2. Experimental2.1. Reagents and ma

2. Experimental
2.1. Reagents and materials
Standards of L-Tryptophan, used in the study, were supplied
from Sigma–Aldrich (St. Louis, MO, USA). Acetonitrile, ammonium
acetate, sodium hydroxide and hydrochloric acid were supplied
from Merck (Darmstadt, Germany). All aqueous solutions were
prepared with doubly distilled water obtained from the Milli-Q
System (Millipore, Bedford, MA, USA). During hydrolysis and
sample preparation extra-pure nitrogen was used.
Samples of wheat, rye, chickpea, red lentil, barley, and kidney
beans were purchased from local markets in Turkey and grounded
to flour in the laboratory.
2.2. Instrumentation
HPLC system (Shimadzu LC-20AT, Tokyo, Japan) consisting of
Model LC-20AT multi-solvent delivery system and Model
RF-10AXL fluorescence detector were used for the analysis. For
recording and data processing, LC Solution software from
Shimadzu (Tokyo, Japan) was used.
The analytical column, Lichrospher 60 RP-Select B
(250mm  4 mm), 5 lm of pore size, was supplied from Agilent
(Santa Clara, CA, USA).
2.3. Standard preparation
Standard stock solution of tryptophan (100 lg/mL) was prepared in acidic water (doubly distilled water adjusted to pH 6.3
with 0.1 N hydrochloric acid) (Yust et al., 2004; Zhang et al.,
2009). It was freshly prepared in each day of analysis. Individual
working standard solutions of five concentration levels were
prepared by using the stock solution.
2.4. Sample preparation
The analytical method was carried out with a little modification
of sample preparation procedure and chromatographic conditions
reported by Yust et al. (2004) and Zhang et al. (2009). In order to
determine the optimal condition, four different hydrolysis times
(4, 12, 16, 24 h) were applied for red lentil and wheat samples at
120 C. The results show that 4 h of hydrolysis time (Yust et al.,
2004) resulted in a lower amount of Trp comparing to the other
hydrolysis times. Besides, no significant difference was observed
between 12, 16 and 24 h of hydrolysis time. All results are shown
in Fig. 1.
Each sample (0.1–1 g) was weighed in 50 mL hydrolysis bottle
with Teflon-lined screw-cap and then treated with 20 mL of 5 N
sodium hydroxide solutions under nitrogen atmosphere. After
hydrolysing in an oven at 120 C for 12 h, the hydrolysates were
cooled down to room temperature. Following filtration through
ashless filter papers, 1 mL of filtrate was diluted with 60 mL of
acidic water (pH 6.3) and the final pH level was adjusted to 6.3
by diluted hydrochloric acid solution (Yust et al., 2004; Zhang
et al., 2009). The final solution was diluted to 100 mL in brown
volumetric flask with doubly distilled water and filtered through
0.20 lm filter into HPLC vials.
2.5. Chromatographic conditions
In addition to modification of the hydrolysis time, acetate buffer
was used to stabilize the pH value of the mobile phase which is
preferred in long-term studies. The mobile phase was prepared
by mixing 900 mL of ammonium acetate buffer, (pH 6.3) with
100 mL of acetonitrile. The mixture was filtered through a
0.22 lm filter.
