2. Materials and methods2.1. Vegeta

2. Materials and methods
2.1. Vegetal material
Leaves of creosote bush L. tridentata, tar bush F. cernua, oregano
Lippia graveolens, lechuguilla A. lechuguilla, and yucca Y. filifera,
husks of pecan nut (C. illinoensis) and stalks of O. ficus-indica were
collected from areas nearby to Saltillo, Coahuila, Mexico during
August and September of 2008. Each vegetal tissue was dehydrated
until 4–6% of moisture was reached and each dried sample was
grinded in a miller (Thomas Wiley) and powder was sieved at 1 mm.
The fine powder obtained was stored in amber bottles or dark
plastic bags at room temperature until phytochemical compounds
extraction was performed.
2.2. Extraction of phytochemical compounds
The phytochemical compounds extraction was performed by
a solid–liquid procedure, using four solvents distilled water and
ethanol 70% for Soxhlet method and mineral oil emulsion with 10%
lanolin and cocoa butter for infusion method. For Soxhlet method,
each fine powder sample was mixed in a 1:4 (w/v) ratio with
the corresponding extracting agent. Infusion method was carried
out heating the solvent at 60 ◦C, once reached this temperature;
the fine powder was added and remained under these conditions
during 7 h. After this, extracts were filtered and stored at 5 ◦C
in containers covered with aluminum foil or amber bottles until
phytochemical compounds extracted were identified and quantified.
2.3. Analysis of phytochemical compounds
Rapid assays for a qualitative characterization of extracts were
made. Assays for detection of the presence of terpenes, saponins
and tannins were employed (Sofowora, 1993; Barba, 1997; Galindo
et al., 1989).
2.3.1. Tannins concentration
The concentration of hydrolysable tannins (HT) was determined
by the traditional method of Folin-Ciocalteu according to the protocol
reported by Makkar (1999). Condensed tannins (CT) were
spetrophotometrically determined using the method reported by
Swain and Hillis (1959). For condensed tannins determination, an
aliquot of 0.5 mL of plant extract was placed in a tube, with 3 mL of
HCl/butanol (1:9) and 0.1 mL of ferric reagent. On the other hand,
it was added to a tube assay serie, sole catechin (standard) in distilled
water at different concentrations (0, 200, 400, 600, 800 and
1000 ppm) to determine the reference curve. Tubes were plugged
tightly and were heated for 1 h in water bath at 90 ◦C. After that,
tubes were leaved to cool and absorbances were read at 460 nm. For
hydrolysable tannins determination, a reference curve was done by
placing 400 L of gallic acid at different concentrations (0, 200, 400,
600, 800, 1000 ppm) in assay tubes. Gallic acid concentrations were
prepared using distilled water. Each one of the plant extract were
diluted in a test tube respectively, immediately to each tube were
added 400 L of commercial Folin-Ciocalteu reagent, samples were
vortexed and leaved for 5 min. Then 400 L of NaCO3 (0.01 M) and
2.5 mL of distilled water were added. Finally absorbances were read
at 725 nm in UV/visible spectrophotometer.
2.3.2. Saponins
In different tubes assay was placed 1 mL of each one of plant
extract and added 5 mL of deionizer water. Then the different tubes
were vortexed for 30 s and left rest for 15 min, the presence of
saponins in each one of the different plant extracts was evaluated
according to the foam index (Galindo et al., 1989).
2.3.3. Terpenes
In different tubes was placed an aliquot of 0.5 mL of extract, then
it were added 2 mL of acetic anhydride. Tubes were cooled on ice.
After, sulfuric acid was added carefully and evaluated; a change
of color from violet to blue indicated the presence of terpenes
(Sofowora, 1993).
2.4. Food-borne pathogen bacteria
Four food-borne pathogen bacteria E. aerogenes INDRE, E. coli
ATCC 25922, S. typhi CDD-99, S. aureus ATCC 25923 proportioned
by The Coahuila Public Health State Laboratory (Saltillo Coahuila,
Mexico) were used in this study. Each bacterial strains was grown
in brain-heart-infusion broth (BHIB).
