RESULTSPeptide SynthesisTo determin

RESULTS
Peptide Synthesis
To determine the AA sequence of IgE- and IgGbinding
sites, 37 overlapping peptides spanning αs1-CN
were synthesized (shown in Table 1). By synthesizing
peptides that were offset from each other by 5 AA,
it was possible to identify individual IgE- and IgGbinding
epitopes within the larger regions of the αs1-CN
molecule. Each peptide was 15 AA long. All peptides
were purified by C18 reverse-phase HPLC.
IgE-Binding Epitope
Each set of 37 peptides was probed individually with
serum IgE from 6 different patients. An epitope can
be considered immunodominant if it is recognized by
above 65% serum IgE from the majority of patients
with cow milk hypersensitivity. The intensity of IgE
binding to each peptide was determined as a function
of that patient’s total IgE binding to these 37 peptides
(shown in Figure 1). Immunoglobulin E antibodies
from 6 patients showed binding to at least 1 linear peptide;
37 peptides were recognized by 6 sera. The serum
IgE from patient no. 1 recognized peptides P01, P02,
6872 CONG ET AL.
Journal of Dairy Science Vol. 96 No. 11, 2013
P03, P16, P18, P26, and P35. The serum IgE from the
remaining patients were tested in the same manner.
The sequence at AA 126 to 140 was recognized by 6
of 6 sera from CMA patients. The sequence at AA 6
to 20, AA 76 to 90, AA 171 to 185 were recognized by
5 of 6 sera from cow milk patients. The sequence at
AA 11 to 25 was recognized by 4 of 6 sera from CMA
patients. Other peptides (P18, P07, P20, and P22) were
recognized by few sera from CMA patients. Sera from
non-milk-allergic children showed weak reaction with
synthesized peptides, no data was showed in this paper.
IgG-Binding Epitope
The intensity of IgG binding to each peptide was
determined as a function of that patient’s total IgG
binding to these 37 peptides (shown in Figure 2); 37
peptides were recognized by 6 sera. The sequence of
AA 21 to 35, AA 56 to 70, and AA 161 to 175 were
recognized by 5 of 6 patients’ sera. In addition, the
peptides 81VPSERYLGYLEQLLR95, 126GIHAQQKEPMIGVNQ140,
166YVPLGTQYTDAPSFS180, 136IGVNQELAYFYPELF150,
and 41SKDIGSESTEDQAME55
(where the beginning and ending superscripts represent
the AA positions of the first and last AA, respectively)
showed weak binding with IgG from CMA patients’
sera.
Characterization of the Critical AA of the
IgE-Binding Epitope at AA 11 to 25
The AA essential to IgE binding in the epitope at
AA 11 to 25 were determined by synthesizing duplicate
peptides with single AA changes at each position.
These peptides were then probed with pooled serum
IgE from 6 patients with cow milk hypersensitivity to
determine if the change affected cow milk-specific IgE
binding (the results are shown in Figure 3). Pooled
serum IgE did not recognize this peptide when alanine
was substituted for asparagine at position 19, arginine
at position 22, and phenylalanine at position 23. In contrast,
the substitution of an alanine for leucine residues
at AA 20 and glutamine residues at AA 18 resulted in
increased IgE binding. The intensity of IgE binding of
other duplicate peptides showed no significant difference
compared with native epitopes. Therefore, the AA
residues of Asn19, Arg22, and Phe23 play important
roles in the allergenicity of αs1-CN.
Characterization of the Critical AA of the
IgG-Binding Epitope at AA 21 to 35
To identify the AA critical for IgG binding in the
sequence of AA 21 to 35, a series of related peptides
were synthesized with alanine substitutions at each
position of the 15-mer epitope and their IgG-binding
abilities were evaluated (Figure 4). A significant loss of
IgG binding was observed after alanine was substituted
for Arg22, Phe23, and Pro27. Substitution of leucine
at position 21, phenylalanine at position 24, alanine
at position 26, glutamic acid at position 30, glycine at
position 33, and lysine at position 34 with alanine also
resulted in lowered IgG binding. Substitution of other
positions on this peptide did not cause a consistent
decrease in IgG binding. Therefore, Arg22, Phe23, and
Pro27 were considered as the critical AA of the IgGbinding
epitope.
Immunological Relationship Between IgEand
IgG-Binding Epitopes
Five AA overlapping regions (AA 21–25, AA 171–175)
were found to cross-react with IgE and IgG (shown in
Table 2). In addition, a significant loss of IgE- and IgGTable
1. A library of peptides based on the sequence of αs1-CN
Peptide
number
Sequence
synthesized
AA position
in αs1-CN
P01 RPKHPIKHQGLPQEV 1–15
P02 IKHQGLPQEVLNENL 6–20
P03 LPQEVLNENLLRFFV 11–25
P04 LNENLLRFFVAPFPE 16–30
P05 LRFFVAPFPEVFGKE 21–35
P06 APFPEVFGKEKVNEL 26–40
P07 VFGKEKVNELSKDIG 31–45
P08 KVNELSKDIGSESTE 36–50
P09 SKDIGSESTEDQAME 41–55
P10 SESTEDQAMEDIKQM 46–60
P11 DQAMEDIKQMEAESI 51–65
P12 DIKQMEAESISSSEE 56–70
P13 EAESISSSEEIVPNS 61–75
P14 SSSEEIVPNSVEQKH 66–80
P15 IVPNSVEQKHIQKED 71–85
P16 VEQKHIQKEDVPSER 76–90
P17 IQKEDVPSERYLGYL 81–95
P18 VPSERYLGYLEQLLR 86–100
P19 YLGYLEQLLRLKKYK 91–105
P20 EQLLRLKKYKVPQLE 96–110
P21 LKKYKVPQLEIVPNS 101–115
P22 VPQLEIVPNSAEERL 106–120
P23 IVPNSAEERLHSMKE 111–125
P24 AEERLHSMKEGIHAQ 116–130
P25 HSMKEGIHAQQKEPM 121–135
P26 GIHAQQKEPMIGVNQ 126–140
P27 QKEPMIGVNQELAYF 131–145
P28 IGVNQELAYFYPELF 136–150
P29 ELAYFYPELFRQFYQ 141–155
P30 YPELFRQFYQLDAYP 146–160
P31 RQFYQLDAYPSGAWY 151–165
P32 LDAYPSGAWYYVPLG 156–170
P33 SGAWYYVPLGTQYTD 161–175
P34 YVPLGTQYTDAPSFS 166–180
P35 TQYTDAPSFSDIPNP 171–185
P36 APSFSDIPNPIGSEN 176–190
P37 DIPNPIGSENSEKTT 181–195
Journal of Dairy Science Vol. 96 No. 11, 2013
IDENTIFICATION OF CRITICAL AMINO ACID RESIDUES BY ALANINE SCANNING ANALYSIS 6873
Figure 1. Immunoglobulin E-binding epitopes of αs1-CN. A total of 37 peptides were recognized by 6 sera. The x-axis represents the code
of 37 peptides; the y-axis represents the optical density (OD). The sequence at AA 126 to 140, coded as P26, was recognized by 6 of 6 sera
from cow-milk-allergic (CMA) patients. The sequences at AA 6 to 20, coded as P02; AA 76 to 90, coded as P16; and AA 171 to 185, coded as
P35, were recognized by 5 of 6 sera from CMA patients. The sequence at AA 11 to 25, coded as P03, was recognized by 4 of 6 sera from CMA
patients. Error bars represent the SEM (n = 4).
Figure 2. Immunoglobulin G-binding epitopes of αs1-CN. The x-axis represents the code of 37 peptides; the y-axis represents the optical
density (OD); 37 peptides were recognized by 6 sera. The sequences of AA21 to 35, coded as P05; AA56 to 70, coded as P12; and AA161 to 175,
coded as P33, were recognized by 5 of 6 sera from cow-milk-allergic (CMA) patients. Error bars represent the SEM (n = 4).
6874 CONG ET AL.
Journal of Dairy Science Vol. 96 No. 11, 2013
binding epitopes spanning αs1-CN were both observed
after alanine was substituted for arginine at position 22
and phenylalanine at position 23.
DISCUSSION
Several studies have indicated that IgE directed
against casein fractions in cow milk appears to be
dominant in older children and adults with CMA compared
with younger children (Elsayed, 1993; Elsayed et
al., 2004a). However, several other studies (Rowntree
et al., 1985; Stöger and Wüthrich, 1993; Jenmalm and
Björkstén, 1999; Sicherer and Sampson, 1999; Eysink
et al., 2002) reported that atopic children have higher
levels of IgG subclass (particularly IgG4) antibodies to
milk and egg than nonatopic children. Immunoglobulin
G antibody responses to cow milk decreased with
age from 1 yr onward. The question if IgG to foods
might be useful as an early marker for the development
of IgE-mediated allergy remains open (Homburger et
al., 1986). In the current study, IgE- and IgG-binding
epitopes of αs1-CN were both identified. Immunotherapeutic
approaches using peptides representing IgG epitopes
may be able to shift the balance of antigen-specific
antibody production from IgE to IgG. We are currently
identifying which of the IgE-binding epitopes also bind
IgG to find a feasible immunotherapeutic strategy for
patients with cow milk hypersensitivity.
Figure 3. Single AA changes to the peptide at AA 11 to 25, resulting
in loss of IgE binding to this epitope. The peptide at AA 11 to 25
was synthesized with an alanine residue substituted for one of the AA
in this peptide and probed with a pool of serum IgE from 6 patients
with cow milk allergy. The letters across the bottom of each bar indicate
the 1-letter AA code for the residue normally at that position and
the AA that was substituted for this residue. The numbers indicate the
position of each residue in the αs1-CN protein. The control group indicates
the native epitope (no AA substitutions). OD = optical density.
Color version available in the online PDF.
Figure 4. Single AA changes to peptide at AA 21 to 35, resulting
in loss of IgG binding to this epitope. The peptide at AA 21 to 35 was
synthesized with an alanine residue substituted for one of the AA in
this peptide and probed with a pool of serum IgE from 6 patients with
cow milk allergy. The letters across the bottom of each bar indicate the
1-letter AA code for the residue normally at that position and the AA
that was substituted for this residue. The numbers indicate the position
of each residue in the αs1-CN protein. The control group indicates
the native epitope (no AA substitutions). OD = optical density. Color
version available in the online PDF.
Table 2. The AA sequence of αs1-CN1
1 0 2 0 3 0 4 0
R P K H P I K H Q G L P Q E V L N E N L L R F F V A P F P E V F G K E K V N E L
5 0 6 0 7 0 8 0
S K D I G S E S T E D Q A M E D I K Q M E A E S I S S S E E I V P N S V E Q K H
9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0
I Q K E D V P S E R Y L G Y L E Q L L R L K K Y K V P Q L E I V P N S A E E R L
1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0
H S M K E G I H A Q Q K E P M I G V N Q E L A Y F Y P E L F R Q F Y Q L D A Y P
1 7 0 1 8 0 1 9 0
S G A W Y Y V P L G T Q Y T D A P S F S D I P N P I G S E N S E K T T M P L W
1The numbers indicate the position of each residue in the αs1-CN protein. Amino acid sequences in bold indicate IgE-binding

