2. Materials and methods2.1. Plasom

2. Materials and methods
2.1. Plasom preparation
The original formula of Plasomconsists of 1 kg fi sh(Oreochromis
niloticus), 10 0 g table salt and 20 0 g sugar. The mixtures were
transferred to a bucket and covered with polyethylene fi lm. The
containers were incubated at room temperature (30 2

C) for 8
days ( Fig.1). During fermentation, each bucket was taken for LAB
isolation every two days. Prior to isolation the selected sample was
blended and used as a composite sample.
Plasom production processing
Raw material
Fish
Size selected and Cut
Washed
Fish+Ingredients
Fermentation
Mixed with roasted rice
Packed
Distribution
Ingredients
(Salt + Sugar and Roasted rice)
Fig. 1. Plasomproduction processing. Hwanhlem et al.


2.2. Isolation of L AB
Twenty- five grams of the sample were added to 225 ml of sterile
0.05 M potassium phosphate buffer pH 7.2 containing 1% NaCl (PBS)
and shaken for 5 min. Appropriate decimal dilutions were prepared
in PBS buffer and poured into a sterile petri dish on de Man Rogosa
and Sharpe (MRS, Labscan Asia Co., Ltd., Thailand) agar containing
0.3% (w/v) CaCO
3
(Maragkoudakis et al., 20 0 6). This was subjected
to incubation at 37

C for 24 h. Bacterial colonies that exhibited
clear zone on the plates were individually picked and streaked on
MRS agar containing 0.3% (w/v) CaCO3
. This procedure was
repeated in order to purify the isolates. Each of the isolates was fi rst
tested for catalase by placing a drop of 3% hydrogen peroxide
solution on the cells. Immediate formation of bubbles indicated the
presence of catalase in the cells. Only those isolates which were
catalase negative were Gram-stained, and only those which were
Gram-positive were maintained in MRS broth containing 25%
glycerol at  20

C. For routine analysis, strains were subcultured
twice in MRS broth for 24 h at 37

C. Selected LAB were identifi ed
by 16S rDNA analysis.

2.3. Detection of antagonistic activity
For detection of antagonistic activity, an agar spot test was
used. The agar spot test was a modifi cation of that described by
Schillinger and Lucke (1989) . Approximately 10
4
CFU/ml of the
strains to be tested for production of an antimicrobial compound
were spotted onto the surface of MRS agar plates (1.5% agar) and
incubated for 4 8 h at 37

C. This allowed colonies to develop. The
plates were overlaid with 10 ml of Nutrient soft agar (0.75% agar).
The overlay agar was seeded with 10
4
cfu/ml of the pathogenic
bacteria to be tested for sensitivity (Escherichia coli , Staphylococcus
aureus and Salmonella sp.). After incubation for 24 h at 37

C the
plates were checked for inhibition zone diameters. Inhibition was
scored as positive if the width of the clear zone around the colonies
of the producer strain was 10 mm or larger.
Strains exhibiting antagonistic activities against pathogenic
bacteria were investigated for their antimicrobial compounds as
described by Aslim, Yuk sekdag, Sarikaya, and Beyatli (20 05) . Strains
of LAB were grown for 24 h at 37

C in 10 ml of MRS broth and then
centrifuged at 950 0 g for 10 min. Three samples of the supernatant
were taken from each strain of LAB. Samples 1 and 2 were adjusted
to pH 6.5 with NaOH (1 N) to rule out acid inhibition. For sample 2,
a catalase solution (Fluka, Germany) (30 0 U/ml in PBS buffer, pH 7)
was added to rule out inhibition from hydrogen peroxide. For
sample 3, the supernatant was used as a control. The antagonistic
activity of the three samples was detected using the well diffusion
agar method ( Papamaloni, Tzanetakis, Tzanetaki, & Kotzekidou,
20 03). Twenty ml of sof t BHI agar (containing 1.0% agar) were
poured on sterile plates and inoculated with an overnight culture of
pathogenic bacteria (about 10
7
cfu/ml). After solidification, wells
were perforated with a sterile 7 mm cork borer. The culturefi ltrates
(50 m l) were placed in each well. The plates were incubated at 37