2.5. Antibacterial activity evaluation
The antibacterial activity of plant extracts against the four
food-borne pathogen bacteria was evaluated in micro-assays using
conventional sterile microplates of polystyrene. Each well of the
microplate was filled with 100 L of sterile BHIB medium (Bioxon),
50 L of 1.5E8 bacterial cells/mL and the amount of extract depending
of total tannin final concentration. Two control treatments
(sterile water, and BHIB medium without extract) were included
in the test. Inoculated microplates were incubated at 37 ◦C during
24 h. Bacterial growth was determined by absorbance reading
at 630 nm using an ELISA microplates reader (Dynatech). Bacterial
cell concentration was transformed to cells/mL using the reference
curve equation; the reference curve was performed by diluting
1:100 each bacterial species, counting the number of bacterial cells
of an aliquot of this dilution was done using a Neubauer chamber,
this was done for each bacterium. Finally,

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุ Vegetal
ใบสีน้ำตาลบุชแอล tridentata น้ำมันดินบุชเอฟ cernua, ออริกาโน
Lippia graveolens, Lechuguilla A. Lechuguilla และมันสำปะหลังวาย filifera,
เปลือกถั่วพีคาน ( C. illinoensis) และก้านทุม Ficus-indica ถูก
เก็บรวบรวม จากพื้นที่ใกล้เคียงที่จะซัลตีโยเม็กซิโกในช่วง
เดือนสิงหาคมและกันยายนของปี 2008 แต่ละเนื้อเยื่อพืชเป็นแห้ง
จนกระทั่ง 4-6% ของความชื้นก็มาถึงและแต่ละตัวอย่างแห้ง
บดในมิลเลอร์ (โทมัสไวลีย์) และผงถูกร่อนวันที่ 1 มม .
ผงดีที่ได้มาเก็บไว้ในขวดสีเหลืองอำพันหรือสีเข้ม
ถุงพลาสติกที่อุณหภูมิห้องจนสารพฤกษเคมี
สกัดได้ดำเนินการ.
2.2 การสกัดสารพฤกษเคมี
พฤกษเคมีสกัดสารได้ดำเนินการโดย
ขั้นตอนที่เป็นของแข็งของเหลวใช้สี่ตัวทำละลายและน้ำกลั่น
เอทานอล 70% สำหรับวิธีการและแร่ธาตุวิธีการสกัดแบบอิมัลชันน้ำมันที่มี 10%
ลาโนลินและเนยโกโก้สำหรับวิธีการแช่ สำหรับวิธีการวิธีการสกัดแบบ,
แต่ละตัวอย่างผงละเอียดผสมใน 1: 4 (w / v) อัตราส่วนกับ
ตัวแทนที่เกี่ยวข้องสกัด วิธีการแช่ได้ดำเนินการ
ออกความร้อนตัวทำละลายที่ 60 ◦Cเมื่อถึงอุณหภูมินี้;
ผงดีถูกเพิ่มเข้ามาและยังคงอยู่ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้
ในช่วง 7 ชั่วโมง หลังจากนี้สารสกัดถูกกรองและเก็บไว้ที่ 5 ◦C
ในภาชนะบรรจุที่ปกคลุมไปด้วยอลูมิเนียมหรือสีเหลืองอำพันขวดจน
สารพฤกษเคมีที่สกัดได้มีการระบุและวัด.
2.3 การวิเคราะห์สารพฤกษเคมี
การวิเคราะห์อย่างรวดเร็วสำหรับลักษณะเชิงคุณภาพของสารสกัดถูก
ทำ ชุดตรวจการตรวจหาการปรากฏตัวของ terpenes, saponins
และแทนนินที่ถูกว่าจ้าง (Sofowora 1993; Barba, 1997; Galindo
., et al, 1989).
2.3.1 ความเข้มข้นของแทนนินที่
ความเข้มข้นของแทนนิน hydrolysable (HT) ถูกกำหนด
โดยวิธีการดั้งเดิมของ Folin-Ciocalteu ตามโปรโตคอล
รายงานโดย Makkar (1999) แทนนินอย่างย่อ (CT) ถูก
กำหนด spetrophotometrically โดยใช้วิธีการรายงานโดย
คู่รักและ Hillis (1959) สำหรับการกำหนดแทนนินข้นการ
หาร 0.5 มลสารสกัดจากพืชถูกวางไว้ในหลอดมี 3 มล
HCl / บิวทานอ (1: 9) และ 0.1 มลสารเฟอริก บนมืออื่น ๆ ที่
มันถูกบันทึกอยู่ในหลอดทดสอบ serie, catechin แต่เพียงผู้เดียว (มาตรฐาน) ในการกลั่น
น้ำที่ระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกัน (0, 200, 400, 600, 800 และ
1,000 ppm) เพื่อตรวจสอบเส้นโค้งอ้างอิง ท่อเสียบ
ให้แน่นและถูกความร้อนเป็นเวลา 1 ชั่วโมงในอ่างน้ำที่ 90 ◦C หลังจากนั้น
หลอดถูกใบให้เย็นและ absorbances ถูกอ่านที่ 460 นาโนเมตร สำหรับ
ความมุ่งมั่นของแทนนิน hydrolysable โค้งอ้างอิงทำโดย
การวาง 400 L ของกรดฝรั่งเศสที่ระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกัน (0, 200, 400,
600, 800, 1,000 ppm) ในหลอดทดสอบ ความเข้มข้นของกรดฝรั่งเศสถูก
จัดทำขึ้นโดยใช้น้ำกลั่น แต่ละคนของสารสกัดจากพืชที่ถูก
เจือจางในหลอดทดลองตามลำดับทันทีหลอดแต่ละถูก
เพิ่ม 400 ลิตรพาณิชย์ Folin-Ciocalteu สารตัวอย่างได้รับการ
หมุนวนและใบเป็นเวลา 5 นาที แล้ว 400 ลิตร NaCO3 (0.01 เมตร) และ
2.5 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นที่ถูกเพิ่ม สุดท้าย absorbances ถูกอ่าน
ที่ 725 นาโนเมตร UV spectrophotometer / มองเห็น.