Then, 10 lL of sample solution was injected (flow rate:
1 mL/min). The Trp contents were determined at an excitation
wavelength of 280 nm and an emission wavelength of 520 nm
(Zhang et al., 2009; Delgado-Andrade et al., 2006). Running time
was 10 min and retention time for Trp was 5.8 ± 0.2 min. The quantification was performed by correlating peak areas of the samples
with the concentrations according to the calibration curve.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. ทดลอง2.1. สารและวัสดุที่มาของ L-โพรไบโอ ใช้ในการศึกษาจากซิกม่า – Aldrich (St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) Acetonitrile แอมโมเนียอะซิเตท โซเดียมไฮดรอกไซด์ และกรดไฮโดรคลอริกได้มาจากเมอร์ค (ดาร์มสตัดท์ เยอรมนี) ถูกละลายทั้งหมดด้วยน้ำกลั่นผสานงานที่ได้รับจากหนึ่ง-Qระบบ (มิลลิพอร์ กลาสโกว์ MA สหรัฐอเมริกา) ในระหว่างการย่อย และใช้ไนโตรเจนบริสุทธิ์พิเศษเตรียมตัวอย่างตัวอย่างของข้าวสาลี ข้าวไรย์ แกง ถั่วเลนทิลใส่สีแดง ข้าวบาร์เลย์ และไตถั่วซื้อจากตลาดในประเทศตุรกี และต่อสายดินการแป้งในห้องปฏิบัติการ2.2. ใช้เครื่องมือระบบ HPLC (Shimadzu LC 20AT โตเกียว ญี่ปุ่น) ประกอบด้วยLC 20AT ระบบส่งตัวทำละลายหลายรุ่นและรุ่นRF 10AXL เครื่องตรวจจับสารเรืองแสงที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ สำหรับการบันทึกและประมวลผล ซอฟต์แวร์โซลูชัน LC จากข้อมูลใช้ Shimadzu (โตเกียว ญี่ปุ่น)คอลัมน์วิเคราะห์ Lichrospher 60 RP เลือก B(250 มม. 4 mm), 5 lm ขนาดรูขุมขน ถูกป้อนจาก Agilent(ซานตาคลารา CA, USA)2.3 มาตรฐานการเตรียมจัดเตรียมมาตรฐานหุ้นโซลูชันของโพรไบโอ (100 lg mL) ในน้ำเป็นกรด (น้ำกลั่นผสานงานปรับค่า pH 6.3ด้วย 0.1 N กรดไฮโดรคลอริก) (Yust et al. 2004 Zhang et al.,2009) ถูกปรุงสดใหม่ในแต่ละวันของการวิเคราะห์ แต่ละคนทำงานที่ระดับความเข้มข้น 5 แก้เตรียม โดยใช้โซลูชันหุ้น2.4. ตัวอย่างวิธีวิเคราะห์ถูกดำเนินการกับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างและเงื่อนไขโครมารายงาน โดย Yust et al. (2004) และ Zhang et al. (2009) ในการที่จะตรวจสอบสภาพที่เหมาะสม ย่อยแตกต่างกันสี่ครั้ง(4, 12, 16, 24 ชม.) ใช้สำหรับตัวอย่างถั่วเลนทิลใส่และข้าวสาลีที่สีแดงค. 120 ผลลัพธ์แสดงว่า 4 ชั่วโมงเวลาย่อย (Yust et al.,2004) ส่งผลให้จำนวนเงินต่ำกว่าของ Trp เปรียบเทียบกันสลายครั้ง มีการตรวจสอบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง 12, 16 และ 24 h เวลาย่อย แสดงผลลัพธ์ทั้งหมดในรูปที่ 1แต่ละอย่าง (0.1-1 กรัม) มีน้ำหนัก 50 มิลลิลิตรย่อยขวดมีเรียงรายเทฟลอนฝาเกลียวแล้ว รักษา ด้วย 5 N 20 มล.การแก้ปัญหาโซเดียมไฮดรอกไซด์ภายใต้บรรยากาศไนโตรเจน หลังจากที่ได้ hydrolysates hydrolysing ในเตาอบที่ 120 C สำหรับ 12 ชม.เย็นลงที่อุณหภูมิห้อง ต่อไปนี้กรองผ่านashless ตัวกรองเอกสาร ระบบการกรอง 1 มล.