R. opacus strain PD630 (Alvarez et

R. opacus strain PD630 (Alvarez et al., 1996; DSM 44193) and the atf1 mutant derived from it were grown aerobically at 30 °C in Luria–Bertani (LB) medium (Sambrook et al., 1989) or in mineral salt medium (MSM) according to Schlegel et al. (1961) with 1 g NH4Cl l−1 and 1 g sodium gluconate l−1 or 0.1 % (v/v) oleic acid as carbon source. These conditions are referred to as growth conditions. To promote accumulation of TAGs, NH4Cl in MSM was reduced to 0.1 g l−1 (storage conditions). E. coli strains were cultivated in LB medium at 37 °C. E. coli strains XL1 Blue (Bullock et al., 1987) and S17-1 (Simon et al., 1983) were used for cloning and for conjugational transfer of plasmids to R. opacus, respectively. Solid media were prepared by addition of 1.8 % (w/v) agar-agar. Sucrose sensitivity of R. opacus mediated by the sacB gene was tested on LB agar supplemented with 10 % (w/v) sucrose (LBS). Ampicillin, kanamycin and gentamicin were used at final concentrations of 75, 50 or 15 μg ml−1, respectively, for recombinant E. coli strains. For Rhodococcus strains, kanamycin and gentamicin were used at final concentrations of 75 μg ml−1 or 15 μg ml−1, respectively. Plasmids used in this study were pBluescript SK− (Stratagene), pGEMT-Easy (Promega), pJQ200mp18 (Quandt & Hynes, 1993), pHC79 (Hohn & Collins, 1980) and pSKsy ΩKm (Overhage et al., 1999).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PD630 สายพันธุ์ R. opacus (Alvarez et al., 1996 DSM 44193) และ mutant atf1 มามันได้เติบโตที่ 30 ° C ใน Luria – Bertani (ปอนด์) (Sambrook et al., 1989) หรือแร่เกลือปานกลาง (MSM) ตาม Schlegel et al. (1961) aerobically l−1 1 g NH4Cl และ l−1 gluconate โซเดียม 1 กรัม หรือ 0.1% (v/v) oleic กรดเป็นแหล่งคาร์บอน เงื่อนไขเหล่านี้จะอ้างอิงถึงเป็นสภาพการเจริญเติบโต เพื่อส่งเสริมการสะสมของแท็ก NH4Cl ใน MSM ได้ลดลงเป็น l−1 0.1 g (สภาพการจัดเก็บ) E. coli สายพันธุ์ที่ปลูกในกลางปอนด์ที่ 37 องศาเซลเซียส E. coli สายพันธุ์ XL1 บลู (Bullock et al., 1987) และ S17-1 (Simon และ al., 1983) ใช้โคลน และ สำหรับการโอนย้าย conjugational plasmids การอาร์ opacus ตามลำดับ สื่อที่เป็นของแข็งถูกเตรียม โดยเพิ่ม agar-agar 1.8% (w/v) ซูโครสความไวของ R. opacus mediated โดยยีน sacB ถูกทดสอบใน agar ปอนด์เสริม ด้วยซูโครส 10% (w/v) (ปอนด์) แอมพิซิลลิน กานามัยซิน และ gentamicin ถูกใช้ในความเข้มข้นสุดท้าย 75, 50 หรือ 15 μg ml−1 ตามลำดับ สำหรับ recombinant E. coli สายพันธุ์ สายพันธุ์ Rhodococcus กานามัยซินและ gentamicin ถูกใช้ในความเข้มข้นสุดท้ายของ 75 μg ml−1 15 μg ml−1 ตามลำดับ Plasmids ที่ใช้ในการศึกษานี้ได้ pBluescript SK− (Stratagene), pGEMT-ง่าย (Promega), pJQ200mp18 (Quandt & Hynes, 1993), pHC79 (Hohn และคอลลินส์ 1980) และ pSKsy ΩKm (Overhage et al., 1999)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อาร์ opacus ความเครียด PD630 (Alvarez et al, 1996;. DSM 44193) และกลายพันธุ์ atf1 