spiked with 100 ll of the standard

spiked with 100 ll of the standard mixture (IQ – 21.0, IQx – 21.6,
MeIQ – 25.2, MeIQx – 14.7, 7,8-DiMeIQx – 11.8, 4,8-DiMeIQx –
12.0, Glu-P-2 – 8.4, Glu-P-1 – 8.2, norharman – 5.4, harman – 4.0,
Trp-P-2 – 8.4, PhIP – 24.5, Trp-P-1 – 8.4, AaC – 6.2, and MeAaC –
6.1 ng/100 ll). HAAs were extracted from patties by multiple solid
phase extraction. The HAAs were eluted with an ethyl acetate solution
containing 5% toluene (100 ml) and adsorbed onto a coupled
preconditioned cation exchanger PRS cartridge which had been previously
preconditioned with a mixture of ethyl acetate and 5% of toluene.
After the PRS cartridge had been dried and washed with
hydrochloric acid (0.01 M HCl), the non-polar HAAs were eluted
with a mixture of 15 ml solution of 0.01 M hydrochloric acid and
methanol (2:3, v/v). In order to clean up the non-polar fraction, it
was adsorbed onto a C18 cartridge (500 mg); after a cleaning step
with ultrapure water and drying, the non-polar HAAs were eluted
with a 1.2 ml mixture of methanol and ammonia (25%) (90:10,
v/v) into a vial. After drying, the eluate was redissolved in 100 ll
caffeine solutions (internal standard). The polar HAAs were eluted
from the PRS cartridges with ammonia acetate (20 ml 0.5 mol/l,
pH 8.5) and adsorbed onto a coupled C18 cartridge, which had been
previously conditioned with methanol, for clean-up. After washing
with ultrapure water (2 ml) and drying, the polar HAAs were eluted
with a 0.8 ml ammonia (25%) methanol mixture (10:90, v/v), dried
under nitrogen and redissolved in a 100 ll caffeine solution (internal
standard). The flow rate was 1 ml/min. The mobile phase contained
10 mmol/l triethylamine with phosphoric acid adjusted to
pH 3.2 as eluent A, 10 mmol/l triethylamine adjusted to pH 3.6 as
eluent B, and acetonitrile as eluent C. The HAAs were separated with
a gradient programme at 25 C: 82–75% A, 10% B and 8–15% C from 0
to 10 min; 85–75% B and 15–25% C from 10 to 20 min; 0% A, 75–55%
B and 25–45% C from 20 to 29 min; 0–82% A, 55–10% B, 45–8% C
from 29 to 33 min; and 82–15% A, 10% B, 8–75% C from 33 to
35 min. The mobile phase with 75% C for 4 min was used for regeneration
of the HPLC column. After regeneration, the HPLC system
was set back to the original starting conditions, and equilibrated
for 10 min. UV detection was carried out at 258 nm and a 3D field
was used for spectra plots at 200–360 nm. The setting of the fluorescence
detector (ex/em) was at 0 min (360/450 nm), 14 min (300/
440 nm), 22 min (265/410 nm), 24 min (305/390 nm), 25.5 min
(265/410 nm), and 28 min (335/410 nm). The peaks of the HAAs,
norharman and Harman, were identified by comparing their retention
times and UV spectra with those of the corresponding standards.