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์การสังเคราะห์เพปไทด์การกำหนดลำดับ AA ของ IgE และ IgGbindingอเมริกา 37 รัฐ αs1 CN เปปไทด์ที่ทับซ้อนถูกสังเคราะห์ (แสดงในตารางที่ 1) โดยการสังเคราะห์เปปไทด์ที่อยู่ตรงข้ามกัน โดย 5 AAสามารถระบุแต่ละ IgE และ IgGbindingepitopes ในภูมิภาคใหญ่ของ αs1 CNโมเลกุล แต่ละเพปไทด์ถูก 15 AA ยาว เปปไทด์ทั้งหมดได้บริสุทธิ์ โดย HPLC กลับเฟส C18Epitope IgE ผูกแต่ละชุดของเปปไทด์ 37 ถูกพิสูจน์แต่ละด้วยเซรั่มที่ IgE จากผู้ป่วยอื่น 6 Epitope สามารถว่า immunodominant มันเป็นที่รับรู้เหนือ 65% serum IgE จากส่วนใหญ่ของผู้ป่วยมีวัวนมไวต่อยา ความเข้มของ IgEรวมเข้ากับแต่ละเพปไทด์ถูกกำหนดเป็นฟังก์ชันผู้ป่วยที่ของ IgE รวมผูกกับเปปไทด์เหล่านี้ 37(แสดงในรูปที่ 1) แอนตี้ immunoglobulin Eจากผู้ป่วย 6 พบผูกกับเพปไทด์เส้นน้อย 1เปปไทด์ 37 ได้รู้จัก 6 จะ เซรั่มเปปไทด์ P01, P02 รู้จัก IgE จากผู้ป่วยหมายเลข 16872 คอ ET ALสมุดรายวันของนมวิทยาศาสตร์ปี 96 ฉบับ 11, 2013P03, P16, P18, P26 ก P35 เซรั่ม IgE จากการผู้ป่วยที่เหลือถูกทดสอบในลักษณะเดียวกันลำดับที่ AA 126 ที่ 140 ถูกรับรู้ โดย 6ของนโยบาย 6 จาก CMA ผู้ป่วย ลำดับที่ AA 6ถึง 20, AA 76 ถึง 90, 171 AA ไป 185 ได้รู้จัก5 จะ 6 จากวัวนมผู้ป่วย ลำดับที่เอเอ 11 กับ 25 ถูกรับรู้ โดย 4 นโยบาย 6 จาก CMAผู้ป่วย มีเปปไทด์อื่น ๆ (P18, P07, P20 และเท่า p 22)รู้จักจะน้อยจาก CMA ผู้ป่วย นโยบายจากไม่ใช่นมแพ้เด็กแสดงปฏิกิริยาอ่อนด้วยเปปไทด์สังเคราะห์ ไม่มีข้อมูลที่แสดงในเอกสารนี้Epitope ผูก igGมีความเข้มของ IgG รวมเข้ากับแต่ละเพปไทด์กำหนดเป็นฟังก์ชันของ IgG รวมของผู้ป่วยผูกกับเปปไทด์เหล่านี้ 37 (แสดงในรูปที่ 2); 37เปปไทด์ถูกรู้จัก โดยนโยบาย 6 ลำดับของAA 21 ถึง 35, 56 AA กับ 70 และ 161 AA ไป 175 ได้รู้จัก 5 ของ 6 ผู้ป่วยจะ แห่งเปป 81VPSERYLGYLEQLLR95, 126GIHAQQKEPMIGVNQ140166YVPLGTQYTDAPSFS180, 136IGVNQELAYFYPELF150และ 41SKDIGSESTEDQAME55(ที่เริ่มต้นและสิ้นสุดตัวยกแสดงAA ตำแหน่งของ AA และนามสกุล ตามลำดับ)แสดงให้เห็นว่าอ่อนแอผูกกับ IgG จาก CMA ผู้ป่วยจะคุณสมบัติของ AA ความสำคัญของการIgE ผูก Epitope ที่ AA 11-25AA ต้องผูก IgE ใน epitope ที่เอเอ 11 กับ 25 ถูกกำหนด โดยสังเคราะห์ซ้ำเปปไทด์เดียว AA แปลงในแต่ละตำแหน่งเปปไทด์เหล่านี้ได้พิสูจน์แล้ว ด้วยเซรั่มรวมIgE จากผู้ป่วยที่ไวต่อยานมวัวไป 6กำหนดว่าถ้าการเปลี่ยนแปลงผลวัวนมเฉพาะ IgEรวม (ผลลัพธ์จะแสดงในรูปที่ 3) ทางถูกพูเซรั่ม IgE ไม่รู้จักนี้เพปไทด์เมื่ออะลานีนถูกนำมาใช้แทน asparagine ที่ตำแหน่ง 19 อาร์จินีนที่ตำแหน่ง 22 และ phenylalanine ที่ตำแหน่ง 23 ในทางตรงกันข้ามการแทนที่ของอะลานีนที่สำหรับตก leucineAA 20 และ glutamine ตกที่ AA 18 ส่งผลให้ผูก IgE เพิ่มขึ้น ความเข้มของ IgE รวมเปปไทด์อื่นซ้ำพบว่าไม่แตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับ epitopes ดั้งเดิม ดังนั้น AAตก Asn19, Arg22 และ Phe23 เล่นสำคัญบทบาทใน allergenicity ของ αs1 CNคุณสมบัติของ AA ความสำคัญของการผูก igG Epitope ที่ AA 21-35ระบุ AA ความผูก IgG ในการลำดับของ AA 21 ถึง 35 ชุดของเปปไทด์ที่เกี่ยวข้องถูกสังเคราะห์ ด้วยอะลานีนแทนที่แต่ละตำแหน่ง epitope 15-แมร์และผูก IgG ของพวกเขามีประเมินความสามารถ (รูปที่ 4) การสูญเสียIgG ผูกถูกพบหลังจากอะลานีนถูกแทนสำหรับ Arg22, Phe23 และ Pro27 ทดแทนของ leucineที่ตำแหน่ง 21, phenylalanine ที่ตำแหน่ง 24 อะลานีนที่ตำแหน่ง 26 กลูตาเมตที่ตำแหน่ง 30, glycine ที่ตำแหน่ง 33 และแอล-ไลซีนที่ตำแหน่ง 34 กับอะลานีนยังส่งผลให้ลด IgG ผูก ทดแทนอื่น ๆตำแหน่งบนเพปไทด์นี้ไม่ได้ก่อให้เกิดความสอดคล้องกันลดการผูก IgG ดังนั้น Arg22, Phe23 และPro27 ได้ถือเป็น AA สำคัญของ IgGbindingepitopeระเบียบความสัมพันธ์ระหว่าง IgEandผูก igG Epitopes5 AA ที่ทับซ้อนกันภูมิภาค (AA 21 – 25, AA 171-175)พบกับ cross-react กับ IgE และ IgG (แสดงในตาราง 2) นอกจากนี้ การสูญเสียของ IgE และ IgGTable1.ห้องสมุดเปปไทด์ตามลำดับของ αs1 CNเพปไทด์หมายเลขลำดับสังเคราะห์ตำแหน่งเอเอใน αs1 CNP01 RPKHPIKHQGLPQEV 1-15P02 IKHQGLPQEVLNENL 6-20P03 LPQEVLNENLLRFFV 11-25P04 LNENLLRFFVAPFPE 16-30P05 LRFFVAPFPEVFGKE 21 – 35P06 APFPEVFGKEKVNEL 26-40P07 VFGKEKVNELSKDIG 31 – 45P08 KVNELSKDIGSESTE 36 – 50P09 SKDIGSESTEDQAME 41 – 55พี 10 SESTEDQAMEDIKQM 46-60P11 DQAMEDIKQMEAESI 51 – 65P12 DIKQMEAESISSSEE 56 – 70P13 EAESISSSEEIVPNS 61-75P14 SSSEEIVPNSVEQKH 66-80P15 IVPNSVEQKHIQKED 71 – 85P16 VEQKHIQKEDVPSER 76-90P17 IQKEDVPSERYLGYL 81-95P18 VPSERYLGYLEQLLR 86 – 100P19 YLGYLEQLLRLKKYK 91-105P20 EQLLRLKKYKVPQLE 96-110P21 LKKYKVPQLEIVPNS 101-115เท่า P 22 VPQLEIVPNSAEERL 