C
and examined af ter 24 h for clear zones showing the pathogenic
bacteria inhibition. The diameters of the inhibition zones were
measured and the diameter of the well, 7 mm, was subtracted from
the total zone diameter.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. Plasom เตรียมสูตรเดิมของ Plasomconsists ของเน็ต 1 กก. sh (ปลาniloticus), 20 0 กรัมน้ำตาลและเกลือ 10 กรัม 0 มีส่วนผสมโอนย้ายไปยังถัง และคลุม ด้วยพลาสติกหา lm การได้รับการกกภาชนะที่อุณหภูมิห้อง (30 2C) สำหรับ 8วัน (Fig.1) ระหว่างการหมัก แต่ละถังถูกสำหรับห้องปฏิบัติการแยกทุกสองวัน ก่อนที่จะแยก ตัวเลือกถูกผสม และใช้เป็นตัวอย่างประกอบประมวลผลการผลิต Plasomวัตถุดิบปลาขนาดเลือก และตัดล้างปลา + ส่วนผสมหมักผสมกับข้าวคั่วบรรจุการแจกจ่ายส่วนผสม(เกลือ + น้ำตาล และข้าวคั่ว)รูปที่ 1 การประมวลผล Plasomproduction Hwanhlem et al2.2. แยกของ L ABยี่สิบห้ากรัมของตัวอย่างเพิ่ม 225 มล.ผ่านการฆ่าเชื้อโพแทสเซียม 0.05 M ค่าฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 ประกอบด้วย 1% NaCl (PBS)และเขย่าสำหรับ 5 นาทีเหมาะสม dilutions ทศนิยมมีเตรียมใน PBS บัฟเฟอร์ และเทลงในจานเพาะเชื้อเป็นหมันในเด Rogosa คนมีอาหารของ Sharpe (MRS, Labscan Asia Co., Ltd. ประเทศไทย)0.3% (w/v) CaCO3(Maragkoudakis et al. 20 0 6) นี้ภายใต้การบ่มที่ 37C สำหรับอาณานิคมแบคทีเรีย 24 h. ที่จัดแสดงโซนล้างบนแผ่นละเบิก และริ้วบนอาหาร MRS ที่ประกอบด้วย 0.3% (w/v) CaCO3. กระบวนการนี้ได้ทำซ้ำเพื่อทำความสะอาดการแยก แต่ละตัวแยกได้ก่อนผ่านทดสอบ catalase โดยหยด 3% ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์การแก้ไขปัญหาเกี่ยวกับเซลล์ ระบุการก่อตัวของฟองอากาศทันทีสถานะการออนไลน์ของ catalase ในเซลล์ เฉพาะที่แยกซึ่งcatalase ลบถูกย้อม สีกรัม และเฉพาะผู้ที่แบคทีเรียแกรมบวกยังคงไว้ในซุป MRS ที่ประกอบด้วย 25%กลีเซอรอล 20C. สำหรับวิเคราะห์ประจำ สายพันธุ์ถูก subculturedในน้ำซุป MRS สำหรับ 24 ชั่วโมงที่ 37C. เลือกปฏิบัติเป็น identifi edโดยการวิเคราะห์ 16S rDNA2.3. การตรวจจับกิจกรรมต่อต้านสำหรับการตรวจหากิจกรรมที่เป็นปรปักษ์ การทดสอบจุดอาหารถูกใช้ ทดสอบจุดอาหารถูกไอออน modifi ที่อธิบายโดยSchillinger และ Lucke (1989) ประมาณ 104อาหรับ/ml ของการสายพันธุ์ที่จะทดสอบสำหรับการผลิตเป็นสารต้านจุลชีพที่ส่องลงบนพื้นผิวของจานอาหาร MRS (1.5% อาหาร) และได้รับการกก 4 8 h ที่ 37C. นี้อนุญาตให้อาณานิคมเพื่อพัฒนา การแผ่นวางทับ ด้วยอาหารอ่อนสารอาหาร (อาหาร 0.75%) 10 มล.