with normal mouse IgG and QD-IgG conjugates, little or no signal
was detected (Fig. 1B, 1D), indicating that the QD-IgG conjugates
were relatively specific for the target.
Avidin (streptavidin) is another common molecule used in
immunofluorescence labeling. We linked QD 560 and QD 608 to
streptavidin and used the QD-streptavidin conjugates as alternative
probes to detect Her2. The QD-streptavidin probes, together with a
humanized anti-Her2 antibody and biotinylated goat anti-human
IgG, effectively stained Her2 on the surface of fixed as well as live
SK-BR-3 cells (Fig. 2A, 2B). When the cells were incubated with QD-
streptavidin alone, weak or no detectable signal was observed on the
cell surface (one control for QD 608 shown in Fig. 2C), indicating
that the QD-streptavidin conjugates have very low nonspecific binding in a biotin-streptavidin labeling system.
Fixed tissue sections are very common specimens for immunological labeling and pathological diagnosis. To investigate the
compatibility of QD probes with this type of material, we incubated mouse mammary tumor tissue sections expressing human
Her2 successively with rabbit antiserum reacting with the
cytoplasmic domain of Her2, biotinylated goat anti-rabbit IgG,
and QD 630–streptavidin. QDs clearly labeled the tumor cells with
the expected membranous pattern (Fig. 2D). This demonstrates
that QD-based probes can be adapted to applications with tissue
sections.
As nanoparticles, QDs are larger (4–10 nm in diameter) than
organic dye molecules (∼1 nm). Although we effectively labeled the
extracellular domain of Her2 expressed on cultured cells and the
cytoplasmic domain of Her2 in tissue sections with QDs, we considered that labeling proteins inside the cell might be difficult because
steric factors could limit the access of QD probes to intracellular targets. To investigate this possibility, we attempted to stain microtubules in mouse 3T3 fibroblast cells using QD-streptavidin as the
ด้วยเมาส์ปกติ IgG และ IgG คิวดีสวีต conjugates น้อย หรือไม่มีสัญญาณถูกตรวจพบ (Fig. 1B, 1D), ที่บอกว่า ที่คิวดีสวีต-IgG conjugatesค่อนข้างเฉพาะเจาะจงสำหรับเป้าหมาย Avidin (streptavidin) เป็นโมเลกุลทั่วไปอื่นที่ใช้ในimmunofluorescence ติดฉลาก เราเชื่อมโยง 560 คิวดีสวีตและคิวดีสวีต 608 การstreptavidin และใช้ conjugates คิวดีสวีต streptavidin เป็นอื่นคลิปปากตะเข้สืบ Her2 คิวดีสวีต streptavidin คลิปปากตะเข้ ร่วมกันมีการhumanized ป้องกัน-Her2 แอนติบอดีและมนุษย์ป้องกันแพะ biotinylatedIgG, Her2 อย่างทิ้งคราบบนผิวถาวร รวมทั้งถ่ายทอดสดSK-BR-3 เซลล์ (Fig. 2A, 2B) เมื่อเซลล์ถูก incubated และคิวดีสวีตstreptavidin คนเดียว อ่อนแอหรือไม่มีสัญญาณสามารถถูกตรวจสอบในการบ่งชี้เซลล์ผิว (หนึ่งควบคุมสำหรับคิวดีสวีต 608 แสดงใน Fig. 2C),ว่า conjugates คิวดีสวีต streptavidin มีผูกที่เจาะจงมากในระบบการติดฉลาก streptavidin ไบโอติน ส่วนเนื้อเยื่อถาวรมีไว้เป็นตัวอย่างกันมากภูมิคุ้มกันการติดฉลากและการวินิจฉัยทางพยาธิวิทยา การตรวจสอบการเข้ากันได้ของคลิปปากตะเข้คิวดีสวีตกับวัสดุชนิดนี้ เรา incubated กำลังมนุษย์ส่วนเนื้อเยื่อของเนื้องอกทางหน้าอกเมาส์Her2 ติด ๆ กัน มีปฏิกิริยากับ antiserum กระต่ายโดเมน cytoplasmic ของ Her2, biotinylated กระต่ายป้องกันแพะ IgGและคิวดีสวีต 630 – streptavidin QDs ชัดเจนป้ายเซลล์เนื้องอกด้วยที่คาด membranous ลาย (Fig. 2D) นี้แสดงให้เห็นถึงว่า ตามคิวดีสวีตคลิปปากตะเข้สามารถปรับประยุกต์ใช้กับเนื้อเยื่อส่วนการ เป็นการเก็บกัก QDs มีขนาดใหญ่ (4-10 นาโนเมตรเส้นผ่านศูนย์กลาง) มากกว่าสีย้อมอินทรีย์โมเลกุล (∼1 nm) แม้ว่าเราชื่ออย่างนี้โดเมน extracellular ของ Her2 แสดงบนเซลล์อ่างและโดเมน cytoplasmic ของ Her2 ในส่วนเนื้อเยื่อกับ QDs เราถือว่า ติดฉลากโปรตีนภายในเซลล์อาจจะยากเนื่องจากปัจจัย steric สามารถจำกัดการเข้าถึงของคิวดีสวีตคลิปปากตะเข้เพื่อเป้าหมาย intracellular การตรวจสอบความเป็นไปได้นี้ เราพยายามติด microtubules ในเซลล์ fibroblast 3T3 เมาส์ใช้คิวดีสวีต streptavidin เป็น
การแปล กรุณารอสักครู่..