106-120P23 IVPNSAEERLHSMKE 111-125P24 AEERLHSMKEGIHAQ 116-130P25 HSMKEGIHAQQKEPM 121-135P26 GIHAQQKEPMIGVNQ 126-140P27 QKEPMIGVNQELAYF 131-145P28 IGVNQELAYFYPELF 136-150P29 ELAYFYPELFRQFYQ 141-155P30 YPELFRQFYQLDAYP 146-160P31 RQFYQLDAYPSGAWY 151-165P32 LDAYPSGAWYYVPLG 156-170P33 SGAWYYVPLGTQYTD 161-175P34 YVPLGTQYTDAPSFS 166 – 180P35 TQYTDAPSFSDIPNP 171-185P36 APSFSDIPNPIGSEN 176-190P37 DIPNPIGSENSEKTT 181-195สมุดรายวันของนมวิทยาศาสตร์ปี 96 ฉบับ 11, 2013รหัสกรดอะมิโนสำคัญตกโดยการวิเคราะห์การสแกนอะลานีน 6873รูปที่ 1 Immunoglobulin E-ผูก epitopes ของ αs1 CN จำนวน 37 เปปไทด์ถูกรู้จัก โดยนโยบาย 6 แกน x แทนรหัสของเปปไทด์ 37 แกน y แทนความหนาแน่นออปติคอล (OD) ไม่รู้จักลำดับที่ AA 126 ที่ 140 รหัสเป็น P26, 6 นโยบาย 6จากวัวนมแพ้ (CMA) ผู้ป่วย ลำดับที่ AA 6 ที่ 20 รหัสเป็น P02 AA 76 ถึง 90 รหัส P16 เป็น และ 171 AA ไป 185 เขียนเป็นP35 ได้รู้จัก 5 จะ 6 จาก CMA ผู้ป่วย ลำดับที่ AA 11 ที่ 25 รหัส P03 เป็นที่รู้จัก 4 นโยบาย 6 จาก CMAผู้ป่วย แถบข้อผิดพลาดแทน SEM (n = 4)รูปที่ 2 Immunoglobulin G ผูก epitopes ของ αs1 CN แกน x แสดงถึงรหัสของเปปไทด์ 37 แกน y แทนที่แสงความหนาแน่น (OD); เปปไทด์ 37 ได้รู้จัก 6 จะ ลำดับของ AA21 ที่ 35 รหัสเป็น P05 AA56 กับ 70 รหัสเป็น P12 และ AA161 ไป 175รหัสเป็น P33 ได้รู้จัก 5 จะ 6 จากวัวนมแพ้ (CMA) ผู้ป่วย แถบข้อผิดพลาดแทน SEM (n = 4)6874 คอ ET ALสมุดรายวันของนมวิทยาศาสตร์ปี 96 ฉบับ 11, 2013รัฐ αs1 CN epitopes รวมทั้งนายสุภัคหลังจากที่ได้ทดแทนอะลานีนอาร์จินีนที่ตำแหน่ง 22และ phenylalanine ที่ตำแหน่ง 23สนทนาหลายการศึกษาได้ระบุว่า IgE โดยตรงกับเศษส่วนเคซีนในวัว นมปรากฏให้หลักในเด็กและผู้ใหญ่กับ CMA เทียบรุ่นเก่ามีเด็ก (Elsayed, 1993 Elsayed ร้อยเอ็ดal., 2004a) อย่างไรก็ตาม หลายอื่น ๆ ศึกษา (Rowntreeและ al., 1985 Stöger และ Wüthrich, 1993 Jenmalm และBjörkstén, 1999 Sicherer และ Sampson, 1999 Eysinkและ al., 2002) รายงานว่า เด็ก atopic มีสูงระดับ IgG แอนตี้ย่อย (โดยเฉพาะอย่างยิ่ง IgG4) เพื่อนมและไข่มากกว่าเด็ก nonatopic ImmunoglobulinG แอนติบอดีตอบสนองต่อนมวัวลดลงด้วยอายุจาก 1 ปีเป็นต้นไป คำถามถ้า IgG เพื่ออาหารอาจเป็นประโยชน์เป็นเครื่องหมายการเริ่มต้นสำหรับการพัฒนาของโรคภูมิแพ้ IgE mediated ยังคงเปิด (Homburger etal., 1986) ในการศึกษาปัจจุบัน IgE และ IgG-ผูกทั้งระบุ epitopes ของ αs1 CN Immunotherapeuticวิธีที่ใช้แทน IgG epitopes เปปไทด์อาจสามารถเปลี่ยนสมดุลของตรวจหาเฉพาะการผลิตแอนติบอดีจาก IgE กับ IgG เราอยู่ในขณะนี้ระบุที่ epitopes IgE ผูกยังผูกIgG หากลยุทธ์ immunotherapeutic เป็นไปได้สำหรับการผู้ป่วยที่ มีวัวนมที่ไวต่อยารูปที่ 3 AA เดียวเปลี่ยนเป็นเพปไทด์ที่ AA 11 กับ 25 ผลการสูญหายของ IgE ผูกกับ epitope นี้ เพปไทด์ที่ AA 11-25ถูกสังเคราะห์กับสารตกค้างอะลานีนเป็นหนึ่งของ AA ทดแทนในเพปไทด์นี้ และพิสูจน์กับกลุ่มเซรั่ม IgE จากผู้ป่วย 6มีปัญหาแพ้นมวัว ตัวอักษรด้านล่างของแต่ละแถบบ่งชี้รหัส AA 1-จดหมายสำหรับสารตกค้างในตำแหน่งที่ปกติ และAA ที่ถูกนำมาใช้แทนสารตกค้างนี้ หมายเลขบ่งชี้ตำแหน่งของแต่ละสารตกค้างในโปรตีน αs1 CN บ่งชี้ว่า กลุ่มควบคุมepitope เจ้า (ไม่ AA แทน) OD =ความหนาแน่นออปติคัลรุ่นสีที่มีในไฟล์ PDF ออนไลน์รูปที่ 4 AA เดียวเปลี่ยนเป็นเพปไทด์ที่ AA 21 ถึง 35 เกิดการสูญหายของ IgG ผูกกับ epitope นี้ เพปไทด์ที่ AA 21 ถึง 35 มีสังเคราะห์กับสารตกค้างอะลานีนเป็น AA ในหนึ่งทดแทนเพปไทด์นี้ และพิสูจน์กับกลุ่มเซรั่ม IgE จาก 6 ผู้ป่วยมีการแพ้นมวัว ระบุตัวอักษรด้านล่างของแถบแต่ละรหัส AA 1-จดหมายสำหรับสารตกค้างที่ตำแหน่งนั้นและ AA ปกติที่ถูกแทนที่สำหรับสารตกค้างนี้ หมายเลขบ่งชี้ตำแหน่งของแต่ละสารตกค้างในโปรตีน αs1 CN บ่งชี้ว่า กลุ่มควบคุมepitope เจ้า (ไม่ AA แทน) OD =ความหนาแน่นออปติคัล สีรุ่นที่มีในไฟล์ PDF ออนไลน์ตารางที่ 2 ลำดับ AA ของ αs1 CN11 0 2 0 3 0 4 0R P K H P ผม K H Q G L P Q E V L N E N L L R F F V เป็น P F P E V F G K E K V N E L5 0 6 0 7 0 8 0S K D ฉัน G S E S T E D Q M E D ฉัน K Q M E E S ฉัน S S S E E ฉัน V P N S V E Q K H9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0ฉัน Q K E D V P S E R Y L G Y L E Q L L R L K K Y K V P Q L E ฉัน V P N S กับ E E R L1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0H S M K E G H ฉันเป็น Q Q K E P M ฉัน G V N Q E L Y F Y P E L F R Q F Y Q L D Y P1 7 0 1 8 0 1 9 0G S กับ W Y Y V P L G T Q Y T D P S F S D ไอพี N P ฉัน G S E N S E K T T M P L Wหมายเลข 1The ระบุตำแหน่งของแต่ละสารตกค้างในโปรตีน αs1 CN ลำดับกรดอะมิโนเป็นตัวหนาบ่งชี้รวม IgE

