2.7.2. Attachment and morphology of

2.7.2. Attachment and morphology of cell on PVABG/ChiCol composite scaffolds (biological test)


For the biological test, previously described [34], rat osteoblast-like UMR-106 cells [American Type Culture Collection (ATCC) No. CRL- 1661] were grown in a Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM; Sigma, St. Louis, MO, USA) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS; PAA, Pasching, Austria) and 100 U/mL penicillin–streptomycin
(Gibco, Grand Island, NY, USA). Cells were propagated in a 75-cm2 T-flask (Corning, NY, USA) in a humidified atmosphere containing 5% CO2 at 37 °C and were sub-cultured as described in the ATCC protocol. Confluent UMR-106 cells were used for the experiment by seeding cells at 1 × 106 cells/petri dish into 100-mmpetri dish where a circular
glass (diameter ~1.3 cm) disk and a PVABG/ChiCol composite disk (diameter ~1.3 cm) had been placed inside. The petri disheswere incubated in a humidified atmosphere containing 5% CO2 at 37 °C. Culture medium was replaced every 3 days. At days 3, 5 and 7 after seeding, the glass and PVABG/ChiCol composite disks were examined for cell
attachment and mineralization by SEM. The glass and PVABG/ChiCol composite disks were first briefly rinsed in cold 0.1 Mphosphate buffer (pH 7.2) twice. The cells were then fixed in 2.5% glutaraldehyde (ElectronMicroscopy Science, FortWashington, PA, USA) in 0.1Mphosphate buffer for 3 h. The fixative was removed and cells were rinsed in
0.1Mphosphate buffer and in distilledwater. Afterwards, the glass and PVABG/ChiCol composite disks were dehydrated in a graded series of ethanol solution (50%, 70%, 80%, 90% and absolute ethanol). The glass and PVABG/ChiCol composite disks were desiccated under vacuum and were coated by copper before the cell morphology, cell adhesion
and cell proliferation were investigated using SEM

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7.2 การแนบและสัณฐานวิทยาของเซลล์เกิดคอมโพสิตของ PVABG/ChiCol (การทดสอบทางชีวภาพ)สำหรับชีวภาพ อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [34], หนูเหมือน osteoblast UMR 106 เซลล์ [วัฒนธรรมอเมริกันชนิดคอลเลกชัน (ATCC) หมายเลข CRL - ปี 1661] ที่ปลูกใน Dulbecco การของแก้ไขนกอินทรีขนาดกลาง (DMEM ซิกม่า St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) เสริม ด้วย 10% ทารกวัวซีรั่ม (FBS PAA, Pasching ออสเตรีย) และ 100 U/mL ยาเพนนิซิลลิน – streptomycin(Gibco แกรนด์ไอส์แลนด์ นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา) เซลล์ที่ถูกแพร่กระจายใน 75 cm 2 T-กระติก (Corning, NY, USA) ในบรรยากาศ humidified ประกอบด้วย 5% CO2 ที่ 37 ° C และมีอ่างย่อยในโพรโทคอล ATCC ใช้ confluent UMR 106 เซลล์สำหรับการทดลอง โดยเพาะเซลล์ที่ 1 × 106 เซลล์/petri จานเป็นจาน 100 mmpetri เป็นวงกลมแก้ว (เส้นผ่าศูนย์กลาง ~1.3 เซนติเมตร) และดิสก์ PVABG/ChiCol สิต (เส้นผ่าศูนย์กลาง ~1.3 ซม.) ได้ถูกวางไว้ภายใน ได้รับการกก petri disheswere ในบรรยากาศ humidified ประกอบด้วย 5% CO2 ที่ 37 องศาเซลเซียส สื่อวัฒนธรรมถูกแทนทุก 3 วัน ในวันที่ 3, 5 และ 7 หลังเพาะ แก้วและ PVABG/ChiCol สิตดิสก์ถูกตรวจสอบสำหรับเซลล์สิ่งที่แนบและ mineralization โดย sem แก้วและ PVABG/ChiCol สิตดิสก์ถูกแรกสั้น ๆ ล้างในเย็น 0.1 Mphosphate บัฟเฟอร์ (pH 7.2) สองครั้ง เซลล์ได้รับการแก้ไขแล้วใน 2.5% glutaraldehyde (วิทยาศาสตร์ ElectronMicroscopy, FortWashington, PA สหรัฐอเมริกา) ใน 0.1Mphosphate บัฟเฟอร์สำหรับ 3 ชม. ตรึงถูกเอาออก และเซลล์ถูกล้างใน0.1Mphosphate บัฟเฟอร์ และ distilledwater หลังจากนั้น แก้วและ PVABG/ChiCol สิตดิสก์ถูกอบแห้งในชุดจัดระดับของการแก้ปัญหาเอทานอล (50%, 70%, 80%, 90% และเอทานอลแน่นอน) แก้วและ PVABG/ChiCol สิตดิสก์ถูก desiccated ภายใต้สุญญากาศ และถูกเคลือบ ด้วยทองแดงก่อนสัณฐานวิทยาเซลล์ เซลล์ยึดเกาะและแพร่กระจายเซลล์ที่ถูกตรวจสอบโดยใช้ SEM