อาหารซ้อนทับถูกเตรียมพร้อม 104อาหรับ/ml ของการก่อโรคแบคทีเรียจะทดสอบความไว (Escherichia coli, Staphylococcusหมอเทศข้างลายและ Salmonella sp) หลังจากบ่มสำหรับ 24 ชั่วโมงที่ 37C การแผ่นได้ถูกตรวจสอบสำหรับโซนยับยั้งเส้นผ่าศูนย์กลาง ถูกยับยั้งคะแนนเป็นบวกถ้าความกว้างของโซนชัดเจนทั่วอาณานิคมของผู้ผลิต สายพันธุ์ถูก 10 มม. หรือใหญ่กว่าแสดงกิจกรรมต่อต้านกับเชื้อสายพันธุ์แบคทีเรียตรวจสอบสารต้านจุลชีพของพวกเขาเป็นโดย Aslim คือ sekdag, Sarikaya และ Beyatli (20 05) สายพันธุ์แล็บที่ปลูกสำหรับ 24 ชั่วโมงที่ 37C 10 ml ของ MRS ซุปแล้วเหวี่ยงที่ 950 0 กรัมสำหรับ 10 นาที ตัวอย่างที่สามของ supernatantถูกนำมาจากแต่ละสายพันธุ์ของห้องปฏิบัติการ ตัวอย่างที่ 1 และ 2 ถูกปรับการวัดค่า pH 6.5 กับ NaOH (1 N) การแยกแยะยับยั้งกรด สำหรับตัวอย่างที่ 2การแก้ไขปัญหา catalase (Fluka เยอรมนี) (30 0 U/ml ใน PBS บัฟเฟอร์ ค่า pH 7)ถูกเพิ่มการแยกแยะยับยั้งจากไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ สำหรับตัวอย่าง 3, supernatant ถูกใช้เป็นตัวควบคุม การต่อต้านกิจกรรมตัวอย่างสามตรวจพบโดยใช้การกระจายที่ดีวิธีการอาหาร (Papamaloni, Tzanetakis, Tzanetaki และ Kotzekidou20 03) ได้ยี่สิบมิลลิลิตรของอาหาร BHI t sof (ประกอบด้วยอาหาร 1.0%)เทบนแผ่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อ และ inoculated กับวัฒนธรรมข้ามคืนแบคทีเรียก่อโรค (เกี่ยวกับ 107อาหรับ/มิลลิลิตร) หลังจากแข็งตัว บ่อมีรู มีมอดไม้ก๊อกที่เป็นหมัน 7 มม. Culturefi ltrates(50 m l) ถูกวางไว้ในแต่ละอย่าง ได้รับการกกแผ่นที่ 37Cและตรวจสอบโฟกัสเธอตลอด 24 ชั่วโมงสำหรับโซนที่ชัดเจนที่ทำให้เกิดโรคยับยั้งเชื้อแบคทีเรีย ของโซนยับยั้งได้วัด และของดี 7 มม ถูกหักออกจากเส้นผ่าศูนย์กลางรวมโซน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 เตรียม Plasom
สูตรเดิมของ Plasomconsists 1 กิโลกรัม Fi SH (Oreochromis
niloticus), 10 0 กรัมเกลือ 20 กรัมน้ำตาล 0 ผสมถูก
โอนไปยังถังและปกคลุมด้วยพลาสติกชนิด Fi LM
ภาชนะบรรจุที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิห้อง (30? 2
?
C) เป็นเวลา 8
วัน (รูปที่ 1) ระหว่างการหมักแต่ละถังถูกนำสำหรับห้องปฏิบัติการ
แยกทุกสองวัน ก่อนที่จะมีการแยกกลุ่มตัวอย่างที่เลือกได้รับการ
ผสมและใช้เป็นตัวอย่างคอมโพสิต.
Plasom การประมวลผลการผลิต
วัตถุดิบ
ปลา
ขนาดที่เลือกและตัด
ล้าง
ปลา + ส่วนผสม
หมัก
ผสมกับคั่วข้าว
บรรจุ
การจัดจำหน่าย
ส่วนผสม
(เกลือ + น้ำตาลและข้าวคั่ว)