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผล
การสังเคราะห์เปปไทด์
ในการกำหนดลำดับ AA ของ IgE- และ IgGbinding
เว็บไซต์ 37 เปปไทด์ที่ทับซ้อนกันทอดαs1-CN
ถูกสังเคราะห์ (แสดงในตารางที่ 1) โดยการสังเคราะห์
เปปไทด์ที่ได้รับการชดเชยจากแต่ละอื่น ๆ โดย 5 AA,
มันเป็นไปได้ที่จะระบุ IgE- บุคคลและ IgGbinding
epitopes ภายในภูมิภาคขนาดใหญ่ของαs1-CN
โมเลกุล เปปไทด์แต่ละคน 15 AA ยาว เปปไทด์ทั้งหมด
ถูกบริสุทธิ์โดย C18 HPLC กลับเฟส.
IgE-Binding Epitope
ชุดของ 37 เปปไทด์แต่ละคนได้รับการตรวจสอบเป็นรายบุคคลกับ
IgE ในซีรั่มจาก 6 ผู้ป่วยที่แตกต่างกัน epitope สามารถ
ได้รับการพิจารณา immunodominant ถ้ามันเป็นที่ยอมรับโดย
ด้านบนซีรั่ม 65% IgE จากเสียงส่วนใหญ่ของผู้ป่วย
ที่มีโรคภูมิแพ้นมวัว ความเข้มของ IgE
ผูกพันกับแต่ละเปปไทด์ที่ถูกกำหนดเป็นหน้าที่
ของ IgE รวมของผู้ป่วยที่มีผลผูกพันเหล่านี้ 37 เปปไทด์
(แสดงในรูปที่ 1) แอนติบอดี immunoglobulin E
จาก 6 ผู้ป่วยแสดงให้เห็นว่ามีผลผูกพันไปอย่างน้อย 1 เปปไทด์เชิงเส้น
37 เปปไทด์ที่ได้รับการยอมรับจาก 6 ซีรั่ม ซีรั่ม
IgE จากผู้ป่วยไม่มี 1 ได้รับการยอมรับเปปไทด์ P01, P02,
6872 Công et al.
วารสารวิทยาศาสตร์ฉบับนม 96 ฉบับที่ 11, 2013
P03, P16, P18, P26 และ P35 ซีรั่ม IgE จาก
ผู้ป่วยที่เหลือได้รับการทดสอบในลักษณะเดียวกัน.
ลำดับที่ AA 126-140 เป็นที่ยอมรับโดย 6
จาก 6 ซีรั่มจากผู้ป่วย CMA ลำดับที่ AA 6
ถึง 20, AA 76-90, AA 171-185 ได้รับการยอมรับโดย
5 จาก 6 ซีรั่มจากผู้ป่วยนมวัว ลำดับที่
AA 11-25 เป็นที่ยอมรับโดย 4 จากทั้งหมด 6 ซีรั่มจาก CMA
ผู้ป่วย เปปไทด์อื่น ๆ (P18, P07, P20 และ P22) ได้รับ
การยอมรับจากซีรั่มไม่กี่จากผู้ป่วย CMA ซีรั่มจาก
เด็กที่ไม่ได้นมแพ้แสดงให้เห็นปฏิกิริยาอ่อนแอกับ
เปปไทด์สังเคราะห์ไม่มีข้อมูลที่ถูกแสดงให้เห็นในบทความนี้.
IgG-Binding Epitope
ความเข้มของ IgG ผูกพันกับเปปไทด์แต่ละคนถูก
กำหนดเป็นหน้าที่ของ IgG รวมของผู้ป่วยที่
มีผลผูกพันเหล่านี้ 37 เปปไทด์ (แสดงในรูปที่ 2); 37
เปปไทด์ที่ได้รับการยอมรับจาก 6 ซีรั่ม ลำดับของ
AA 21-35, AA 56-70 และ AA 161-175 ได้รับ
การยอมรับจาก 5 ของซีรั่ม 6 ของผู้ป่วย นอกจากนี้
เปปไทด์ 81VPSERYLGYLEQLLR95, 126GIHAQQKEPMIGVNQ140,
166YVPLGTQYTDAPSFS180, 136IGVNQELAYFYPELF150,
และ 41SKDIGSESTEDQAME55
(ที่เริ่มต้นและสิ้นสุดแทนยก
ตำแหน่งของ AA AA แรกและครั้งสุดท้ายตามลำดับ)
แสดงให้เห็นว่าอ่อนแอผูกพันกับ IgG จากผู้ป่วย CMA '
ซีรั่ม.
ลักษณะของสำคัญ AA ของ
IgE-Binding Epitope ที่ AA 11-25
AA สิ่งสำคัญที่จะมีผลผูกพัน IgE ใน epitope ที่
AA 11-25 ถูกกำหนดโดยการสังเคราะห์ที่ซ้ำกัน
เปปไทด์ที่มีการเปลี่ยนแปลง AA เดียวในแต่ละตำแหน่ง.
เปปไทด์เหล่านี้ได้รับการตรวจสอบแล้วด้วยซีรั่ม pooled
IgE จาก 6 ผู้ป่วยที่มีโรคภูมิแพ้นมวัวเพื่อ
ตรวจสอบว่าได้รับผลกระทบการเปลี่ยนแปลงนมเฉพาะ IgE วัว
ผูกพัน (ผลจะแสดงในรูปที่ 3) Pooled
ซีรั่ม IgE ไม่รู้จักเปปไทด์นี้เมื่ออะลานีน
ถูกสับเปลี่ยนสำหรับ asparagine ที่ 19 ตำแหน่ง, อาร์จินี
วันที่ 22 ตำแหน่งและเฟนนิลที่ 23. ตำแหน่งในทางตรงกันข้าม
แทนอะลานีนสารตกค้าง Leucine
ที่ AA 20 และสารตกค้าง glutamine ที่ AA 18 ผล ใน
IgE ที่เพิ่มขึ้นมีผลผูกพัน ความเข้มของ IgE ผูกพันของ
เปปไทด์ที่ซ้ำกันอื่น ๆ ที่แสดงให้เห็นว่าไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ
เมื่อเทียบกับ epitopes พื้นเมือง ดังนั้น AA
ตกค้างของ Asn19, Arg22 และ Phe23 เล่นที่สำคัญ
บทบาทสำคัญในการภูมิแพ้ของαs1-CN.
ลักษณะของ AA สำคัญของ
IgG-Binding Epitope ที่ AA 21-35
เพื่อระบุ AA สำคัญสำหรับ IgG ผูกพันใน
ลำดับ ของ AA 21-35, ชุดของเปปไทด์ที่เกี่ยวข้อง
กับถูกสังเคราะห์แทนอะลานีนในแต่ละ
ตำแหน่งของ epitope 15-Mer และ IgG ผูกพันของพวกเขา
ได้รับการประเมินความสามารถ (รูปที่ 4) การสูญเสียที่สำคัญของ
IgG ผูกพันเป็นข้อสังเกตหลังจากที่อะลานีนถูกสับเปลี่ยน
สำหรับ Arg22, Phe23 และรุ่น PRO27 ทดแทน Leucine
ที่ 21 ตำแหน่งฟีนิลที่ 24 ตำแหน่ง, อะลานีน
ที่ 26 ตำแหน่ง, กรดกลูตามิวันที่ 30 ตำแหน่งที่ไกลซีน
33 ตำแหน่งและไลซีนที่ตำแหน่ง 34 กับอะลานีนนอกจากนี้ยัง
มีผลในการ IgG ลดลงมีผลผูกพัน ทดแทนอื่น ๆ
ตำแหน่งบนเปปไทด์นี้ไม่ก่อให้เกิดความสอดคล้อง
การลดลงของ IgG มีผลผูกพัน ดังนั้น Arg22, Phe23 และ
รุ่น PRO27 ได้รับการพิจารณาเป็น AA สำคัญของ IgGbinding
epitope.
ภูมิคุ้มกันความสัมพันธ์ระหว่าง IgEand
IgG-Binding epitopes
ห้า AA ทับซ้อนภูมิภาค (AA 21-25, AA 171-175)
พบว่าข้ามทำปฏิกิริยากับ IgE และ IgG (แสดงใน
ตารางที่ 2) นอกจากนี้ยังมีการสูญเสียที่สำคัญของ IgE- และ IgGTable
1 ห้องสมุดของเปปไทด์ที่ขึ้นอยู่กับลำดับของαs1-CN
เพปไทด์
หมายเลข
ลำดับ
สังเคราะห์
ตำแหน่ง AA
ในαs1-CN
P01 RPKHPIKHQGLPQEV 1-15
P02 IKHQGLPQEVLNENL 6-20
P03 LPQEVLNENLLRFFV 11-25
P04 LNENLLRFFVAPFPE 16-30
P05 LRFFVAPFPEVFGKE 21-35
P06 APFPEVFGKEKVNEL 26 -40
P07 VFGKEKVNELSKDIG 31-45
P08 KVNELSKDIGSESTE 36-50
P09 SKDIGSESTEDQAME 41-55
P10 SESTEDQAMEDIKQM 46-60
P11 DQAMEDIKQMEAESI 51-65
P12 DIKQMEAESISSSEE 56-70
P13 EAESISSSEEIVPNS 61-75
P14 SSSEEIVPNSVEQKH 66-80
P15 IVPNSVEQKHIQKED 71-85
P16 VEQKHIQKEDVPSER 76 -90
P17 IQKEDVPSERYLGYL 81-95
P18 VPSERYLGYLEQLLR 86-100
P19 YLGYLEQLLRLKKYK 91-105
P20 EQLLRLKKYKVPQLE 96-110
P21 LKKYKVPQLEIVPNS 101-115
P22 VPQLEIVPNSAEERL 106-120
P23 IVPNSAEERLHSMKE 111-125
P24 AEERLHSMKEGIHAQ 116-130
P25 HSMKEGIHAQQKEPM 121-135
P26 GIHAQQKEPMIGVNQ 126 -140
P27 QKEPMIGVNQELAYF 131-145
P28 IGVNQELAYFYPELF 136-150
P29 ELAYFYPELFRQFYQ 141-155
P30 YPELFRQFYQLDAYP 146-160
P31 RQFYQLDAYPSGAWY 151-165
P32 LDAYPSGAWYYVPLG 156-170
P33 SGAWYYVPLGTQYTD 161-175
P34 YVPLGTQYTDAPSFS 166-180
P35 TQYTDAPSFSDIPNP 171-185
P36 APSFSDIPNPIGSEN 176 -190
P37 DIPNPIGSENSEKTT 181-195
วารสารวิทยาศาสตร์ฉบับนม 96 ฉบับที่ 11, 2013 ที่
ขวิจารณญาณกรดอะมิโนที่ตกค้าง BY อะลานีนการสแกนการวิเคราะห์ 6873
รูปที่ 1 อิมมูโน E-ผูกพัน epitopes ของαs1-CN ทั้งหมด 37 เปปไทด์ที่ได้รับการยอมรับจาก 6 ซีรั่ม แกน x แสดงถึงรหัส
ของเปปไทด์ 37; แกน y หมายถึงความหนาแน่นของแสง (OD) ลำดับที่ AA 126 ถึง 140, กำหนดเป็น P26, เป็นที่ยอมรับโดย 6 จากทั้งหมด 6 ซีรั่ม
จากวัวนมแพ้ (CMA) ผู้ป่วย ลำดับที่ AA 6-20, กำหนดเป็น P02; AA 76-90, กำหนดเป็น P16; และเอเอ 171-185, กำหนดเป็น
P35, ได้รับการยอมรับโดย 5 จาก 6 ซีรั่มจากผู้ป่วย CMA ลำดับที่ AA 11 ถึง 25, กำหนดเป็น P03, เป็นที่ยอมรับโดย 4 จากทั้งหมด 6 ซีรั่มจาก CMA
ผู้ป่วย บาร์ข้อผิดพลาดเป็นตัวแทนของ SEM (n = 4).
รูปที่ 2 อิมมูโน G-ผูกพัน epitopes ของαs1-CN แกน x แสดงถึงรหัสของเปปไทด์ 37; แกน y หมายถึงแสง
ความหนาแน่น (OD); 37 เปปไทด์ที่ได้รับการยอมรับจาก 6 ซีรั่ม ลำดับของ AA21 ถึง 35, กำหนดเป็น P05; AA56 ถึง 70, กำหนดเป็น P12; และ AA161 ถึง 175,
กำหนดเป็น P33, ได้รับการยอมรับโดย 5 จาก 6 ซีรั่มจากวัวนมแพ้ (CMA) ผู้ป่วย บาร์ข้อผิดพลาดเป็นตัวแทนของ SEM (n = 4).
6874 Công et al.
วารสารวิทยาศาสตร์ฉบับนม 96 ฉบับที่ 11, 2013
epitopes ผูกพันทอดαs1-CN ทั้งสองสังเกต
หลังจากที่อะลานีนถูกสับเปลี่ยนสำหรับ arginine ที่ตำแหน่ง 22
และเฟนนิลที่ 23 ตำแหน่ง.
อภิปราย
งานวิจัยหลายชิ้นชี้ให้เห็นว่า IgE กำกับ