ถูกเจือจาง ด้วย 60 มล.น้ำเป็นกรด (pH 6.3) และระดับค่า pH สุดท้ายปรับปรุงที่ 6.3ด้วยกรดไฮโดรคลอริกเจือจาง (Yust et al. 2004 จางet al. 2009) ทางออกสุดท้ายถูกเจือจางไป 100 มล.น้ำตาลขวดแก้ววัดปริมาตรด้วยน้ำกลั่น และกรองผ่านมั่นใจอีกชั้น0.20 lm ด้วยตัวกรองลงในขวดบรรจุ HPLC2.5 เงื่อนไขโครมานอกจากการปรับเปลี่ยนเวลาสลาย บัฟเฟอร์อะซิเตทใช้เพื่อรักษาเสถียรภาพของค่า pH ของเฟสเคลื่อนที่แนะนำในการศึกษาระยะยาว จัดเตรียมขั้นตอนการเคลื่อนที่ผสมแอมโมเนียอะซิเตบัฟเฟอร์, (ค่า pH 6.3) กับ 900 มล.100 มิลลิลิตร acetonitrile ส่วนผสมถูกกรองผ่านตัวกรอง lm 0.22จากนั้น 10 lL ของโซลูชันตัวอย่างถูกส่ง (อัตราการไหล:1 มิลลิลิตร/นาที) กำหนดเนื้อหา Trp ที่กระตุ้นการความยาวคลื่น 280 นาโนเมตรและมีการปล่อยความยาวคลื่น 520 nm(Zhang et al. 2009 Delgado-Andrade et al. 2006) เวลาทำงาน10 นาที และเวลาที่เก็บข้อมูลสำหรับ Trp 5.8 ± 0.2 นาที ด้านการดำเนินการ โดยกำลังรวบรวมสำหรับพื้นที่สูงสุดของตัวอย่างมีความเข้มข้นตามเส้นโค้งการสอบเทียบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. การทดลอง
2.1 รีเอเจนต์และวัสดุมาตรฐานของ L-Tryptophan ที่ใช้ในการศึกษาได้รับการจัดจำหน่ายจากSigma-Aldrich (เซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกา) acetonitrile, แอมโมเนียมอะซิเตท, โซดาไฟและกรดไฮโดรคลอริกที่ถูกจัดมาจากเมอร์ (ดาร์มสตัด, เยอรมนี) สารละลายทั้งหมดถูกปรุงด้วยน้ำกลั่นทวีคูณที่ได้รับจาก Milli-Q ระบบ (คฟอร์ด, MA, USA) ในระหว่างการย่อยสลายและการเตรียมตัวเป็นพิเศษไนโตรเจนบริสุทธิ์ถูกนำมาใช้. ตัวอย่างข้าวสาลีข้าวไรย์ถั่วเขียว, ถั่วแดง, ข้าวบาร์เลย์และไตถั่วที่ซื้อมาจากตลาดท้องถิ่นในประเทศตุรกีและมีเหตุผลที่จะแป้งในห้องปฏิบัติการ. 2.2 เครื่องมือวัดระบบ HPLC (Shimadzu LC-20AT, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ซึ่งประกอบด้วยรุ่นLC-20AT ระบบการจัดส่งหลายตัวทำละลายและรุ่นRF-10AXL ตรวจจับการเรืองแสงถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ สำหรับการบันทึกและประมวลผลข้อมูลซอฟต์แวร์โซลูชั่น LC จาก Shimadzu (โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ถูกนำมาใช้. คอลัมน์วิเคราะห์ LiChrospher? 60 RP-Select B (250 มม 4 มิลลิเมตร) 5 ไมครอนขนาดรูขุมขนได้รับการจัดจำหน่ายจาก Agilent (Santa Clara, CA, USA). 2.3 มาตรฐานการเตรียมการแก้ปัญหาสต็อกของโพรไบโอมาตรฐาน (100 LG / มิลลิลิตร) ถูกจัดทำขึ้นในน้ำที่เป็นกรด (น้ำกลั่นทวีคูณปรับค่าพีเอช 6.3 กับ 0.1 ไม่มีกรดไฮโดรคลอ) (Yust et al, 2004;.. Zhang et al,, 2009) มันได้รับการปรุงสดใหม่ในแต่ละวันของการวิเคราะห์ บุคคลโซลูชั่นมาตรฐานการทำงานของห้าระดับความเข้มข้นที่ถูกจัดทำขึ้นโดยใช้วิธีการแก้ปัญหาสต็อก. 2.4 การจัดทำตัวอย่างวิธีการวิเคราะห์ที่ได้รับการดำเนินการที่มีการปรับเปลี่ยนเล็ก ๆ น้อย ๆ ของขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างและเงื่อนไขโครมารายงานโดย Yust et al, (2004) และ Zhang et al, (2009) เพื่อที่จะตรวจสอบสภาพที่ดีที่สุดครั้งที่สี่การย่อยสลายที่แตกต่างกัน(4, 12, 16, 24 ชั่วโมง) ถูกนำมาใช้สำหรับถั่วแดงและตัวอย่างข้าวสาลีที่120 องศาเซลเซียส ผลปรากฏว่า 4 ชั่วโมงเวลาการย่อยสลาย (Yust et al., 2004) ส่งผลให้ในปริมาณที่ต่ำกว่าของ Trp เมื่อเทียบกับคนอื่น ๆครั้งการย่อยสลาย นอกจากนี้ไม่แตกต่างกันพบว่าระหว่างวันที่ 12, 16 และ 24 ชั่วโมงของเวลาการย่อยสลาย ผลทั้งหมดจะแสดงในรูปที่ 1. แต่ละตัวอย่าง (0.1-1 กรัม) ได้รับการชั่งน้ำหนักในการย่อยสลายขวดมิลลิลิตร 50 ด้วยเทฟลอนเรียงรายสกรูหมวกและรับการรักษาแล้ว 20 มิลลิลิตร 5 N โซลูชั่นโซดาไฟภายใต้บรรยากาศไนโตรเจน หลังจากกระบวนการย่อยในเตาอบที่ 120 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 12 ชั่วโมงการไฮโดรไลเซได้เย็นลงที่อุณหภูมิห้อง ต่อไปนี้การกรองผ่านashless เอกสารกรอง 1 มิลลิลิตรกรองถูกเจือจางด้วย 60 มิลลิลิตรน้ำที่เป็นกรด(pH 6.3) และระดับ pH สุดท้ายที่ถูกปรับ 6.3 โดยเจือจางสารละลายกรดไฮโดรคลอริก (Yust et al, 2004;. Zhang., et al, 2009) วิธีการแก้ปัญหาสุดท้ายก็ลดลงเหลือ 100 มิลลิลิตรน้ำตาลในขวดปริมาตรด้วยน้ำกลั่นทวีคูณและกรองผ่านตัวกรอง0.20 ไมครอนลงไปในขวด HPLC. 2.5 เงื่อนไขโครมานอกจากการปรับเปลี่ยนเวลาการย่อยสลายของบัฟเฟอร์อะซิเตทถูกใช้ในการรักษาเสถียรภาพของค่าพีเอชของเฟสมือถือที่เป็นที่ต้องการในการศึกษาระยะยาว ขั้นตอนที่มือถือถูกจัดทำขึ้นโดยการผสม 900 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์อะซิเตตแอมโมเนียม (pH 6.3) ที่มี 100 มิลลิลิตร acetonitrile ส่วนผสมที่ถูกกรองผ่าน. กรอง 0.22 ไมครอนแล้ว10 LL ตัวอย่างของการแก้ปัญหาถูกฉีด (อัตราการไหล: 1 มิลลิลิตร / นาที) เนื้อหา Trp ได้รับการพิจารณาในการกระตุ้นความยาวคลื่น280 นาโนเมตรของและปล่อยความยาวคลื่น 520 นาโนเมตร(Zhang et al, 2009;.. เดลกาโด-Andrade et al, 2006) เวลาเล่นเป็นเวลา 10 นาทีและการเก็บรักษาเวลาสำหรับ Trp เป็น 5.8 ± 0.2 นาที ปริมาณได้ดำเนินการโดยความสัมพันธ์ระหว่างพื้นที่จุดสูงสุดของกลุ่มตัวอย่างที่มีความเข้มข้นตามเส้นโค้งการสอบเทียบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . ทดลอง2.1 . สารเคมีและวัสดุมาตรฐาน - ที่ใช้ในการศึกษา คือ จัดจาก Sigma –ดิช ( St . Louis , MO , USA ) แอมโมเนียมไนอะซิเตท , โซเดียมไฮดรอกไซด์และกรดเกลือก็มาจากเมอร์ค ( ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) โซลูชั่นที่มีทั้งหมดได้เตรียมได้จาก milli-q ทวีคูณกลั่นน้ำระบบ ( มิลลิ , ฟอร์ด , MA , USA ) ในระหว่างการย่อยสลาย และตัวอย่างการเตรียมการเสริมไนโตรเจนบริสุทธิ์ถูกใช้ตัวอย่างของข้าวสาลี , ข้าวไร , ถั่วเขียว , ถั่วแดง , ข้าวบาร์เลย์ และไตเมล็ดที่ซื้อมาจากตลาดท้องถิ่นในตุรกี