2.3.2 saponins
ในหลอดทดสอบที่แตกต่างกันถูกนำมาวาง 1 มิลลิลิตรของแต่ละคนของพืช
สารสกัดและเพิ่ม 5 มิลลิลิตรของน้ำ deionizer แล้วท่อที่แตกต่างกัน
ได้รับการหมุนวนเป็นเวลา 30 วินาทีและทิ้งส่วนที่เหลือเป็นเวลา 15 นาที, การปรากฏตัวของ
ซาโปนินในแต่ละคนของสารสกัดจากพืชที่แตกต่างกันได้รับการประเมิน
ตามดัชนีโฟม (Galindo et al., 1989).
2.3.3 Terpenes
ในท่อที่แตกต่างกันได้รับการวางหาร 0.5 มิลลิลิตรของสารสกัดจากนั้น
ก็มีการเพิ่ม 2 มลอะซิติกแอนไฮได ท่อแช่ในกระติกน้ำแข็ง.
หลังจากกรดกำมะถันถูกเพิ่มเข้ามาอย่างระมัดระวังและประเมินผล; การเปลี่ยนแปลง
ของสีจากสีม่วงสีฟ้าชี้ให้เห็นการปรากฏตัวของ terpenes
(Sofowora, 1993).
2.4 อาหารที่มีเชื้อแบคทีเรียที่ก่อให้เกิดโรค
สี่อาหารที่มีเชื้อแบคทีเรียที่ก่อให้เกิดโรคอี aerogenes Indre, E. coli
ATCC 25922, S. typhi CDD-99, เชื้อ S. aureus ATCC 25923 สัดส่วน
โดยโกอาวีลาสาธารณสุขรัฐทดลอง (ซัลตีโยโกอาวีลา
เม็กซิโก) ถูกนำมาใช้ ในการศึกษานี้ แต่ละสายพันธุ์แบคทีเรียเติบโตเป็นผู้ใหญ่
ในสมองหัวใจแช่น้ำซุป (BHIB).
2.5 การประเมินผลกิจกรรมการต้านเชื้อแบคทีเรีย
กิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของสารสกัดจากพืชกับสี่
อาหารที่มีเชื้อแบคทีเรียที่ก่อให้เกิดโรคได้รับการประเมินในไมโครตรวจโดยใช้
แบบเดิมที่ผ่านการฆ่าเชื้อ microplates ของสไตรีน ดีของแต่ละ
microplate ก็เต็มไปด้วย 100 L ของกลาง BHIB หมัน (Bioxon)
50 ลิตร 1.5E8 เซลล์แบคทีเรีย / มิลลิลิตรและปริมาณของสารสกัดขึ้น
ของแทนนินที่รวมความเข้มข้นสุดท้าย สองการรักษาควบคุม
(น้ำหมันและขนาดกลางโดยไม่ต้อง BHIB Extract) ถูกรวมอยู่
ในการทดสอบ เชื้อ microplates ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦Cในช่วง
24 ชั่วโมง เจริญเติบโตของแบคทีเรียที่ถูกกำหนดโดยการอ่านการดูดกลืนแสง
ที่ 630 นาโนเมตรโดยใช้วิธี ELISA microplates อ่าน (Dynatech) แบคทีเรีย
ความเข้มข้นของเซลล์ถูกเปลี่ยนไปยังเซลล์ / มิลลิลิตรใช้อ้างอิง
สมการเส้นโค้ง; โค้งอ้างอิงได้ดำเนินการโดยเจือจาง
1: 100 แต่ละสายพันธุ์แบคทีเรียนับจำนวนของเซลล์แบคทีเรีย
ของหารเจือจางนี้ถูกทำโดยการใช้ห้อง Neubauer,
นี้คือทำสำหรับแต่ละแบคทีเรีย สุดท้าย