กับเศษส่วนเคซีนในนมวัวที่ดูเหมือนจะ
โดดเด่นในรุ่นเก่า เด็กและผู้ใหญ่ที่มี CMA เมื่อเทียบ
กับเด็กที่อายุน้อยกว่า (Elsayed, 1993; Elsayed และ
al., 2004a) อย่างไรก็ตามการศึกษาอื่น ๆ อีกหลาย (Rowntree
et al, 1985;. สโตเกอร์และWüthrich 1993; Jenmalm และ
Björkstén 1999; Sicherer และจอห์น, 1999; Eysink
et al., 2002) รายงานว่าเด็กภูมิแพ้ได้สูง
ระดับรอง IgG (โดยเฉพาะอย่างยิ่ง IgG4) แอนติบอดีเพื่อ
นมและไข่กว่าเด็ก nonatopic อิมมูโน
G ตอบสนองแอนติบอดีนมวัวลดลงตาม
อายุตั้งแต่ 1 ปีเป็นต้นไป คำถามถ้า IgG อาหาร
อาจจะมีประโยชน์เป็นเครื่องหมายต้นสำหรับการพัฒนา
ของโรคภูมิแพ้ IgE-mediated การยังคงเปิด (Homburger และ
al., 1986) ในการศึกษาปัจจุบัน IgE- และ IgG ผูกพัน
epitopes ของαs1-CN ทั้งสองระบุ immunotherapeutic
วิธีการใช้เปปไทด์ที่เป็นตัวแทนของ epitopes IgG
อาจจะไม่สามารถที่จะเปลี่ยนความสมดุลของแอนติเจนเฉพาะ
ผลิตแอนติบอดีจาก IgE เพื่อ IgG ขณะนี้เรากำลัง
การระบุว่า epitopes IgE-ผูกพันยังผูก
IgG ที่จะหากลยุทธ์ immunotherapeutic เป็นไปได้สำหรับ
ผู้ป่วยที่มีโรคภูมิแพ้นมวัว.
รูปที่ 3 การเปลี่ยนแปลง AA เดี่ยวให้เปปไทด์ที่ AA 11-25 ส่งผล
ในการสูญเสียของ IgE ผูกพันนี้ epitope เปปไทด์ที่ AA 11-25
ถูกสังเคราะห์ที่มีสารตกค้างอะลานีนแทนหนึ่ง AA
ในเปปไทด์นี้และการตรวจสอบที่มีสระว่ายน้ำของ IgE ในซีรั่มจาก 6 ผู้ป่วย
ที่มีอาการแพ้นมวัว ตัวอักษรข้ามด้านล่างของแต่ละแถบบ่งบอกถึง
รหัส AA 1 ตัวอักษรสำหรับสารตกค้างตามปกติที่ตำแหน่งนั้นและ
AA ที่ถูกแทนที่เหลือนี้ หมายเลขระบุ
ตำแหน่งของแต่ละสารตกค้างในโปรตีนαs1-CN กลุ่มควบคุมบ่งชี้
epitope พื้นเมือง (ไม่มีการเปลี่ยนตัวผู้เล่น AA) OD = ความหนาแน่นของออปติคอล.
รุ่นสีที่มีอยู่ในรูปแบบไฟล์ PDF ออนไลน์.
รูปที่ 4. การเปลี่ยนแปลงโสด AA ถึงเปปไทด์ที่ AA 21-35 ส่งผล
ในการสูญเสียของ IgG ผูกพันกับ epitope นี้ เปปไทด์ที่ AA 21-35 ถูก
สังเคราะห์ที่มีสารตกค้างอะลานีนแทนหนึ่ง AA ใน
เปปไทด์นี้และการตรวจสอบที่มีสระว่ายน้ำของ IgE ในซีรั่มจาก 6 ผู้ป่วยที่มี
อาการแพ้นมวัว ตัวอักษรข้ามด้านล่างของแต่ละแถบระบุ
รหัส AA 1 ตัวอักษรสำหรับสารตกค้างตามปกติที่ตำแหน่งนั้นและ AA
ที่ถูกแทนที่เหลือนี้ หมายเลขระบุตำแหน่ง
ของแต่ละสารตกค้างในโปรตีนαs1-CN กลุ่มควบคุมบ่งชี้
epitope พื้นเมือง (ไม่มีการเปลี่ยนตัวผู้เล่น AA) OD = ความหนาแน่นของออปติคอล สีของ
รุ่นที่มีอยู่ในรูปแบบไฟล์ PDF ออนไลน์.
ตารางที่ 2 ลำดับ AA ของαs1-CN1
1 0 2 0 3 0 4 0
R PKHPIKHQGLPQEVLNENLLR FFVAPFPEVFGKEKVNEL
5 0 6 0 7 0 8 0
S KDIGSESTEDQAMEDIKQMEA ESISSSEEIVPNSVEQKH
9 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0
ฉัน QKEDVPSERYLGYLEQLLRLK KYKVPQLEIVPNSAEERL
1 3 0 1 4 0 1 5 0 1 6 0
H SMKEGIHAQQKEPMIGVNQEL AYFYPELFRQFYQLDAYP
1 7 0 8 1 0 1 0 9
S GAWYYVPLGTQYTDAPSFSDI PNPIGSENSEKTTMPLW
หมายเลข 1 รูปแบบที่ระบุตำแหน่งของแต่ละสารตกค้างในโปรตีนαs1-CN ลำดับกรดอะมิโนในใจถึงระบุ IgE-ผูกพัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลการสังเคราะห์เปปไทด์เพื่อกำหนดลำดับ AA ของ IgE และ iggbinding
เว็บไซต์ 37 ซ้อนทอดα S1 cn
เปปไทด์สังเคราะห์ ( แสดงในตารางที่ 1 ) โดยสังเคราะห์
เปปไทด์ที่ถูกชดเชยจากแต่ละอื่น ๆโดย 5 AA ,
มันเป็นไปได้ที่จะระบุ IgE - บุคคลและ iggbinding
จากภายในภูมิภาคขนาดใหญ่ของα S1 cn
โมเลกุล แต่ละเปปไทด์คือ 15 AA ยาว เปปไทด์
ทั้งหมดที่ได้ทำให้บริสุทธิ์โดย c18 กลับเฟส HPLC .
IgE การจับไวรัส
ชุดละ 37 เปปไทด์ถูกตรวจสอบเป็นรายบุคคลกับ
เซรั่ม IgE จากผู้ป่วยที่แตกต่างกัน 6 . เป็นไวรัสที่สามารถได้รับการพิจารณา immunodominant

