1. IntroductionEarly pregnancy diag

1. Introduction
Early pregnancy diagnosis is an important tool in reproductive management, particularly in the dairy industry. Prediction of the number of fetuses allows the appropriate nutritional management of the ewes in late gestation, which in turn helps to prevent pregnancy toxemia, minimize pre-lambing feeding costs, optimize birth weight, weaning weight and survivability of lambs, and reducing the incidence of dystocia (Gearhart et al., 1988).

Pregnancy-associated glycoproteins belong to a large family of placental antigens of which pregnancy-specific protein B (PSPB) was the first member to be discovered (Butler et al., 1982). These molecules are expressed by both mono and binucleate cells of the trophectoderm (Green et al., 2000) but mainly secreted by binucleate cells (Zoli et al., 1992a). Ruminant PSPB/PAGs (henceforward named ovPAG, caPAG, or boPAG for ovine, caprine, and bovine PAGs) are detectable in maternal blood around the time of definitive attachment of the placenta, when the trophoblastic binucleate cells start to migrate and fuse with the endometrial cells, forming the fetomaternal syncytium (Wooding, 1984 and Wooding et al, 2005). As early as in 1986 a specific RIA was developed for PSPB measurement and pregnancy diagnosis in cows (Sasser et al., 1986). Thereafter, different RIA (Ranilla et al, 1994, Willard et al, 1995 and Zoli et al, 1992b) and ELISA techniques were developed and used for pregnancy diagnosis in ruminant species (Gábor et al, 2007 and Lawson et al, 2014).

By using heterologous radioimmunoassays, ovPAGs can be detected in the blood of pregnant ewes around day 18 or 20 after mating (Barbato et al, 2009, Ranilla et al, 1994 and Willard et al, 1995). Throughout pregnancy, PAG concentrations differ largely between species, breeds, and the period of pregnancy (Ranilla et al, 1994 and Zoli et al, 1992b). Within the same species, they can be influenced by several factors, such as the breed of the female (Mialon et al, 1993 and Ranilla et al, 1994) and the fetal number (Batalha et al., 2001). PAG concentrations also seem to differ according to the RIA system, this difference being probably due to the specificity of the antisera (Barbato et al., 2009) recognizing more or less the different PAG molecules of the family.

The use of milk to determine the levels of hormones or other substances has attracted much attention of farmers because milk sampling avoids the stressful effects of venipuncture, does not require special expertise, and is easier to collect and store than blood (Friedrich, Holtz, 2010, Gajewski et al, 2008, Lawson et al, 2014 and Leblanc, 2013). Tainturier et al. (1996) and Ali (1999) were the first to analyze the concentrations of PAG in milk samples during the postpartum period in cattle. They speculated on the theoretical possibility of detecting PAG in milk also during early pregnancy diagnosis. This statement has been supported in an original study (Gonzalez et al., 2001), showing that PAG concentrations can also be detected in milk from goats during early pregnancy.

To our knowledge, there was no study that has analyzed the PAGs in milk and plasma taken from the same ewes at the same time. Thus, the present work aims to determine PAGs in milk and plasma during early gestation (from day 0 to 49, targeting certain time points) and to investigate whether milk could be a good alternative to plasma for early pregnancy diagnosis in sheep.

2. Materials and methods
2.1. Animals, blood, and milk samples

The present study was carried out in 29 Lacaune dairy ewes (at their first lactation) during the period of May–July. All ewes were housed and managed at a French farm (FARGE station) supervised by the research center of INRA-Tours.

Ewes were synchronized by insertion of an intravaginal sponge impregnated with 20 mg flurogestone acetate (Chronogest®, Intervet International, Angers, France) which was removed 14 days later. At the moment of sponge removal, 400–500 IU of eCG (Folligon®, Intervet International) were administered. Twenty-six ewes were inseminated artificially with fresh semen once at 55 h after sponge removal or mated in June to give birth on November. Three females were not inseminated and were considered as negative controls.

During the first 2 months of gestation the ewes were milked twice a day. After birth, the lambs are kept with the mothers for 1 month and after that they were separated and the ewes were milked again from mid-December to the end of July. The possibility to milk the ewes during the first months of gestation allowed performing this study based on milk for early pregnancy diagnosis.