Quantification was performed with an external calibration
(norharman, harman) or single point standard addition (MeIQx,
PhIP) (two samples and two with standard spiked samples).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

spiked 100 จะผสมมาตรฐาน (IQ-21.0, IQx – 21.6MeIQ-25.2, 14.7, 7,8-DiMeIQx-11.8, 4.8-DiMeIQx--MeIQx12.0, Glu-P-2 – 8.4, Glu-P-1 – 8.2, norharman – 5.4, harman – 4.0Trp-P-2 – 8.4, PhIP – 24.5, Trp-P-1 – 8.4, AaC – 6.2 และ MeAaC-100 ขนาด 6.1 ng จะ) ทางที่แยกจาก patties โดยของแข็งหลายขั้นตอนการสกัด ทางถูก eluted กับโซลูชันการเอทิล acetateประกอบด้วยโทลูอีน 5% (100 ml) และ adsorbed ลงควบคู่การตลับหมึกพีอาร์เอสแลกเปลี่ยน preconditioned cation ซึ่งก่อนหน้านี้preconditioned มีส่วนผสมของเอทิล acetate และ 5% ของโทลูอีนหลังจากพีอาร์เอสตลับหมึกแล้วแห้ง และล้างด้วยกรดไฮโดรคลอริก (0.01 M HCl), ทางโพลาร์ไม่ได้ elutedด้วยโซลูชั่น 15 ml ของกรดไฮโดรคลอริก 0.01 M และเมทานอล (2:3, v/v) เพื่อล้างเศษไม่ใช่ขั้วโลก มันมี adsorbed บนตลับ C18 (500 มิลลิกรัม); หลังจากขั้นตอนทำความสะอาดน้ำ ultrapure และแห้ง ทางโพลาร์ไม่ได้ elutedด้วยส่วนผสมของเมทานอลและแอมโมเนีย (25%) 1.2 ml (90:10v/v) เป็นคอนแทค หลังจากแห้ง eluate ถูก redissolved ใน 100 llคาเฟอีนโซลูชั่น (ภายในมาตรฐาน) ทางขั้วโลกได้ elutedจากตลับพีอาร์เอสกับแอมโมเนีย acetate (20 ml 0.5 โมล/ลิตรpH 8.5) และ adsorbed บน coupled ตลับหมึก C18 ซึ่งได้รับก่อนหน้านี้ ปรับอากาศ ด้วยเมธานอ สำหรับทำความสะอาด หลังจากซักผ้ามี eluted ทางโพลาร์น้ำ ultrapure (2 ml) และแห้งด้วย 0.8 ml แอมโมเนีย (25%) เมทานอล (10:90, v/v), อบแห้งภายใต้ไนโตรเจน และ redissolved ใน 100 จะคาเฟอีนโซลูชัน (ภายในมาตรฐาน) อัตราการไหล 1 ml/min ระยะเคลื่อนที่อยู่ปรับปรุง 10 mmol/l triethylamine กับกรดฟอสฟอริกpH 3.2 เป็น eluent A, 10 mmol/l triethylamine ปรับ pH 3.6 เป็นeluent B และ acetonitrile เป็น eluent C. ทางถูกแยกด้วยไล่โปรแกรมที่ 25 c: 82 – 75% A, 10% B และ C 8-15% 0ไป 10 นาที 85 – 75% B และ C 15-25% จาก 10 ไป 20 นาที 0% A, 75-55%B และ C 25-45% จาก 20 ถึง 29 นาที 0-82% A, 55 – 10% B, 45 – 8% Cจาก 29 ไป 33 นาที และ% 82-15 A, 10% B, C 8 – 75% จาก 33 ไป35 นาที ระยะเคลื่อน 75% C ใน 4 นาทีใช้สำหรับฟื้นฟูของคอลัมน์ HPLC หลังจากฟื้นฟู ระบบ HPLCถูกตั้งค่ากลับไปเดิมเงื่อนไขเริ่มต้น และ equilibratedสำหรับ 10 นาที UV ตรวจถูกดำเนินการที่ 258 nm และเขตข้อมูล 3Dใช้สำหรับแรมสเป็คตราผืนที่ 200-360 nm การตั้งค่าของการ fluorescenceเครื่องตรวจจับ (อดีต / em) 0 นาที (360/450 nm), 14 นาที (300 /440 nm), นาที 22 (265/410 nm), 