3.2.1 Preparation of pollen samples

3.2.1 Preparation of pollen samples
The aim of preparation is to extract concentrated pollens and spores in the sediment by removing extraneous matter both mineral and organic matter from the samples. It has been known that there is no standard set of treatment to prepare palynological samples; a better understanding of the potential and limitation of different treatments and components of the residues can maximize productivity of palynomorph.
Though the recommended quantity of soil material for pollen extraction is small amount (19), the amount of soil and chemical treatments can be adapted suitably. After each step in chemical processes, centrifuging samples at 2500 r.p.m. for 3 minutes is preferred. For preparation processes, the consideration of safety is so much important because many dangerous chemicals are use in chemical processes such as HCl, HF and Conc. H2SO4. Steps of processes are followed the standard techniques of many authors (12, 19, 65, 66).

1. Removal of carbonate
- Adding 10 % HCl is used to test calcium carbonate. Then concentrated HCl should be slowly added to remove calcium carbonate in the samples. When effervescence stops, the samples must be washed with distilled water. After washing, the samples were centrifuged and decanted the liquid off the tube. The washing must be repeated 3 times.
- It is essential to remove all calcium carbonate at this stage, because the later addition of HF will result in the formation of insoluble calcium fluoride. Anyhow if there is no reaction, the process goes forward to the next step.


2. Removal of silicate minerals
- For HF treatment, it is required to do in a suitable fume cupboard. Adding
concentrated HF and leaving tubes overnight are necessary in order to dissolve any silicate minerals. At this step, it is no need to measure out a precise volume of HF.
- Then the residues were centrifuged, decanted and washed with distilled water repeatedly 3 times.

3. Removal of organic matter
- Generally the residues contain unwanted organic particles. So in this step, these unwanted organic particles should be oxidized by concentrated HNO3 for 10 minutes. This treatment gives a dark brown color of humic acid as a result.
- After HNO3 treatment, the residues were centrifuged, decanted and washed with distilled water for 3 times.

4. Removal of humic acid
- In order to remove humic acid, 5 % KOH was poured in sample tubes. Then samples tubes were placed in a hot water bath about 10 minutes. After that, it is required to wash samples with distilled water, centrifuge and decant for 3 times.
- It is necessary to avoid prolonged boiling as it may attack the exine of some species and make pollen grains swell. The darkness of the supernatant is used as a measure of the degree of humification of the sample. If the sample contains much of humic acid, it can give a very dark brown solution and it may be necessary to repeat the treatment carefully.

5. Screening
- After KOH treatment, it is a removal of coarse particles. The residues should be washed through a fine screen (136 microns) with a jet of distilled water.
- The suspension passing through the sieve should be collected in a polypropylene centrifuge tube, centrifuged and decanted.