รูป 1. การประมวลผล Plasomproduction Hwanhlem et al. 2.2 แยก L AB ยี่สิบห้ากรัมของกลุ่มตัวอย่างถูกเพิ่มเข้าไปใน 225 มิลลิลิตรหมัน0.05 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 7.2 ที่มี 1% โซเดียมคลอไรด์ (PBS) และเขย่าเป็นเวลา 5 นาที ที่เหมาะสมเจือจางทศนิยมได้จัดทำในพีบีเอส buffer และเทลงในจานเลี้ยงเชื้อผ่านการฆ่าเชื้อบนผู้ชาย Rogosa และชาร์ป (นาง Labscan Asia Co. , Ltd. ประเทศไทย) วุ้นที่มี0.3% (w / v) CaCO 3 (Maragkoudakis et al, 20 0 6) นี้ได้ภายใต้การบ่มที่อุณหภูมิ 37 ? C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง แบคทีเรียที่ได้มีโซนที่ชัดเจนเกี่ยวกับแผ่นเปลือกโลกถูกเลือกเป็นรายบุคคลและลายบนอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS ที่มี 0.3% (w / v) CaCO3 ขั้นตอนนี้จะถูกทำซ้ำเพื่อการชำระล้างเชื้อ แต่ละสายพันธุ์ก็แรกทดสอบการ catalase โดยการวางลดลง 3% ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์แก้ปัญหาในเซลล์ การก่อตัวของฟองทันทีที่ระบุการปรากฏตัวของ catalase ในเซลล์ เฉพาะสายพันธุ์เหล่านั้นซึ่งเป็นcatalase เชิงลบแกรมสีและเฉพาะผู้ซึ่งเป็นแบคทีเรียแกรมบวกที่ถูกเก็บรักษาไว้ในน้ำซุป MRS ที่มี 25% กลีเซอรอลที่? 20 ? C. สำหรับการวิเคราะห์ประจำสายพันธุ์ที่ถูกเลี้ยงครั้งที่สองใน MRS น้ำซุปเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ? C. LAB ที่เลือกถูก identifi ed โดยการวิเคราะห์ 16S rDNA. 2.3 การตรวจหากิจกรรมที่เป็นปฏิปักษ์ในการตรวจหากิจกรรมที่เป็นปรปักษ์, การทดสอบจุดวุ้นถูกนำมาใช้ การทดสอบจุดวุ้นเป็นไอออนบวก modifi ที่อธิบายโดยSchillinger และ Lucke (1989) ประมาณ 10 4 CFU / ml ของสายพันธุ์ที่ได้รับการทดสอบสำหรับการผลิตสารต้านจุลชีพเป็นด่างลงบนพื้นผิวของแผ่น MRS agar (1.5% วุ้น) และบ่มเป็นเวลา 4 8 ชั่วโมงที่ 37 ? C. นี้ได้รับอนุญาตอาณานิคมในการพัฒนา แผ่นถูกบุด้วย 10 มล. ของวุ้นนุ่มธาตุอาหาร (0.75% วุ้น). วุ้นซ้อนทับเป็นเมล็ดที่มี 10 4 cfu / ml ที่ทำให้เกิดโรคของเชื้อแบคทีเรียที่จะทดสอบเพื่อความไว (Escherichia coli, Staphylococcus aureus และ Salmonella Sp.) หลังจากการบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ? ซีแผ่นถูกตรวจสอบสำหรับเส้นผ่าศูนย์กลางบริเวณยับยั้ง ยับยั้งได้รับคะแนนเป็นบวกถ้าความกว้างของวงใสรอบอาณานิคมของสายพันธุ์ที่ผลิตได้ 10 มิลลิเมตรหรือมีขนาดใหญ่. สายพันธุ์จัดแสดงกิจกรรมปฏิปักษ์กับที่ทำให้เกิดโรคแบคทีเรียที่ถูกตรวจสอบหาสารต้านจุลชีพของพวกเขาเป็นอธิบายโดย Aslim, จุ๊บ sekdag, Sarikaya และ Beyatli (20 05) สายพันธุ์ของแล็บปลูกเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 ? C ใน 10 มล. ของ MRS น้ำซุปแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 950 0 กรัมเป็นเวลา 10 นาที สามตัวอย่างใสถูกนำมาจากความเครียดจากการ LAB แต่ละ ตัวอย่างที่ 1 และ 2 มีการปรับค่าพีเอช 6.5 ด้วย NaOH (1 N) ที่จะออกกฎการยับยั้งกรด ตัวอย่างที่ 