24 min (305/390 nm), 25.5 min(265/410 nm), และ นาทีที่ 28 (335/410 nm) แห่งทางnorharman และ Harman ระบุ โดยการเปรียบเทียบการรักษาเวลาและแรมสเป็คตรา UV กับมาตรฐานที่เกี่ยวข้องทำการนับ ด้วยการปรับเทียบภายนอก(norharman, harman) หรือจุดเดียวมาตรฐานนี้ (MeIQxPhIP) (ตัวอย่างที่สองและสองกับตัวอย่างมาตรฐานที่ถูกแทง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ถูกแทงด้วย 100 LL ของส่วนผสมมาตรฐาน (IQ - 21.0, IQx - 21.6,
MeIQ - 25.2, MeIQx - 14.7, 7,8-DiMeIQx - 11.8, 4,8-DiMeIQx -
12.0 Glu-P-2 - 8.4 Glu -P-1 - 8.2 norharman - 5.4, harman - 4.0
Trp-P-2 - 8.4 PhIP - 24.5, Trp-P-1-8.4, AAC - 6.2 และ MeAaC -
6.1 ng / 100 LL)
ฮาสที่ถูกดึงออกมาจากไส้โดยของแข็งหลายสกัดสารในเฟส ฮาสที่ถูกชะด้วยโซลูชั่นเอทิลอะซิเตมีโทลูอีน 5% (100 มล.) และดูดซับบนควบคู่ preconditioned แลกเปลี่ยนไอออนบวกตลับ PRS ซึ่งเคยถูกpreconditioned ที่มีส่วนผสมของน้ำนมและ 5% ของโทลูอีนได้. หลังจากตลับพีอาร์เอที่ได้รับล้างแห้งและมีกรดไฮโดรคลอริก (HCl 0.01 M) ที่ไม่มีขั้วฮาสที่ถูกชะที่มีส่วนผสมของ15 มลแก้ปัญหาของ 0.01 M กรดไฮโดรคลอและเมทานอล(2: 3, v / v) เพื่อที่จะทำความสะอาดส่วนที่ไม่มีขั้วก็ถูกดูดซับบนตลับ C18 (500 mg); หลังจากขั้นตอนการทำความสะอาดด้วยน้ำบริสุทธิ์และการอบแห้งที่ไม่มีขั้วฮาสที่ถูกชะด้วย1.2 มล. ส่วนผสมของเมทานอลและแอมโมเนีย (25%) (90:10, v / v) ลงในขวด หลังจากการอบแห้ง eluate ถูก redissolved 100 LL โซลูชั่นคาเฟอีน (มาตรฐานภายใน) ขั้วฮาสที่ถูกชะออกจากตลับหมึก PRS กับอะซิเตตแอมโมเนีย (20 มล. 0.5 โมล / ลิตรค่าpH 8.5) และการดูดซับลงบนตลับ C18 คู่ซึ่งได้รับการปรับอากาศก่อนหน้านี้กับเมทานอลสำหรับการทำความสะอาดขึ้น หลังจากล้างด้วยน้ำบริสุทธิ์ (2 มล.) และการอบแห้งที่ขั้วโลกฮาสที่ถูกชะด้วย0.8 มล. แอมโมเนีย (25%) ผสมเมทานอล (10:90, v / v) แห้งภายใต้ไนโตรเจนและredissolved ในการแก้ปัญหาคาเฟอีน 100 LL ( ภายในมาตรฐาน) อัตราการไหล 1 มล. / นาที ในช่วงที่มีโทรศัพท์มือถือ10 มิลลิโมล / ลิตร triethylamine กับกรดฟอสฟปรับให้ค่าpH 3.2 เป็นตัวชะ A, 10 มิลลิโมล / ลิตร triethylamine ปรับค่าพีเอช 3.6 เป็นตัวชะB และ acetonitrile เป็นชะฮาสซีถูกคั่นด้วยโปรแกรมการไล่ระดับสีที่25? C: 82-75% A, B 10% และ 8-15% C 0 จากที่จะ10 นาที; 85-75% และ 15-25 B% C 10-20 นาที; 0% A, 75-55% B และ C 25-45% 20-29 นาที; 0-82% A, B 55-10%, 45-8% C 29-33 นาที; และ A 82-15%, 10% B, C 8-75% ที่จะ 33 จาก35 นาที เฟสเคลื่อนที่ด้วย C 75% เป็นเวลา 4 นาทีที่ใช้สำหรับการฟื้นฟูของคอลัมน์HPLC หลังจากที่การฟื้นฟูระบบ HPLC ได้รับการตั้งค่ากลับไปเริ่มต้นสภาพเดิมและ equilibrated เป็นเวลา 10 นาที