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7.2 สิ่งที่แนบมาและสัณฐานวิทยาของเซลล์ใน PVABG / ChiCol โครงคอมโพสิต (ทดสอบทางชีวภาพ) สำหรับการทดสอบทางชีวภาพอธิบายไว้ก่อนหน้า [34], ราชเทวีกระดูกเหมือน UMR-106 เซลล์ [ชนิดอเมริกันเก็บวัฒนธรรม (ATCC) ครั้งที่ CRL- 1661] ปลูก ในการปรับเปลี่ยนขนาดกลางนกอินทรีของ Dulbecco (DMEM; Sigma, St. Louis, MO, USA) เสริมด้วย 10% ซีรั่มของทารกในครรภ์วัว (FBS; PAA, Pasching, ออสเตรีย) และ 100 U / มล penicillin-streptomycin (Gibco, เกาะแกรนด์, นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา). เซลล์ที่ถูกแพร่กระจายใน 75 cm2 T-ขวด (Corning, NY, USA) ในบรรยากาศที่มีความชื้น CO2 5% ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและมีการเพาะเลี้ยงย่อยตามที่อธิบายไว้ในโพรโทคอ ATCC ไหลมารวมกัน UMR-106 เซลล์ถูกนำมาใช้สำหรับการทดสอบจากเซลล์เพาะที่ 1 × 106 เซลล์ / จาน Petri ลงในจาน 100 mmpetri ที่วงกลมแก้ว (เส้นผ่าศูนย์กลาง ~ 1.3 ซม.) ดิสก์และดิสก์คอมโพสิต PVABG / ChiCol (เส้นผ่าศูนย์กลาง ~ 1.3 ซม.) ได้ถูกวางไว้ภายใน Petri disheswere บ่มในบรรยากาศที่มีความชื้น CO2 5% ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส กลางวัฒนธรรมถูกแทนที่ทุก 3 วัน ในวันที่ 3, 5 และ 7 หลังจากเพาะแก้วและ PVABG / ChiCol ดิสก์คอมโพสิตมีการตรวจสอบสำหรับเซลล์สิ่งที่แนบมาและแร่ธาตุโดย SEM แก้วและ PVABG / ChiCol ดิสก์คอมโพสิตเป็นเวลาสั้น ๆ ครั้งแรกที่ล้างในน้ำเย็น 0.1 Mphosphate บัฟเฟอร์ (pH 7.2) สองครั้ง เซลล์ที่ได้รับการแก้ไขแล้ว 2.5% glutaraldehyde (ElectronMicroscopy วิทยาศาสตร์ FortWashington, PA, สหรัฐอเมริกา) ใน 0.1Mphosphate บัฟเฟอร์เวลา 3 ชั่วโมง ตรึงถูกลบออกและเซลล์ถูกล้างใน0.1Mphosphate บัฟเฟอร์และน้ำกลั่น หลังจากนั้นแก้วและ PVABG / ChiCol ดิสก์คอมโพสิตมีการคายน้ำในซีรีส์อย่างช้า ๆ ของการแก้ปัญหาเอทานอล (50%, 70%, 80%, 90% และเอทานอลที่แน่นอน) แก้วและ PVABG / ChiCol ดิสก์คอมโพสิตถูกผึ่งให้แห้งภายใต้สูญญากาศและได้รับการเคลือบผิวด้วยทองแดงก่อนสัณฐานเซลล์ยึดเกาะของเซลล์และเซลล์งอกถูกตรวจสอบโดยใช้ SEM