6. Mounting
- As this step, samples were twice washed with absolute ethanol to dehydrate, then centrifuged and decanted.
- The minimum amount of tertiary butyl alcohol was dropped into centrifuge tube. Then the sample was transferred to a small vial. Silicone oil is used as a mounting media. After adding of silicone oil, it is required to leave an uncovered vial to allow evaporation of tertiary butyl alcohol for 2 days in a fume cupboard. After this, samples are readily reserved for slide preparation.
- Slides can be prepared by dropping the suspension onto a slide and covering with a cover slip.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.2.1 การจัดทำตัวอย่างเกสร
จุดมุ่งหมายของการเตรียมความพร้อมคือการสกัดเข้มข้นละอองเรณูและสปอร์ในดินตะกอนโดยการลบเรื่องภายนอกทั้งแร่ธาตุและสารอินทรีย์จากตัวอย่าง จะได้รับรู้กันว่าไม่มีการกำหนดมาตรฐานของการรักษาเพื่อเตรียมความพร้อมตัวอย่างเรณูวิทยา; ความเข้าใจที่ดีขึ้นของการที่มีศักยภาพและข้อ จำกัด ของการรักษาที่แตกต่างกันและส่วนประกอบของสารตกค้างสามารถเพิ่มผลผลิตของ palynomorph.
แม้ว่าปริมาณที่แนะนำของวัสดุดินสำหรับการสกัดเกสรเป็นจำนวนเงินขนาดเล็ก (19) ปริมาณของดินและสารเคมีที่สามารถนำไปปรับใช้ให้เหมาะสม . หลังจากขั้นตอนในกระบวนการทางเคมีแต่ละเหวี่ยงตัวอย่างที่ 2,500 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีเป็นที่ต้องการ สำหรับกระบวนการเตรียมการพิจารณาของความปลอดภัยเป็นสิ่งสำคัญมากเพราะสารเคมีอันตรายจำนวนมากการใช้งานในกระบวนการทางเคมีเช่น HCl, HF และ Conc H2SO4 ขั้นตอนของกระบวนการมีการปฏิบัติตามมาตรฐานเทคนิคของผู้เขียนหลายคน (12, 19, 65, 66). 1 กำจัดคาร์บอเนต- การเพิ่ม 10% HCl ใช้ในการทดสอบแคลเซียมคาร์บอเนต จากนั้นเข้มข้น HCl ควรจะเพิ่มช้าที่จะเอาแคลเซียมคาร์บอเนตในตัวอย่าง เมื่อหยุดฟองตัวอย่างจะต้องล้างด้วยน้ำกลั่น หลังจากล้างตัวอย่างปั่นและ decanted ของเหลวออกจากหลอด ซักผ้าจะต้องทำซ้ำ 3 ครั้ง. - มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะลบแคลเซียมคาร์บอเนตทั้งหมดในขั้นตอนนี้เพราะนอกจากภายหลัง HF จะมีผลในการก่อตัวของฟลูออไรแคลเซียมที่ไม่ละลายน้ำ ทั้งนี้หากมีการเกิดปฏิกิริยาไม่มีการดำเนินการไปข้างหน้าเพื่อขั้นตอนต่อไป. 2 การกำจัดของแร่ธาตุซิลิเกต- สำหรับการรักษา HF ก็จะต้องทำในตู้ควันที่เหมาะสม การเพิ่มความเข้มข้น HF และออกจากท่อในชั่วข้ามคืนมีความจำเป็นในการที่จะละลายเกลือแร่ซิลิเกตใด ๆ ในขั้นตอนนี้ก็ไม่จำเป็นต้องวัดออกปริมาณที่แม่นยำของ HF. - จากนั้นตกค้างถูกปั่น, decanted และล้างด้วยน้ำกลั่นซ้ำแล้วซ้ำอีก 3 ครั้ง. 3 การกำจัดสารอินทรีย์- โดยทั่วไปสารตกค้างมีอนุภาคอินทรีย์ที่ไม่พึงประสงค์ ดังนั้นในขั้นตอนนี้อนุภาคอินทรีย์ที่ไม่พึงประสงค์เหล่านี้ควรได้รับการออกซิไดซ์โดย HNO3 เข้มข้นเป็นเวลา 10 นาที การรักษานี้จะช่วยให้สีน้ำตาลเข้มของกรดฮิวมิกเป็นผล. - หลังจากการรักษา HNO3 ตกค้างถูกปั่น, decanted และล้างด้วยน้ำกลั่น 3 ครั้ง. 4 การกำจัดของกรดฮิวมิก- เพื่อที่จะเอากรดฮิวมิก, 5% KOH ถูกเทในหลอดตัวอย่าง แล้วหลอดตัวอย่างถูกวางไว้ในอ่างน้ำร้อนประมาณ 10 นาที หลังจากนั้นก็จะต้องล้างตัวอย่างด้วยน้ำกลั่น, การหมุนเหวี่ยงและค่อยๆริน 3 ครั้ง. - มันเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อหลีกเลี่ยงการเดือดเป็นเวลานานในขณะที่มันอาจโจมตี exine บางชนิดและทำให้เกสรบวมธัญพืช ความมืดของสารละลายที่ใช้เป็นตัวชี้วัดระดับของการเกิดฮิวมัสของกลุ่มตัวอย่าง หากมีตัวอย่างมากของกรดฮิวมิกก็สามารถให้การแก้ปัญหาสีน้ำตาลเข้มมากและมันอาจมีความจำเป็นที่จะทำซ้ำการรักษาอย่างระมัดระวัง. 5 การคัดกรอง- หลังจากการรักษาเกาะก็คือการกำจัดของอนุภาคหยาบ ตกค้างควรล้างผ่านหน้าจอที่ดี (136 ไมครอน) กับเจ็ทของน้ำกลั่น. - การระงับผ่านตะแกรงควรจะเก็บในหลอด centrifuge โพรพิลีน, ปั่นและ decanted. 6 การติดตั้ง- ในฐานะที่เป็นขั้นตอนนี้กลุ่มตัวอย่างถูกล้างครั้งที่สองกับเอทานอลที่แน่นอนที่จะเอาน้ำออกแล้วหมุนเหวี่ยงและ decanted. - จำนวนเงินขั้นต่ำของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ในระดับอุดมศึกษาบิวทิลถูกทิ้งลงในหลอดหมุนเหวี่ยง จากนั้นกลุ่มตัวอย่างที่ถูกย้ายไปอยู่ในขวดขนาดเล็ก น้ำมันซิลิโคนที่ใช้เป็นสื่อการติดตั้ง หลังจากที่เพิ่มของน้ำมันซิลิโคนก็จะต้องออกจากขวดที่จะอนุญาตให้เปิดการระเหยของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ในระดับอุดมศึกษาบิวทิลเป็นเวลา 2 วันในตู้ควัน หลังจากนี้กลุ่มตัวอย่างจะถูกสงวนไว้พร้อมสำหรับการเตรียมสไลด์. - ภาพนิ่งสามารถเตรียมระงับโดยวางลงบนภาพนิ่งและครอบคลุมกับใบปก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดำเนินงานและเตรียมตัวอย่างเกสร
จุดมุ่งหมายของการเตรียมการเพื่อสกัดเข้มข้นละอองเรณูและสปอร์ในดินตะกอนโดยการเอาเรื่องภายนอกทั้งแร่ธาตุและสารอินทรีย์จากตัวอย่าง เป็นที่รู้กันว่าไม่มีชุดมาตรฐานของการรักษาเพื่อเตรียมกลุ่มตัวอย่าง palynological ;ความเข้าใจในศักยภาพและข้อจำกัดของการรักษาที่แตกต่างกันและส่วนประกอบของสารพิษตกค้าง สามารถเพิ่มผลผลิตของ palynomorph .
แต่แนะนำปริมาณของดินวัสดุเพื่อสกัดเกสรเล็กน้อย ( 19 ) , ปริมาณของดินและสารเคมีสามารถดัดแปลงอย่างเหมาะสม หลังจากแต่ละขั้นตอนในกระบวนการทางเคมี สารตัวอย่างที่ 2 , 500 r.p.m.3 นาทีดีกว่า สำหรับกระบวนการในการเตรียมการพิจารณาความปลอดภัยเป็นสำคัญมากเพราะสารเคมีอันตรายมากจะใช้ในกระบวนการทางเคมี เช่น กรด HCl เข้มข้น , . กรดซัลฟิวริก . ขั้นตอนของกระบวนการตามเทคนิคมาตรฐานของผู้เขียนหลายคน ( 12 , 19 , 65 , 66 ) .