มาจากมันมีปลูก aerobically ที่ 30 ° C ใน Luria-Bertani (LB) ขนาดกลางหรือเกลือแร่ (Sambrook et al, 1989.) กลาง (MSM) ตาม Schlegel และคณะ (1961) กับ 1 กรัม NH4Cl L-1 และ 1 กรัมโซเดียมกลูโคเนต L-1 หรือ 0.1% (v / v) กรดโอเลอิกเป็นแหล่งคาร์บอน เงื่อนไขเหล่านี้จะเรียกว่าสภาวะการเจริญเติบโต เพื่อส่งเสริมการสะสมของแท็ก NH4Cl ในกลุ่มชายรักชายก็จะลดลง 0.1 GL-1 (สภาพการเก็บรักษา) E. coli สายพันธุ์ได้รับการปลูกฝังในสื่อ LB ที่ 37 ° coli สายพันธุ์ CE XL1 สีฟ้า (วัว et al., 1987) และ S17-1 (ไซมอน et al., 1983) ถูกนำมาใช้สำหรับการโคลนและสำหรับการถ่ายโอน conjugational ของพลาสมิดที่อาร์ opacus ตามลำดับ สื่อที่เป็นของแข็งได้จัดทำขึ้นโดยนอกเหนือจาก 1.8% (w / v) วุ้น ความไวของซูโครสอา opacus ไกล่เกลี่ยโดยยีน sacB รับการทดสอบบนอาหารเลี้ยงเชื้อ LB เสริมด้วย 10% (w / v) ซูโครส (LBS) ampicillin, KANAMYCIN GENTAMICIN และถูกนำมาใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 75, 50 หรือ 15 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1 ตามลำดับสำหรับ recombinant E. coli สายพันธุ์ สำหรับสายพันธุ์ Rhodococcus, KANAMYCIN GENTAMICIN และถูกนำมาใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 75 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1 หรือ 15 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร-1 ตามลำดับ พลาสมิดที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้มี pBluescript SK- (Stratagene) pGEMT-ง่าย (Promega) pJQ200mp18 (Quandt และ Hynes, 1993), pHC79 (Hohn & คอลลิน, 1980) และ pSKsy ΩKm (Overhage et al., 1999)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์โอเพคัสสายพันธุ์ pd630 ( อัลวาเรซ et al . , 1996 ; DSM 1 ) และ atf1 กลายพันธุ์มาจากมันถูกปลูก aerobically 30  ° C ในลุเรีย–แบร์ตานิ ( LB ) ขนาดกลาง ( sambrook et al . , 1989 ) หรือปานกลาง เกลือแร่ ( MSM ) ตามชเลเกล et al . ( 1961 ) กับ 1  กรัม 4 . L − 1 และ 1  กรัมโซเดียมกลูโคเนต L − 1  หรือ 0.1 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดโอเลอิกเป็นแหล่งคาร์บอน เงื่อนไขเหล่านี้จะเรียกว่าเป็นภาวะการเจริญเติบโต4 . เพื่อส่งเสริมการสะสมของแท็กใน MSM ลดลง 0.1  กรัม  L − 1 ( สภาพกระเป๋า ) E . coli สายพันธุ์ปลูกในปอนด์ขนาดกลางที่ 37  ° C . E . coli สายพันธุ์ xl1 สีฟ้า ( วัว et al . , 1987 ) และ s17-1 ( ไซมอน et al . , 1983 ) ใช้สำหรับการโคลนและการโอน conjugational ของพลาสมิด อาร์โอเพคัส ตามลำดับ สื่อที่เป็นของแข็ง เตรียมเพิ่ม 1.8   % ( w / v ) วุ้นวุ้นใช้ความไวของอาร์โอเพคัส ) โดย sacb ยีนทดสอบ lb agar ที่เติม 10   % ( w / v ) ซูโครส ( ปอนด์ ) แอมพิ kanamycin ยา , และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 75 , 50 หรือ 15  μกรัม − 1 มิลลิลิตร ตามลำดับ สำหรับเซลล์ E . coli สายพันธุ์ สำหรับสายพันธุ์ rhodococcus kanamycin ยา , และใช้ที่ความเข้มข้นสุดท้าย 75  μกรัม  ml − 1 หรือ 15  μกรัม  ml − 1ตามลำดับ เพื่อใช้ในการศึกษา คือ SK ) − ( stratagene ) pgemt ง่าย ( promega ) pjq200mp18 ( ควอนด์ต&ไฮน์ส , 1993 ) phc79 ( hohn & คอลลินส์ , 1980 ) และ psksy  Ω km ( overhage et al . , 1999 )