qPCR was performed on DNA extracts

qPCR was performed on DNA extracts of samples using iQmastermix (Biorad) , Syto-9 as the fluorophore at a finalconcentration of 10 mM and primers at a final concentration of400 nM each. For the qPCR 5 mL of template, 5 mL primer mix,containing 1.6 mM forward primer and 1.6 mM reverse primer and10 mL iQ mastermix containing Syto-9 were mixed into a sterile 96-wells plate using an automated liquid handler (BeckmaneCoulterBiomek 3000, Fullerton, CA, USA). All qPCR reactions were performedusing an initial denaturation at 94 C for 3 min, followed by45 cycles of amplification with each cycle consisting of denaturation(30 s at 94 C), annealing (30 s at 60 C), elongation (30 s at72 C) and a fluorescence measurement (5 s at 80 C, excitation at450e490 nm, emission at 515e530 nm). This was followed by afinal extension at 72 C for 5 min qPCR reactions were performedon an MJ Thermocycler PTC-200 with a Chromo 4 Detector (Biorad).For data analysis the software package MJ Opticon Monitor 3.1 wasused with a fixed threshold setting of 1.6.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

qPCR ได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับสารสกัดดีเอ็นเอของตัวอย่างโดยใช้ iQ
mastermix (Biorad) Syto-9 เป็นสารเรืองแสงที่สุดท้าย
ความเข้มข้น 10 มิลลิและไพรเมอร์ที่มีความเข้มข้นสุดท้ายของ
400 นาโนเมตรแต่ละ สำหรับ qPCR 5 มลแม่แบบ 5 ผสมรองพื้นมิลลิลิตร
ที่มี 1.6 mm ไปข้างหน้าและไพรเมอร์ 1.6 มิลลิไพรเมอร์กลับและ
10 มล iQ mastermix มี Syto-9 ถูกผสมเป็นหมัน 96
จานหลุมโดยใช้การจัดการของเหลวอัตโนมัติ (BeckmaneCoulter
Biomek 3000 , Fullerton, CA, USA) ทั้งหมดปฏิกิริยา qPCR ได้ดำเนินการ
โดยใช้ denaturation เริ่มต้นที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาทีตามด้วย
45 รอบของการขยายกับแต่ละรอบประกอบด้วย denaturation
(30 วินาทีที่ 94 C), อบอ่อน (30 วินาทีที่ 60 C) ยืด (30 วินาทีที่
72 C) และการวัดการเรืองแสง (5 s ที่ 80 C, การกระตุ้นที่
450e490 นาโนเมตรปล่อยก๊าซเรือนกระจกที่ 515e530 นาโนเมตร) นี้ตามมาด้วย
การขยายสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีปฏิกิริยา qPCR ได้ดำเนินการ
ใน MJ thermocycler PTC-200 กับ 4 ตรวจจับ Chromo (Biorad)
สำหรับการวิเคราะห์ข้อมูลแพคเกจซอฟต์แวร์ MJ Opticon จอภาพ 3.1 ถูก
นำมาใช้กับเกณฑ์การแก้ไขการตั้งค่า 1.6

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

qPCR ดำเนินการในสารสกัดดีเอ็นเอของตัวอย่างโดยใช้ iQ
mastermix (Biorad), Syto-9 เป็นแร่ฟลูออรีนที่สุดท้าย
ความเข้มข้นของ10มม. และตัวสุดท้ายที่ความเข้มข้นของ
๔๐๐ nM แต่ละครั้ง สำหรับ qPCR 5 mL ของแม่แบบ, ผสม5มิลลิลิตรไพรเมอร์,
ประกอบด้วย๑.๖มม. ไปข้างหน้าและ๑.๖มมไพรเมอร์ย้อนกลับและ
10 mL ไอคิวผสมที่ประกอบด้วย Syto-9 ถูกผสมเข้าไปในการฆ่าเชื้อ๙๖-
แผ่นบ่อโดยใช้ตัวจัดการของเหลวอัตโนมัติ (BeckmaneCoulter
๓๐๐๐, ฟูลเลอร์ตัน, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยา qPCR ทั้งหมดถูกดำเนินการ
ใช้ denaturation เริ่มต้นที่๙๔ C เป็นเวลา3นาทีตามด้วย
๔๕รอบของการขยายเสียงกับแต่ละรอบประกอบด้วย denaturation
(30 s ที่๙๔ C), การอบ (30 s ที่๖๐ C), การยืดตัว (30 วินาทีที่
๗๒ c) และการวัดสารเรืองแสง (5 s ที่๘๐ C, กระตุ้นที่
450e490 nm, การปล่อยก๊าซที่ 515e530 nm) นี่เป็นตามด้วย
ส่วนขยายสุดท้ายที่๗๒ C สำหรับการเกิดปฏิกิริยา qPCR 5 นาที
บน MJ Thermoไซโคลน Er PTC-๒๐๐ด้วยเครื่องตรวจจับแบบ Chromo 4 (Biorad)
สำหรับการวิเคราะห์ข้อมูลซอฟต์แวร์แพคเกจ MJ Opticon คอนจอมอนิเตอร์๓.๑คือ
ใช้กับการตั้งค่าเกณฑ์คงที่ของ๑.๖

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

qpcr ถูกใช้เพื่อแยกดีเอ็นเอของตัวอย่าง
เป็นกลุ่มเรืองแสงในรอบสุดท้าย
ความเข้มข้นของ 10-m และความเข้มข้นสุดท้ายคือ
นาโนต่อ 4000 สำหรับแม่แบบ QPCR 5 ML ส่วนผสมของ 5-ML ไพรเมอร์
ประกอบด้วย 1.6-m บวกและย้อนกลับสีรองพื้น 1.6 MM
10ml-iq มาสเตอร์ผสมกับ syto-9 เป็นหมัน 96-mix
การใช้ตัวประมวลผลของเหลวอัตโนมัติสำหรับแผ่นหลุม
ฟูลเลอร์ตันแคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา ปฏิกิริยา QPCR ทั้งหมดถูกดำเนินการ
การเปลี่ยนแปลงเริ่มต้นของอุณหภูมิใน 94 3 นาทีแล้ว
45 ขยายระยะเวลาแต่ละรอบรวมถึงการเปลี่ยนแปลง
อัตราการยืดตัวและอัตราการยืดตัวของ 60องศาเซลเซียส 30 วินาทีการอบอ่อน
เครื่องวัดค่าความเข้มแสงด้วยแสงฟลูออเรสเซนซ์
450e490 นาโนปล่อยความยาวคลื่น 515530 นาโน ต่อไป
ส่วนขยายสุดท้ายของ 5-minute QPCR ปฏิกิริยาภายใต้อุณหภูมิ 72
ใน PTC-200 MJ thermocycle กับโครเมียม 4 เครื่องตรวจจับ
แพคเกจซอฟต์แวร์สำหรับการวิเคราะห์ข้อมูล
ใช้กับการแก้ไขเกณฑ์การตั้งค่า 1.6