นรูปแบบดีเอ็นเอโดยวิธี PCR สร้างแถบรับกับไพรเมอร์ชนิดที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ plantarum แลคโตบาซิลลัส, Lactobacillus paracasei, กล้าเชื้อ Lactobacillus pentosus และ Lactobacillus rhamnosus วิธีการของ Torriani et al, [17] และวอร์ดและมินส [18] ถูกนำมาใช้ สเปกตรัมของฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้วิธี agar จุดตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น ตัวบ่งชี้สายพันธุ์ที่มีการระบุไว้ในตารางที่ 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกและจำแนกแบคทีเรียที่ผลิตกรดแลกติกต่อ
ที่แตกต่างกันสองตัวอย่างของ boza จาก belogratchik ในทางตะวันตกเฉียงเหนือของบัลแกเรียจากแบคทีเรียกรดแลคติกที่ผลิตวัตถุดิบ . การคัดแยกแบคทีเรียกรดแลคติก คือ bacteriocinogenic ตามที่อธิบายไว้โดย Todorov และจู๋ [ 10 ]อนุกรมของกลุ่มตัวอย่างและวิธีการทำชุบลงบนนางวุ้น [ 11 ] เติม 50 mg L − 1 เดลวอซิด ( เนื้อหา brocades ลดลง , เดลฟต์ , เนเธอร์แลนด์ ) อาณานิคมที่ถูกปกคลุมด้วยชั้นสองของนางวุ้นที่มีเดลวอซิดความเข้มข้นเดียวกัน จานถูกบ่มพ ( oxoid , รุ่นแก๊สชุด , Hampshire , อังกฤษ ) ที่ 30 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมงแผ่นกับ 50 หรือน้อยกว่าอาณานิคมได้ถูกปกคลุมด้วยกึ่งแข็ง BHI ( เมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี , เชื้อ Lactobacillus casei ) กับ LHS . จาน แล้วบ่มในอีก 24 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศา อาณานิคมการผลิตยับยั้งโซนมีแยกมาเลี้ยงในอาหาร MRS broth และทดสอบกิจกรรมการยับยั้งโดยใช้วุ้นจุดทดสอบ และการแพร่กระจายโดยอธิบายโดยชิลลีเงอร์และ L ü cke [ 12 ] และ tagg และ mcgiven [ 13 ] ผลการต้านจุลชีพของกรดแลคติกที่ถูกคัดออก โดยการปรับพีเอชของ supernatants 6.0 กับหมันกับ NaOH กิจกรรมที่แสดงเป็นหน่วยพล ( AU ) มล. − 1 หนึ่ง หรือ ถูกกำหนดเป็นส่วนกลับของ dilution สูงสุดด้านอนุกรมแสดงชัดเจน โซนของการยับยั้งการเจริญเติบโตของตัวบ่งชี้ความเครียด [ 14 ] .

สายพันธุ์มีการระบุตามการเฟอร์เมนต์คาร์โบไฮเดรตการบันทึกกับ API 50 CHL ( ไบโอ merieux , ฝรั่งเศส ) และคุณสมบัติลักษณะที่อธิบายโดยชิลลีเงอร์และ L ü cke [ 15 ] และสไตล์ และ holzapfel [ 16 ] การสร้าง DNA โดยวิธี PCR ซึ่งเป็นแถบลวดลายได้ด้วยโดยเฉพาะ - ขยายพันธุ์เพื่อ paracasei Lactobacillus plantarum Lactobacillus ,Lactobacillus pentosus และ แลคโตบาซิลัส rhamnosus . วิธีการ torriani et al . [ 17 ] และวอร์ดและทิมมิน [ 18 ] ใช้ สเปกตรัมของฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้วุ้นจุดวิธีตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น ตัวบ่งชี้สายพันธุ์อยู่ในตารางที่ 1