1 . การกำจัดของคาร์บอเนต
- เพิ่ม 10 % HCL เพื่อใช้ทดสอบแคลเซียมคาร์บอเนตแล้วเข้มข้น HCl ควรเพิ่มช้าๆเอา แคลเซียม คาร์บอเนต ในตัวอย่างที่ เมื่อฟองหยุด ตัวอย่าง ต้องล้างด้วยน้ำกลั่น หลังจากอาบน้ำเสร็จ จำนวนและระดับรินของเหลวจากหลอด เครื่องซักผ้าต้องซ้ำครั้งที่ 3 .
- สรุปเอา แคลเซียม คาร์บอเนต ในขั้นตอนนี้เพราะนอกจากหลังของ HF จะส่งผลในการจัดตั้งไม่ละลาย แคลเซียม ฟลูออไรด์ ยังไงถ้าไม่มีปฏิกิริยา , กระบวนการไปข้างหน้าไปยังขั้นตอนถัดไป


2 การกำจัดของแร่ซิลิเกต
- HF รักษา จะต้องทำในตู้ควันที่เหมาะสม การเพิ่มความเข้มข้นกรดออกจากท่อ
ค้างคืนที่จำเป็นใด ๆเพื่อละลายแร่ซิลิเกตเป็น ในขั้นตอนนี้มันไม่ต้องตวงปริมาณที่แม่นยำของ HF .
- แล้วตกค้างอยู่ที่ระดับริน , และล้างด้วยน้ำกลั่นซ้ำ 3 ครั้ง

3 การกำจัดสารอินทรีย์ตกค้าง
- โดยทั่วไปประกอบด้วยอนุภาคอินทรีย์ที่ไม่พึงประสงค์ ดังนั้นในขั้นตอนนี้ที่ไม่พึงประสงค์เหล่านี้อินทรีย์อนุภาคควรถูกออกซิไดซ์โดยกรดดินประสิวเข้มข้นเป็นเวลา 10 นาทีการรักษานี้จะช่วยให้มีสีน้ำตาลเข้มของกรดฮิวมิคผล .
- กรดดินประสิวรักษา ตกค้างอยู่ที่ระดับริน , และล้างด้วยน้ำกลั่น 3 ครั้ง

4 . การกำจัดกรดฮิวมิก
- เพื่อขจัดกรดฮิวมิก , 5% เกาะเทตัวอย่างหลอด จากนั้นใช้ท่ออยู่ในน้ำร้อนประมาณ 10 นาที หลังจากนั้นมันต้องล้างด้วยน้ำกลั่นและตัวอย่าง , เครื่องปั่นเหวี่ยงริน 3 ครั้ง .
- มันเป็นสิ่งที่จำเป็นเพื่อหลีกเลี่ยงนานเดือดมันอาจโจมตี exine ของบางชนิดและทำให้ละอองเรณูบวม ความมืดของน่านคือ ใช้เป็นตัวชี้วัดระดับของฮิวมิฟิเกชั่นของตัวอย่าง ถ้าตัวอย่างมีมากของกรดฮิวมิก ,มันสามารถให้มืดมาก สีน้ำตาล โซลูชัน และอาจจะต้องมีการทำซ้ำการรักษาให้ดีนะ

5 การตรวจคัดกรอง
- หลังเกาะ การรักษา , มันคือการกำจัดของอนุภาคหยาบ และควรล้างผ่านจอก็ได้ ( 136 ไมครอน ) กับเจ็ทของน้ำกลั่น
- ช่วงล่างผ่านตะแกรงที่ควรเก็บในพอลิโพรพิลีนและ centrifuge หลอดไฟฟ้าริน

.6 . ติดตั้ง
- เป็นขั้นตอนนี้ จำนวน 2 ครั้ง ล้างด้วยแอลกอฮอล์สัมบูรณ์ dehydrate แล้วระดับ และริน .
- จำนวนเงินขั้นต่ำของบิวทิลตติยภูมิ คือ แอลกอฮอล์ลดลงในหลอด centrifuge . แล้วตัวอย่างที่ถูกย้ายไปเป็นขวดเล็ก ๆ น้ำมันซิลิโคนที่ใช้ยึดสื่อ หลังจากการเพิ่มน้ำมันซิลิโคนมันเป็นสิ่งจำเป็นที่จะออกจากการเปิดขวดให้ การระเหยของแอลกอฮอล์บิวทิลตติยภูมิ 2 วันในตู้ตู้ หลังนี้ ตัวอย่างมีพร้อมไว้สำหรับการเตรียมสไลด์ .
- ภาพนิ่งสามารถเตรียมได้โดยวางแขนลงบนสไลด์ และคลุมด้วยฝาหลุด