ถ้ามันได้รับการยอมรับโดย IgE ซีรั่มเหนือ 65% จากส่วนใหญ่ของผู้ป่วย
กับภูมิแพ้นมวัว ความเข้มของ IgE
ผูกพันกับแต่ละเปปไทด์ถูกกำหนดเป็นฟังก์ชัน
ของคนไข้ทั้งหมด IgE ผูกเหล่านี้ 37 เปป
( แสดงในรูปที่ 1 ) อิมมูโนโกลบูลิน E (
6 ผู้ป่วยพบผูกอย่างน้อย 1 เส้นเปปไทด์ เปปไทด์ ;
37 ได้รับ โดยมี 6 ราย เซรั่ม
IgE จากผู้ป่วย 1 รู้จักเปป P01 P02
, , 6872 กง et al . วารสารวิทยาศาสตร์ ฉบับที่ 96
นมฉบับที่ 11 2013
P01 มีชีวิต p18 p26 , , , , และของ . เซรั่ม
IgE จากผู้ป่วยที่เหลือได้ทำการทดสอบในลักษณะเดียวกัน
ลำดับที่ AA 126 140 รู้จัก 6
6 รายจากผู้ป่วย CMA . ลําดับที่ AA 6
20 , AA 76 ถึง 90 , AA , 185 ได้รับการยอมรับโดย
5 6 ราย จากผู้ป่วย นมวัว ลําดับที่ 11
25 รู้จัก 4 6 ( CMA )