The day of insemination was considered as day 0. Blood and milk samples were collected from each ewe on days 0, 18, 20, 22, 25, 28, 32, 42, and 49 after artificial insemination (AI).

Blood samples (5 ml) were withdrawn from the jugular vein into heparinized vacutainer tubes that were put into a cool box until centrifugation. The plasma was separat

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. บทนำวินิจฉัยการตั้งครรภ์ก่อนกำหนดเป็นเครื่องมือสำคัญในการจัดการการสืบพันธุ์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในอุตสาหกรรมนม ทายผลจำนวน fetuses ได้จัดการโภชนาการที่เหมาะสมของ ewes ที่ในครรภ์ล่าช้า ซึ่งจะช่วยป้องกันภาวะตั้งครรภ์ ลดก่อน lambing อาหารต้นทุน เพิ่มประสิทธิภาพเกิดน้ำหนัก weaning น้ำหนักและดันของ lambs และลดอุบัติการณ์ของการคลอดลำบาก (Gearhart et al., 1988)Glycoproteins ที่เกี่ยวข้องกับการตั้งครรภ์เป็นของครอบครัวใหญ่ของรกลอก antigens ซึ่งตั้งครรภ์เฉพาะโปรตีน B (PSPB) มีสมาชิกครั้งแรกจะพบ (คนร้อยเอ็ด al., 1982) โมเลกุลเหล่านี้จะแสดง โดยทั้งขาวดำ และ binucleate เซลล์ trophectoderm (Green et al., 2000) แต่ส่วนใหญ่ secreted โดย binucleate เซลล์ (Zoli et al., 1992a) Ruminant PSPB/PAGs (henceforward ชื่อ ovPAG, caPAG หรือ boPAG สำหรับแพะ น้ำเชื้อ และ PAGs วัว) ได้รับการตรวจเลือดแม่รอบเวลาของสิ่งที่แนบทั่วไปของรก เมื่อเซลล์ binucleate trophoblastic เริ่มโยกย้าย และกับเซลล์เยื่อบุโพรงมดลูก syncytium fetomaternal (Wooding, 1984 และ Wooding et al, 2005) การขึ้นรูป เป็นต้นในปี 1986 เรียเฉพาะถูกพัฒนาขึ้นสำหรับ PSPB วัดและตั้งครรภ์วินิจฉัยในวัว (Sasser et al., 1986) หลังจากนั้น เรียต่างกัน (Ranilla et al, 1994, Willard et al, 1995 และ Zoli et al, 1992b) และเทคนิค ELISA ที่พัฒนา และใช้สำหรับการวินิจฉัยการตั้งครรภ์ใน ruminant ชนิด (Gábor et al, 2007 และลอว์สัน et al, 2014)โดยใช้ heterologous radioimmunoassays, ovPAGs สามารถตรวจพบในเลือดของ ewes ตั้งครรภ์รอบวัน 18 หรือ 20 หลังการผสมพันธุ์ (Barbato et al ปี 2009, Ranilla et al, 1994 และ Willard et al, 1995) ตลอดการตั้งครรภ์ ปลายแห่งความเข้มข้นแตกต่างส่วนใหญ่ระหว่างการพันธุ์ สายพันธุ์ และระยะเวลาของการตั้งครรภ์ (Ranilla et al, 1994 และ Zoli et al, 1992b) ภายในสายพันธุ์เดียวกัน พวกเขาสามารถมีผลมาจากปัจจัยหลายประการ เช่นพันธุ์เพศหญิง (Mialon et al, 1993 และ Ranilla et al, 1994) และหมายเลขและทารกในครรภ์ (Batalha และ al., 2001) ความเข้มข้นของปลายแห่งยังดูเหมือนจะ แตกต่างกันตามระบบการเรีย