The supernatant obtained by centrif

The supernatant obtained by centrifugation of the culture broth at 12,000rpm for 20 min was used as the enzyme source. The purification of the phytase was sequentially performed by (NH4)2SO4 precipitation, DEAE-sepharose anion-exchange column chromatography and Sephadex G-100 size-exclusion column chromatography. The purification results are presented in Figure 1 and Table 1. After (NH4)2SO4 precipitation, 76% of the total protein was removed. The residual protein was subject to DEAE-sepharose anion-exchange column chromatography (Figure 1a), and the protein containing the activity of phytase was collected and pooled, giving 6% of the total protein. The protein was subject to further purification by Sephadex G-100 size-exclusion chromatography. Here, fractions 2–8 showed the highest phytase activity (Figure 1b). These fractions were collected and pooled, giving 1% of the total protein. The purification folds of phytase from the above three purification steps were 2, 10 and 44, respectively. Corresponding recovery rates of the total activity of phytase were 49, 6 and 5.7%, respectively (Table 1). The SDS-PAGE analysis of the protein samples from the above three purification steps is shown in Figure 1c. Only a single protein band with an estimated molecular weight of 43 kDa was present following the Sephadex G-100 size-exclusion chromatography step. This result indicates that the obtained phytase is electrophoretically pure and can be used for the analysis of enzymatic properties.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Supernatant ได้ โดยการหมุนเหวี่ยงของน้ำซุปวัฒนธรรมที่ 12,000 rpm สำหรับ 20 นาทีถูกใช้เป็นแหล่งของเอนไซม์ การทำให้บริสุทธิ์ของโอสเตบิลลำดับดำเนินการ โดยฝน (NH4) 2SO4, DEAE sepharose แลกเปลี่ยนไอออนคอลัมน์ chromatography และ chromatography Sephadex G-100 คอลัมน์ยกเว้นขนาด บริสุทธิ์ผลจะแสดงในรูปที่ 1 และตารางที่ 1 หลังจากฝน (NH4) 2SO4, 76% ของโปรตีนทั้งหมดถูกเอาออก โปรตีนตกค้างขึ้น DEAE sepharose แลกเปลี่ยนไอออนคอลัมน์ chromatography (รูปที่ 1a), และโปรตีนที่ประกอบด้วยกิจกรรมของโอสเตบิลถูกรวบรวม และ พู ให้ 6% ของโปรตีนทั้งหมด โปรตีนถูกต้องฟอกต่อโดย Sephadex G-100 chromatography ยกเว้นขนาด ที่นี่ เศษส่วน 2-8 แสดงให้เห็นว่ากิจกรรมโอสเตบิลสูงสุด (รูปที่ 1b) ประโยคเหล่านี้ถูกรวบรวม และ พู ให้ 1% ของโปรตีนทั้งหมด เท่าทำให้บริสุทธิ์ของโอสเตบิลจากขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สามข้างต้น 2, 10 และ 44 ตามลำดับ อัตราที่สอดคล้องกันของกิจกรรมทั้งหมดของโอสเตบิลถูก 49, 6 และ 5.7% ตามลำดับ (ตารางที่ 1) วิเคราะห์ SDS-หน้าตัวอย่างโปรตีนจากขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สามข้างต้นจะแสดงในรูปที่ 1 c เฉพาะโปรตีนเดี่ยววงดนตรีมีน้ำหนักโมเลกุลโดยประมาณของ 43 kDa ถูกนำเสนอตามขั้นตอนยกเว้นขนาด chromatography Sephadex G-100 