gen) in a final volume of 25 ll. The PCR conditions were set as follows:
94 C for 5 min, followed by 94 C for 30 s, 50 C for 30 s and
72 C for 30 s for 35 cycles, ending with 72 C for 10 min. The PCR
products were verified by electrophoresis on a 1.5% agarose gel and
visualized using ethidium bromide staining, and the DNA fragments
were excised using a Gel-M™ Gel Extraction system kit
(Bio 101; Viogene, La Jolla, CA) and cloned into pGEM-T Easy vector
(Promega; Madison, WI). A plasmid containing the insert was
sequenced using a dye terminator cycle sequencing kit (Perkin Elmer,
Foster City, CA) and submitted to BLAST for comparisons to
known sequences accessible in the NCBI database.kidney and intestine were stained with NTMT (100 mM NaCl,
100 mM Tris–HCl, pH 9.5, 50 mM Mg2Cl and 0.1% Tween-20),
which was followed by NBT/BCIP staining. For the purpose of a
comparison, all the sections were stained with NBT/BCIP for exactly
2 h.
เก็น) ในเล่มสุดท้าย 25 LL เงื่อนไข PCR ถูกกำหนดดังต่อไปนี้:
94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 และ
72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที 35 รอบที่ลงท้ายด้วย 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที PCR
ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการตรวจสอบโดย electrophoresis บน agarose เจล 1.5% และ
มองเห็นโดยใช้การย้อมสี ethidium bromide และชิ้นส่วนดีเอ็นเอ
ที่ถูกตัดโดยใช้เจล-M ™เจลสกัดระบบชุด
(ไบโอ 101; Viogene, La Jolla, CA) และโคลนเข้า pGEM -T เวกเตอร์ Easy?
(Promega; Madison, WI) พลาสมิดที่มีแทรกได้
ติดใจใช้วงจรเทอร์มิย้อมชุดลำดับ (Perkin Elmer,
ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) และส่งไปยังระเบิดสำหรับการเปรียบเทียบกับ
ลำดับที่รู้จักกันสามารถเข้าถึงได้ใน database.kidney NCBI และลำไส้ถูกย้อมด้วยสี NTMT (100 มิลลิโซเดียมคลอไรด์,
100 มิลลิ Tris-HCl, พีเอช 9.5, 50 มิลลิ Mg2Cl และ 0.1% Tween-20)
ซึ่งตามมาด้วยการย้อมสี NBT / BCIP สำหรับวัตถุประสงค์ของ
การเปรียบเทียบทุกส่วนที่ถูกย้อมด้วยสี NBT / BCIP สำหรับตรง
2 ชั่วโมง
การแปล กรุณารอสักครู่..

Gen ) ในเล่มสุดท้าย 25 ll เงื่อนไขทั้งหมดจะถูกตั้งค่าดังนี้
94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ตามด้วย 94 C 30 , 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีและ
72 C 30 เป็น 35 รอบ จบด้วย 72 C 10 นาทีผลิตภัณฑ์ PCR
ถูกตรวจสอบโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบน 1.5 % เจล
มองเห็นและใช้ คู่ bromide staining และชิ้นส่วนดีเอ็นเอ
ถูกตัดโดยใช้ชุดระบบการสกัดเจล™ gel-m
( ไบโอ 101 ;viogene , La Jolla , CA ) และโคลนเข้า pgem เวกเตอร์ -- ง่าย T
( promega ; Madison , WI ) เป็นสายพันธุ์ที่มีแทรกอยู่
นี้ใช้การย้อมสี Terminator Kit ( เพอร์กินเอลเมอร์รอบลำดับ
Foster City , CA ) และยื่นให้ระเบิดเพื่อเปรียบเทียบ
รู้จักลำดับสามารถเข้าถึงได้ใน ncbi database.kidney และลำไส้ถูกย้อมด้วยสี ntmt ( 100 mM NaCl
100 มม. โดย– HCl , pH 9.5 mg2cl 50 มม. และ 0 .1 % tween-20 )
ซึ่งตาม NBT / bcip staining สำหรับวัตถุประสงค์ของ
เปรียบเทียบทุกส่วนถูกย้อมด้วยสี NBT / bcip ทุกประการ
2 h
การแปล กรุณารอสักครู่..