ความแตกต่างนี้อาจจะเนื่องจาก specificity ของ antisera (Barbato et al., 2009) จดจำน้อยปลายแห่งโมเลกุลแตกต่างกันของครอบครัวใช้นมในการกำหนดระดับของฮอร์โมนหรือสารอื่น ๆ ได้ดึงดูดความสนใจของเกษตรกรมากเนื่องจากการสุ่มตัวอย่างนมหลีกเลี่ยงผลของการเจาะหลอดเลือดดำ เครียดไม่จำเป็นต้องเชี่ยวชาญ และง่ายกว่าการรวบรวมและจัดเก็บเลือด (ฟรีดริช Holtz, 2010, Gajewski et al, 2008 ลอว์สัน et al, 2014 และเลอบลังก์ 2013) Tainturier et al. (1996) และอาลี (1999) ได้ก่อนเพื่อวิเคราะห์ความเข้มข้นของปลายแห่งในตัวอย่างน้ำนมระยะหลังคลอดในโคกระบือ พวกเขาคาดการณ์ในความเป็นไปได้ทางทฤษฎีตรวจปลายแห่งนมนอกจากนี้ในระหว่างการวินิจฉัยการตั้งครรภ์ก่อน สนับสนุนในการศึกษาเดิม (Gonzalez et al., 2001), คำสั่งนี้แสดงว่า ปลายแห่งความเข้มข้นสามารถยังพบในน้ำนมจากแพะคลอดก่อนกำหนดความรู้ของเรา มีไม่การศึกษาที่มีวิเคราะห์ PAGs ในนมและพลาสมาที่นำมาจาก ewes เดียวกันในเวลาเดียวกัน ดังนั้น ปัจจุบันทำงานมีวัตถุประสงค์ เพื่อกำหนด PAGs ในนมและพลาสม่าในครรภ์ก่อน (จากวัน 0 กับ 49 การกำหนดเป้าหมายจุดบางเวลา) และ เพื่อตรวจสอบว่า นมอาจเป็นทางเลือกดีพลาสม่าสำหรับช่วงตั้งครรภ์วินิจฉัยในแกะ2. วัสดุและวิธีการ2.1 การสัตว์ เลือด และตัวอย่างนมการศึกษาปัจจุบันได้ดำเนินการใน ewes นม Lacaune 29 (ที่พวกเขาแรกด้านการให้นม) ช่วงพฤษภาคม – กรกฎาคม Ewes ทั้งหมดมีห้องพัก และจัดการฟาร์มฝรั่งเศส (FARGE station) แบบมีผู้สอนโดยการวิจัยศูนย์ของ INRA-ทัวร์Ewes ถูกซิงโครไนส์ โดยแทรกเป็นฟองน้ำ intravaginal impregnated กับ 20 มิลลิกรัม flurogestone acetate (Chronogest ® Intervet นานา Angers ฝรั่งเศส) ซึ่งถูกเอาออกในภายหลัง 14 วัน ณ เวลาที่เอาฟองน้ำ 400-500 IU ของ eCG (Folligon ® นานา Intervet) ได้จัดการ ยี่สิบหก ewes ได้ inseminated เหือด ด้วยน้ำเชื้อสดครั้งที่ 55 h หลังจากเอาฟองน้ำ หรือ mated ในเดือนมิถุนายนคลอดในเดือนพฤศจิกายน หญิงสามได้ถูก inseminated และได้ถือเป็นการลบตัวควบคุมในช่วง 2 เดือนแรกของครรภ์ ewes ได้ milked สามี หลังคลอด lambs จะยังคงอยู่กับแม่ 1 เดือน และหลังจากที่ถูกแยกออกจากกัน และ ewes ได้ milked อีกครั้งจากกลางเดือนธันวาคมสิ้นเดือนกรกฎาคมนี้ นม ewes ในช่วงเดือนแรกของครรภ์ที่อาจเกิดขึ้นได้ทำการศึกษานี้ใช้นมสำหรับวินิจฉัยการตั้งครรภ์ก่อนวันผสมเทียมถูกถือว่าเป็นวัน 0 ตัวอย่างเลือดและน้ำนมถูกรวบรวมจาก ewe แต่ละวัน 0, 18, 20, 22, 25, 28, 32, 42 และ 49 หลังจากกองผสมเทียม (AI)ตัวอย่างเลือด (5 ml) ถูกถอนจากหลอดเลือดดำ jugular ใน heparinized vacutainer หลอดที่ใส่ลงในกล่องเย็นจน centrifugation พลาสมาถูก separat