ผลลัพธ์นี้บ่งชี้ว่า โอสเตบิลรับเพียว electrophoretically และสามารถใช้สำหรับการวิเคราะห์คุณสมบัติเอนไซม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สารละลายที่ได้จากการหมุนเหวี่ยงน้ำซุปวัฒนธรรมที่ 12,000rpm สำหรับ 20 นาทีถูกใช้เป็นแหล่งที่มาของเอนไซม์ บริสุทธิ์ของไฟเตสได้ดำเนินการตามลำดับโดย (NH4) 2SO4 ตกตะกอน, DEAE-Sepharose คอลัมน์ลบแลกเปลี่ยนและ Sephadex G-100 ขนาดยกเว้นคอลัมน์ ผลการทำให้บริสุทธิ์จะถูกนำเสนอในรูปที่ 1 และตารางที่ 1 หลังจากที่ (NH4) 2SO4 ฝน 76% ของโปรตีนทั้งหมดถูกลบออก โปรตีนที่เหลือเป็นเรื่องที่ DEAE-Sepharose คอลัมน์ไอออนแลกเปลี่ยน (รูปที่ 1a) และโปรตีนที่มีกิจกรรมของเอนไซม์ไฟเตสที่ถูกเก็บรวบรวมและรวบรวมให้ 6% ของโปรตีนทั้งหมด โปรตีนเป็นเรื่องที่บริสุทธิ์ต่อไปโดย Sephadex G-100 ขนาดยกเว้นโครมาโต นี่เศษส่วน 2-8 แสดงให้เห็นว่ากิจกรรม phytase สูงสุด (รูปที่ 1B) เศษส่วนเหล่านี้ถูกเก็บรวบรวมและสำรองให้ 1% ของโปรตีนทั้งหมด เท่าการทำให้บริสุทธิ์ของ phytase จากข้างต้นสามขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ 2, 10 และ 44 ตามลำดับ อัตราการฟื้นตัวที่สอดคล้องกันของกิจกรรมทั้งหมดของ phytase 49, 6 และ 5.7% ตามลำดับ (ตารางที่ 1) การวิเคราะห์ระบบ SDS-PAGE ของตัวอย่างโปรตีนจากข้างต้นสามขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์จะแสดงในรูปที่ 1C เพียงวงเดียวโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 43 กิโลดาลตันถูกนำเสนอต่อไปนี้ขนาดยกเว้นขั้นตอนโค Sephadex G-100 ผลที่ได้นี้แสดงให้เห็นว่าได้รับ phytase บริสุทธิ์ electrophoretically และสามารถนำมาใช้ในการวิเคราะห์คุณสมบัติของเอนไซม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และน่าน ได้ทำการสังเคราะห์วัฒนธรรมน้ำซุปที่ 12000rpm สำหรับ 20 นาทีที่ถูกใช้เป็นแหล่งของเอนไซม์ . การทำให้บริสุทธิ์ของเอนไซม์ไฟเตสได้พิจารณาดำเนินการโดย ( NH4 ) 2so4 ด้วย DEAE เกี่ยวข้องแลกเปลี่ยนแอนไอออนคอลัมน์โครมาโทกราฟีและ Sephadex G-100 ยกเว้นขนาดคอลัมน์โครมาโทกราฟี . ผลิตผลแสดงในรูปที่ 1 และตารางที่ 1 หลังจาก ( NH4 ) 2so4 ตกตะกอน 76% ของปริมาณโปรตีนทั้งหมดจะถูกลบออก โปรตีนที่เหลืออาจมีการแลกเปลี่ยนไอออน chromatography คอลัมน์ที่เกี่ยวข้องการทำ ( รูปที่ 1A ) และโปรตีนที่มีกิจกรรมของเอนไซม์ไฟเตสที่ถูกเก็บรวบรวมและรวมให้ 6 เปอร์เซ็นต์ของโปรตีนทั้งหมด โปรตีน คือวิชาที่จะผลิตต่อไปโดย Sephadex G-100 ขนาดยกเว้นโครมาโตกราฟี ที่นี่ , เศษส่วน 2 – 8 มีกิจกรรมเอนไซม์ไฟสูง ( รูปที่ 1A ) เศษส่วนเหล่านี้ถูกรวบรวมและรวมให้ 1 เปอร์เซ็นต์ของโปรตีนทั้งหมด การพับของเอนไซม์ไฟเตสจากข้างต้นสามขั้นตอนบำบัดน้ำเสีย จำนวน 2 , 10 และ 44 ตามลำดับ สอดคล้องกับอัตราการฟื้นตัวของกิจกรรมทั้งหมดของเอนไซม์ไฟเตสได้ 49 , 6 และ 5.7% ตามลำดับ ( ตารางที่ 1 ) การใช้เอนไซม์วิเคราะห์โปรตีนตัวอย่างจากข้างต้นสามบริสุทธิ์ขั้นตอนที่แสดงในรูปที่ 1c เดียวแถบโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 43 กิโลดาลตันเป็นปัจจุบันตาม Sephadex G-100 ขนาดยกเว้นวิธีขั้นตอน ผลที่ได้นี้แสดงว่าได้ใช้เป็น electrophoretically บริสุทธิ์และสามารถใช้ในการวิเคราะห์คุณสมบัติของเอนไซม์ .