และสายดินแป้งในห้องปฏิบัติการ2.2 . เครื่องมือวัดระบบ HPLC ( ประเทศญี่ปุ่น Shimadzu lc-20at , โตเกียว , ) ประกอบด้วยlc-20at ตัวทำละลายแบบหลายระบบส่งและรูปแบบrf-10axl เรืองแสงเครื่องใช้สำหรับการวิเคราะห์ สำหรับการบันทึกและการประมวลผลข้อมูลโซลูชั่นซอฟต์แวร์จาก LCShimadzu ( โตเกียว , ญี่ปุ่น ) คือใช้คอลัมน์วิเคราะห์ lichrospher 60 RP เลือก B( 250 มม. 4 มม. ) ขนาดรูพรุน 5 อิมก็มาจากเลนต์( ซานตาคลารา แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา )2.3 การเตรียมการมาตรฐานโซลูชั่นสินค้ามาตรฐานของทริปโตฟาน ( 100 ) / ml ) เตรียมน้ำเปรี้ยว ( ทวีคูณกลั่นน้ำค่า pH 6.3กรดไฮโดรคลอริค 0.1 N ) ( ยัสต์ et al . , 2004 ; Zhang et al . ,2009 ) มันสดที่เตรียมไว้ในแต่ละวันของการวิเคราะห์ บุคคลมาตรฐานใช้งานโซลูชั่นของห้าระดับความเข้มข้นเตรียมโดยใช้หุ้นโซลูชั่น2.4 . ตัวอย่างการเตรียมวิธีการวิเคราะห์ข้อมูล ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างและเงื่อนไขทางโครมาโตกราฟีรายงานโดย ยัสต์ et al . ( 2004 ) และ Zhang et al . ( 2009 ) เพื่อศึกษาสภาวะที่เหมาะสมในการย่อยสลายต่างกัน 4 เท่า( 4 , 12 , 16 , 24 ชั่วโมง ) ที่ใช้สำหรับถั่วแดง และข้าวสาลี ตัวอย่างที่120 องศาเซลเซียสพบว่า 4 ชั่วโมงของเวลาปฏิกิริยา ( ยัสต์ et al . ,2547 ) มีผลในการลดลงของปริมาณ trp เปรียบเทียบกับอื่น ๆการย่อยสลายครั้ง นอกจากนี้ พบว่าไม่มีความแตกต่างระหว่าง 12 , 16 และ 24 ชั่วโมงของเวลาการ . ผลทั้งหมดจะแสดงในรูปที่ 1แต่ละตัวอย่าง ( 0.1 – 1 g ) หนักในการย่อยขวด 50 มล.ด้วย Teflon เรียงรายสกรูฝาแล้วปฏิบัติ 20 ml 5 Nโซดาไฟ โซลูชั่น ภายใต้บรรยากาศของไนโตรเจน หลังจากhydrolysing ในเตาอบที่อุณหภูมิ 120 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 12 ชั่วโมง ของคือเย็นลงถึงอุณหภูมิห้อง การกรองผ่านต่อไปนี้กระดาษกรองนกหกเล็กปากแดง 1 มิลลิลิตร โดยเจือจางด้วย 60 มิลลิลิตรน้ำที่เป็นกรด ( pH 6.3 ) และสุดท้ายคือ การปรับระดับ pH 6.3โดยโดยใช้กรดเกลือเจือจางสารละลาย ( ยัสต์ et al . , 2004 ; จางet al . , 2009 ) สารละลายเจือจาง 100 ml ในสีน้ำตาลขวดปริมาตรกับทวีคูณกลั่นและกรองผ่าน0.20 LM กรองใส่ขวด 4 .2.5 และเงื่อนไขนอกจากการปรับเปลี่ยนเวลาของเอนไซม์อะซิเตทบัฟเฟอร์ใช้ปรับค่า pH ของเฟสเคลื่อนที่ซึ่งเป็นใช้ในการศึกษาระยะยาว ระยะที่เคลื่อนที่ได้โดยผสม 900 กรัมแอมโมเนียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 6.3 )100 มิลลิลิตรของไน . ส่วนผสมจะถูกกรองผ่าน0.22 โดยตัวกรองแล้ว 10 จะถูกฉีดสารละลายตัวอย่าง ( อัตราการไหล1 มิลลิลิตรต่อนาที ) เนื้อหา TRP ตัดสินใจที่กระตุ้นความยาวคลื่น 280 nm และปล่อยความยาวคลื่น 520 nm( Zhang et al . , 2009 ; เดลกาโด อันดราเด้ et al . , 2006 ) เวลา10 นาทีในเวลาสำหรับ TRP คือ 5.8 ± 0.2 นาทีปริมาณการใช้สูงสุด รวมทั้งพื้นที่ของตัวอย่างที่มีความเข้มข้นตามการเข้าโค้ง