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1.
บทนำการวินิจฉัยการตั้งครรภ์ในวัยเด็กเป็นเครื่องมือสำคัญในการบริหารจัดการการเจริญพันธุ์โดยเฉพาะอย่างยิ่งในอุตสาหกรรมนม การทำนายของจำนวนของตัวอ่อนจะช่วยให้การบริหารจัดการทางโภชนาการที่เหมาะสมของการตกลูกในการตั้งครรภ์ในช่วงปลายซึ่งจะช่วยในการป้องกันโรคโลหิตเป็นพิษการตั้งครรภ์ลดค่าใช้จ่ายการให้อาหารก่อน lambing เพิ่มประสิทธิภาพน้ำหนักแรกเกิด, หย่านมน้ำหนักและความอยู่รอดของลูกแกะและลดอุบัติการณ์ของ dystocia (Gearhart et al., 1988). ไกลโคโปรตีนการตั้งครรภ์ที่เกี่ยวข้องอยู่ในครอบครัวใหญ่ของแอนติเจนรกซึ่งโปรตีนการตั้งครรภ์เฉพาะ B (PSPB) เป็นสมาชิกคนแรกที่จะค้นพบ (บัตเลอร์ et al., 1982) โมเลกุลเหล่านี้จะแสดงทั้งขาวดำและเซลล์ binucleate ของ trophectoderm (สีเขียว et al., 2000) แต่ส่วนใหญ่ที่หลั่งมาจากเซลล์ binucleate (Zoli et al., 1992a) สัตว์เคี้ยวเอื้อง PSPB / PAGs (ชื่อตั้งแต่บัดนี้เป็นต้นไป ovPAG, caPAG หรือ boPAG สำหรับแกะ, แพะและ PAGs วัว) จะมีการตรวจพบในเลือดของมารดาในช่วงเวลาของสิ่งที่แนบมาที่ชัดเจนของรกเมื่อ trophoblastic เซลล์ binucleate เริ่มต้นในการโยกย้ายและฟิวส์ที่มีเยื่อบุโพรงมดลูก เซลล์รูป syncytium fetomaternal (Wooding 1984 และ Wooding et al, 2005) เร็วเท่าในปี 1986 เฉพาะ RIA ได้รับการพัฒนาสำหรับการวัด PSPB และการวินิจฉัยการตั้งครรภ์ในวัว (Sasser et al., 1986) หลังจากนั้น RIA แตกต่างกัน (Ranilla et al, 1994, วิลลาร์ด, et al, 1995 และ Zoli, et al, 1992b) และเทคนิควิธี ELISA ได้รับการพัฒนาและใช้สำหรับการวินิจฉัยการตั้งครรภ์ในสายพันธุ์สัตว์เคี้ยวเอื้อง (Gábor et al, 2007 และลอว์สัน, et al, 2014) โดยใช้ radioimmunoassays heterologous, ovPAGs สามารถตรวจพบในเลือดของแกะตั้งครรภ์รอบวันที่ 18 หรือ 20 หลังจากผสมพันธุ์ (Barbato et al, 2009 Ranilla et al, 1994 และวิลลาร์ด, et al, 1995) ตลอดการตั้งครรภ์, ความเข้มข้นแตกต่างกันส่วนใหญ่แบ่งระหว่างสายพันธุ์สายพันธุ์และระยะเวลาของการตั้งครรภ์ (Ranilla et al, 1994 และ Zoli, et al, 1992b) ภายในสายพันธุ์เดียวกันที่พวกเขาสามารถได้รับอิทธิพลจากปัจจัยหลายประการเช่นสายพันธุ์ของหญิง (Mialon, et al, 1993 และ Ranilla, et al, 1994) และจำนวนของทารกในครรภ์ (Batalha et al., 2001) ความเข้มข้น PAG ก็ดูเหมือนว่าจะแตกต่างกันตามระบบ RIA ความแตกต่างนี้เป็นอาจเป็นเพราะความจำเพาะของ antisera ที่ (Barbato et al., 2009) การรับรู้มากขึ้นหรือน้อยโมเลกุล PAG ที่แตกต่างกันของครอบครัว. ใช้งานของนมเพื่อตรวจสอบ ระดับของฮอร์โมนหรือสารอื่น ๆ ที่ได้รับความสนใจมากของเกษตรกรเพราะการสุ่มตัวอย่างนมหลีกเลี่ยงผลกระทบที่เครียดจากการเจาะเลือดไม่จำเป็นต้องมีความเชี่ยวชาญพิเศษและง่ายต่อการเก็บรวบรวมและจัดเก็บกว่าเลือด (ฟรีดริช, โฮลต์ซ 2010 Gajewski et al, 2008 ลอว์สัน, et al, 2014 และเลอบลัง 2013) Tainturier et al, (1996) และอาลี (1999) เป็นครั้งแรกในการวิเคราะห์ความเข้มข้นของ PAG ในตัวอย่างนมในระยะหลังคลอดในวัว พวกเขาคาดการณ์เกี่ยวกับความเป็นไปได้ในทางทฤษฎีของการตรวจสอบ PAG ในนมในระหว่างการวินิจฉัยการตั้งครรภ์ก่อน คำสั่งนี้ได้รับการสนับสนุนในการศึกษาเดิม (กอนซาเล et al., 2001) แสดงให้เห็นว่ามีความเข้มข้น PAG นอกจากนี้ยังสามารถตรวจพบในนมจากแพะในระหว่างการตั้งครรภ์ก่อน. ความรู้ของเรามีการศึกษาที่มีการวิเคราะห์ PAGs ในนมและไม่มี พลาสม่าที่นำมาจากแกะเดียวกันในเวลาเดียวกัน ดังนั้นการทำงานในปัจจุบันมีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบ PAGs ในนมและพลาสม่าในระหว่างการตั้งครรภ์ในช่วงต้น (จากวันที่ 0-49 เป้าหมายจุดเวลาที่แน่นอน) และเพื่อตรวจสอบว่านมอาจจะเป็นทางเลือกที่ดีพลาสม่าในการวินิจฉัยการตั้งครรภ์ในช่วงต้นแกะ. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 เลี้ยงสัตว์, เลือดและตัวอย่างนมการศึกษาครั้งนี้ได้ดำเนินการใน29 Lacaune แกะนม (ที่ให้นมบุตรแรกของพวกเขา) ในช่วงเดือนพฤษภาคมถึงเดือนกรกฎาคม แกะทั้งหมดถูกเก็บและการบริหารจัดการในฟาร์มฝรั่งเศส (สถานี FARGE) ดูแลโดยศูนย์การวิจัยของ INRA-Tours. ตกลูกได้รับการทำข้อมูลให้ตรงกันโดยการแทรกของฟองน้ำชุบด้วยเหน็บยาทาง 20 มก. อะซิเตท flurogestone (Chronogest®, Intervet นานาชาติ Angers, ฝรั่งเศส) ซึ่งจะถูกลบออก 14 วันต่อมา ในขณะที่การกำจัดฟองน้ำ 400-500 IU ของคลื่นไฟฟ้าหัวใจ (Folligon®, Intervet นานาชาติ) เป็นยา ตกลูกยี่สิบหกได้รับการผสมเทียมด้วยน้ำเชื้อเทียมสดครั้งเดียวที่ 55 ชั่วโมงหลังการกำจัดฟองน้ำหรือแต่งงานในเดือนมิถุนายนที่จะให้กำเนิดพฤศจิกายน สามหญิงไม่ได้รับการผสมเทียมและได้รับการพิจารณาเป็นตัวควบคุมเชิงลบ. ในช่วง 2 เดือนแรกของการตั้งครรภ์แกะที่ถูกรีดนมวันละสองครั้ง หลังคลอดลูกแกะจะถูกเก็บไว้กับมารดาเป็นเวลา 1 เดือนและหลังจากนั้นพวกเขาจะถูกแยกจากกันและถูกรีดนมแกะอีกครั้งจากกลางเดือนธันวาคมถึงปลายเดือนกรกฎาคมที่ ความเป็นไปได้ให้นมตกลูกในช่วงเดือนแรกของการตั้งครรภ์ได้รับอนุญาตให้ดำเนินการศึกษาครั้งนี้อยู่บนพื้นฐานของนมสำหรับการวินิจฉัยการตั้งครรภ์ก่อน. ในวันของการเพาะเชื้อได้รับการพิจารณาเป็นวัน0. เลือดและตัวอย่างนมที่ถูกเก็บรวบรวมจากตัวเมียแต่ละในวันที่ 0, 18, ​​20 , 22, 25, 28, 32, 42, และ 49 หลังจากการผสมเทียม (AI). ตัวอย่างเลือด (5 มล.) ได้รับการถอนออกจากเส้นเลือดใหญ่เส้นเข้าไปในท่อ vacutainer heparinized ที่ถูกใส่ลงไปในกล่องเย็นจนหมุนเหวี่ยง พลาสม่าเป็นแยก