2 การแก้ปัญหา catalase (Fluka, เยอรมนี) (30 0 U / ml ในพีบีเอสบัฟเฟอร์ค่า pH 7) ถูกเพิ่มเข้ามาในการออกกฎการยับยั้งจากไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ สำหรับตัวอย่างที่ 3 ใสถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม ปฏิปักษ์กิจกรรมในสามของกลุ่มตัวอย่างที่ตรวจพบใช้กันแพร่วุ้นวิธี (Papamaloni, Tzanetakis, Tzanetaki และ Kotzekidou, 20 03) ยี่สิบมิลลิลิตร SOF T BHI วุ้น (agar ที่มี 1.0%) ถูกเทลงบนแผ่นผ่านการฆ่าเชื้อและเชื้อด้วยวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของเชื้อแบคทีเรียที่ทำให้เกิดโรค (ประมาณ 10 7 CFU / ml) หลังจากการแข็งตัวบ่อถูกพรุนกับการฆ่าเชื้อ 7 มมก๊อกหนอนเจาะ ltrates culturefi (50 มล.) ถูกวางไว้ในแต่ละดี แผ่นถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ? C และตรวจสอบ AF เธอ 24 ชั่วโมงสำหรับโซนที่ชัดเจนแสดงที่ทำให้เกิดโรคแบคทีเรียยับยั้ง ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนยับยั้งถูกวัดและเส้นผ่าศูนย์กลางของดี 7 มมที่ถูกหักออกจากขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางโซนทั้งหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . เตรียมปลาส้มสูตรดั้งเดิมของ plasomconsists ของ SH Fi 1 กิโลกรัม ( สกุลปลานิลniloticus ) , 10 0 กรัมเกลือและ 20 0 กรัมน้ำตาล ส่วนผสมคือย้ายไปยังถังและครอบคลุมกับพลาสติก fi LM . ที่ภาชนะบรรจุที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิห้อง ( 30 28 C )วัน ( ” ) ในระหว่างกระบวนการหมักแต่ละถังถ่ายสำหรับแลปแยกทุก 2 วัน ก่อนที่จะแยกจำนวนผสมและใช้เป็นตัวอย่างประกอบกรรมวิธีการผลิตปลาส้มวัตถุดิบปลาเลือกขนาดและตัดล้างปลา + ส่วนผสมการหมักผสมกับข้าวคั่วบรรจุการกระจายส่วนผสม( เกลือ + น้ำตาล และข้าวคั่ว )รูปที่ 1 การประมวลผล plasomproduction . hwanhlem et al .2.2 . การแยกของชั้น .ยี่สิบ - ห้ากรัมจำนวนเพิ่ม 225 มิลลิลิตร ปลอดเชื้อ0.05 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 มี 1 % NaCl ( PBS )และหวั่นไหว 5 นาทีที่เหมาะสม วิธีการเตรียม ทศนิยมใน PBS buffer และเทลงในจาน Petri เป็นหมันในผู้ชาย rogosa เดอชาร์ป ( และคุณ labscan Asia Co . , Ltd . , Thailand ) วุ้นที่มี0.3% ( w / v ) CaCO3 .