การตรวจจับรังสียูวีได้ดำเนินการที่ 258 นาโนเมตรและสนาม 3 มิติที่ใช้สำหรับการแปลงเปคตรัมที่200-360 นาโนเมตร การตั้งค่าของการเรืองแสงตรวจจับ (อดีต / em) อยู่ที่ 0 นาที (360/450 นาโนเมตร) 14 นาที (300/440 นาโนเมตร) 22 นาที (265/410 นาโนเมตร) 24 นาที (305/390 นาโนเมตร) 25.5 นาที(265/410 นาโนเมตร) และ 28 นาที (335/410 นาโนเมตร) ยอดของฮาสnorharman และ Harman, ถูกระบุโดยการเปรียบเทียบของพวกเขาเก็บรักษาครั้งและยูวีสเปกตรัมกับบรรดาของที่สอดคล้องมาตรฐาน. ปริมาณได้ดำเนินการกับภายนอกสอบเทียบ(norharman, harman) หรือจุดเดียวมาตรฐานนอกจากนี้ (MeIQx, PhIP) ( สองตัวอย่างและสองกับกลุ่มตัวอย่างถูกแทงมาตรฐาน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ถูกแทงด้วย 100 จะผสมมาตรฐาน ( IQ ) 21.0 , iqx ละ
meiq –– , 25.2 meiqx – 14.7 , 7,8-dimeiqx – 11.8 4,8-dimeiqx
12.0 , – , - glu-p-2 5.6 glu-p-1 – 8.2 , norharman – 5.4 , Harman – 4.0
trp-p-2 – 5.6 phip – 24.5 trp-p-1 – 5.6 , AAC ( 6.2 และ meaac –
6.1 กรัม / 100 จะ ) ฮาสสกัดจาก patties โดยการสกัดแยกด้วยเฟสของแข็ง
หลายมีตัวอย่างที่ฮาสด้วยเอทิลอะซิเตท โซลูชั่น
ที่มี 5% โทลูอีน ( 100 มล. ) และการดูดซับเป็นคู่
preconditioned แลกเปลี่ยนไอออนบวกตลับ PRS ที่ได้รับก่อนหน้านี้
preconditioned ที่มีส่วนผสมของเอทิลอะซีเตทและ 5% ของโทลูอีน .
หลังจาก PRS ตลับหมึกได้รับแห้งและล้างด้วยกรดไฮโดรคลอริก ( 0.01 M
กรดเกลือ ) , อลิ Haas มีตัวอย่าง
ด้วยส่วนผสมของสารละลาย 0.01 M กรดไฮโดรคลอริก 15 มล. และเมทานอล (
: V / V ) เพื่อทำความสะอาดส่วนที่ไม่มีขั้ว มัน
ดูดซับบน c18 ตลับ ( 500 มิลลิกรัม ) ; หลังจากทำความสะอาดขั้นตอน
กับบริสุทธิ์มากน้ำและแห้ง ไม่มีขั้ว Haas มีตัวอย่าง
กับ 1.2 mL ผสมเมทานอลและแอมโมเนีย ( 25 % ) ( รูป
v / v ) ลงในขวด . หลังจากการอบแห้ง , การลบที่เกี่ยวข้องคือ redissolved 100 ll
คาเฟอีนโซลูชั่นมาตรฐาน ( ภายใน ) ที่ฮาสขั้วโลกมีตัวอย่าง
จาก PRS ตลับกับแอมโมเนียอะซิเตท ( 20 ml 0.5 mol / L ,
pH 8.5 ) และดูดซับลงบนตลับคู่ c18 ซึ่งเคย
ก่อนหน้านี้เว็บไซด์ด้วยเมทานอลสำหรับทำความสะอาด หลังจากล้างด้วยน้ำที่บริสุทธิ์มาก
( 2 มล. ) และการอบแห้ง , Haas ขั้วโลกมีตัวอย่าง
กับ 0.8 มิลลิลิตร ( 25 % ) ผสมแอมโมเนีย เมทานอล ( 10:90 , V / V )
แห้งภายใต้ไนโตรเจนและ redissolved ใน 100 จะได้คาเฟอีน โซลูชั่น ( มาตรฐานภายใน
) อัตราการไหลเท่ากับ 1 มิลลิลิตร / นาที เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย
10 มิลลิโมล / ลิตรไตรเอตทิลามีนกับกรดฟอสฟอริค ปรับ pH 3.2

นี้เป็น 10 mmol / L ไตรเอตทิลามีนค่า pH 3.6 เป็น
ตัว B และ C เป็นสารละลายไน Haas แยกกันกับ
ลาดที่ 25  C : 82 รายการ - 75 % เป็น 10 % B 8 – 15 %
0 C จาก