( maragkoudakis et al . , 20 0 6 ) นี้คือภายใต้เพื่อบ่มที่ 37C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง แบคทีเรียโคโลนีที่แสดงโซนชัดเจนบนแผ่นเป็นแบบเลือกลายบนนางวุ้นที่มี 0.3% ( w / v ) แคลเซียมคาร์บอเนต. ขั้นตอนนี้คือซ้ำเพื่อให้บริสุทธิ์ของเชื้อ ของแต่ละไอโซเลทคือ RST fiทดสอบสามารถวางหยด 3% ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์สารละลายในเซลล์ การก่อตัวของฟองแสดงทันทีการปรากฏตัวของคะตะเลสในเซลล์ เฉพาะสายพันธุ์ซึ่งเป็นสามารถลบคราบกรัม และเฉพาะผู้ซึ่งเป็นแกรมบวกถูกเก็บรักษาไว้ใน MRS broth ที่มี 25%กลีเซอรอลที่ 20C . สำหรับการวิเคราะห์ตามปกติ subcultured สายพันธุ์สองครั้งใน MRS broth เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37C . เลือก Lab เป็น identifi เอ็ดโดยการวิเคราะห์ 16S rDNA .2.3 ตรวจสอบกิจกรรมของจุลินทรีย์ปฏิปักษ์สำหรับการตรวจสอบกิจกรรมของปฏิปักษ์ เป็นวุ้นจุดทดสอบใช้ การใช้จุดทดสอบเป็นบวกที่อธิบายโดยโมดิฟายชิลลีเงอร์ และลัก ( 1989 ) ประมาณ 104 .CFU / ml ของสายพันธุ์ที่ถูกทดสอบสำหรับการผลิตสารต้านจุลชีพถูกพบบนผิวของนางวุ้นแผ่น ( 1.5% วุ้น ) และบ่มที่ 37 4 8 ชั่วโมงC . นี้ได้รับอนุญาต นิคมพัฒนา ที่จานถูกหุ้มด้วย 10 ml ของวุ้นอาหารวุ้นนิ่ม 0.75% )ที่หุ้มวุ้นได้เมล็ด 10 ด้วย4 .cfu / ml ของเชื้อโรคแบคทีเรียที่จะทดสอบความไว ( Escherichia coli , Staphylococcusaureus Salmonella sp . ) หลังจากบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37คจานถูกยับยั้ง โซน ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง ยับยั้ง คือคะแนนเป็นบวกถ้าความกว้างของเคลียร์โซนรอบโคโลนีของผู้ผลิตสายพันธุ์ 10 มม. หรือใหญ่กว่าแสดงกิจกรรมต่อต้านเชื้อโรคเชื้อปฏิปักษ์ศึกษาสารต้านแบคทีเรียของสารประกอบ เช่นอธิบายโดย aslim ยัค sekdag sarikaya , , , และ beyatli ( 20 05 ) สายพันธุ์แลป ปลูก 24 H ที่ 37C ใน MRS broth และ 10 มิลลิลิตรระดับที่ 950 0 G 10 นาที 3 ตัวอย่าง และน่านถ่ายจากในแต่ละสายพันธุ์ของแล็บ ตัวอย่างที่ 1 และ 2 ได้ปรับpH 6.5 ด้วย NaOH ( 1 ) ออกกฎกรดในการยับยั้ง สำหรับตัวอย่างที่ 2โซลูชั่นคาตาเลส ( fluka , เยอรมนี ) ( 30 0 U / ml ใน PBS buffer , pH 7 )เพิ่มกฎออกยับยั้งจากไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ สำหรับตัวอย่างที่ 3 , น่านถูกใช้เป็นตัวควบคุม พวกปฏิปักษ์กิจกรรมของทั้งสามคนถูกตรวจพบใช้ดีการแพร่วิธี agar ( papamaloni tzanetakis tzanetaki & kotzekidou , , , ,20 03 ) ยี่สิบมิลลิลิตร Sof T BHI ( ที่มี 1.0% วุ้น ) ได้แก่เทใส่ในจานที่เป็นหมันและข้ามวัฒนธรรมแบคทีเรียก่อโรค ( ประมาณ 107 .CFU / ml ) หลังจากการแข็งตัว เวลส์เป็นพรุนกับหมัน 7 มม. ปิดด้วยจุกไม้ก๊อกเจาะ . การ culturefi ltrates( 50 M L ) ถูกวางไว้ในแต่ละครั้งได้อีกด้วย จานถูกบ่มที่ 37ซีและตรวจสอบ AF เธอ 24 ชั่วโมงเพื่อล้างโซนแสดง เชื้อโรคยับยั้งแบคทีเรีย ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนมีการยับยั้งวัดและเส้นผ่าศูนย์กลางของดี 7 มม. ถูกหักออกจากเส้นผ่าศูนย์กลางโซนรวม