เปปไทด์อื่นๆ ( p18 p07 p20 , , , และ p22 )
รู้จักไม่กี่รายจากผู้ป่วย CMA . ซีรั่มน้ำนมไม่แพ้เด็กอ่อน

มีปฏิกิริยากับสารสังเคราะห์ ไม่มีข้อมูลที่พบในกระดาษนี้

ปกติไวรัสผูกพันความเข้มของ IgG ผูกพันกับแต่ละเปปไทด์คือ
กำหนดเป็นฟังก์ชันของคนไข้ทั้งหมด IgG
ผูกเหล่านี้ 37 เปปไทด์ ( แสดงในรูปที่ 2 ) ; 37
เปป ได้รับการยอมรับโดย 6 ราย ลำดับ
AA 21 ถึง 35 , AA 56 70 และ AA 161 175 ถูก
รู้จัก 5 ( 6 ) ' นอกจากนี้ เปปไทด์ 81vpserylgyleqllr95 126gihaqqkepmigvnq140

, , 166yvplgtqytdapsfs180 136igvnqelayfypelf150 41skdigsestedqame55

, , และที่จุดเริ่มต้นและสิ้นสุด superscripts เป็นตัวแทน
ตำแหน่ง AA ของครั้งแรกและครั้งสุดท้าย AA ตามลำดับ )
ให้อ่อนแอ ผูกพัน กับ IgG จาก CMA ผู้ป่วย

เซราลักษณะของวิกฤต AA ของ
IgE ผูกไวรัสที่ AA 11 25
AA สรุป IgE ผูกพันในไวรัสที่
11 25 ถูกกำหนดโดยการสังเคราะห์เปปไทด์ซ้ำ
เปลี่ยนแปลง AA เดียวในแต่ละตำแหน่ง เปปไทด์เหล่านี้ถูกตรวจสอบแล้ว

รวมเซรั่ม IgE จาก 6 ผู้ป่วยภูมิแพ้ นม วัว

หาเปลี่ยนผลกระทบเฉพาะ IgE
วัวนมมัด ( ผลลัพธ์จะแสดงในรูปที่ 3 )
รวมเซรั่ม IgE ไม่รับรู้ เปปไทด์นี้เมื่อนกนางนวล
ถูกทดแทน asparagine ที่ตำแหน่ง 19 ตำแหน่งอาร์
ที่ 22 และ phenylalanine ที่ตำแหน่ง 23 ในทางตรงกันข้าม
การแทนที่ของอะลานีนสำหรับลูซีนตกค้าง
ที่ AA 20 และ Glutamine ตกค้างที่ 18 AA (
( IgE เข้าเล่ม ความเข้มของ IgE (
เปปไทด์ที่ซ้ำกันอื่น ๆ พบว่า crude
เมื่อเทียบกับเจ้าของภาษา ดังนั้น การตกค้างของ asn19 arg22 AA
, ,
phe23 และมีบทบาทสำคัญใน allergenicity ของα S1 CN .
ลักษณะของวิกฤต AA ของ
IgG ผูกไวรัสที่ 21 AA ถึง 35
ระบุ AA อย่าง IgG ผูกพันใน
ลำดับ 21 AA 35 ชุด ที่เกี่ยวข้องกับ
เปปไทด์สังเคราะห์กับแทนอะลานีนที่แต่ละตำแหน่งของ 15
แมร์ไวรัสและ IgG ผูกพัน
ความสามารถประเมิน ( รูปที่ 4 ) การสูญเสียที่สำคัญของ IgG พบว่าหลังจากการ

สำหรับ arg22 อะลานีนถูกทดแทน phe23 , และ pro27 . การทดแทนตำแหน่งต่างๆ
ที่ 21 , ฟีนิลอะลานีนที่ตำแหน่ง 24 ตำแหน่ง
ที่ 26 , glutamic acid ที่ตำแหน่ง 30 , Glycine ที่
ตำแหน่ง 33 ,และไลซีนที่ตำแหน่ง 34 กับอะลานีนนอกจากนี้
( ลดลง IgG ที่มีผลผูกพัน การมีตำแหน่งอื่นในเปปไทด์นี้ ไม่เกิด

ลดลงสอดคล้องกันในกลุ่มที่มีผลผูกพัน ดังนั้น arg22 phe23 , ,
pro27 ถูกถือว่าเป็นวิกฤต AA ของไวรัส iggbinding
.
ความสัมพันธ์ระหว่างกลุ่มผู้ป่วย การ igeand

ห้าผูก AA ซ้อนภูมิภาค ( 21 – 25 AA AA 171 - 175 )
พบปฏิกิริยาข้ามกับ IgE และ IgG ( แสดงใน
ตารางที่ 2 ) นอกจากนี้ จากผลขาดทุนของ IgE และ iggtable
1 ห้องสมุดของเปปไทด์จากลำดับของα S1


ลำดับเลขที่ CN เปปไทด์สังเคราะห์ตำแหน่ง


ในα S1 cn
P01 rpkhpikhqglpqev 1 – 15 – 20
6
P02 ikhqglpqevlnenl P01 lpqevlnenllrffv 21 – 25

p05 P04 lnenllrffvapfpe 16 – 30 lrffvapfpevfgke 21 – 22
p06 apfpevfgkekvnel 26 – 40
p07 31 vfgkekvnelskdig – 45
p08 kvnelskdigseste 36 – 50 skdigsestedqame 41 – 55

p09 P10 sestedqamedikqm 46 – 60
P11 dqamedikqmeaesi 51 – 65
p12 dikqmeaesisssee 56 และ 70

p14 P13 eaesissseeivpns 61 - 75 - 80 ssseeivpnsveqkh 66 71 - 85

P15 ivpnsveqkhiqked มีชีวิต veqkhiqkedvpser 76 – 90
p17 iqkedvpserylgyl 81 จำกัด 95
p18 vpserylgyleqllr 86 – 100
p19 ylgyleqllrlkkyk 91 – 105 – 110

p20 eqllrlkkykvpqle 96ความแปรปรวนทางอารมณ์ lkkykvpqleivpns 101 - 115 - 120

p22 vpqleivpnsaeerl 106 p23 ivpnsaeerlhsmke 111 – 125
p24 aeerlhsmkegihaq 116 – 121 – 130
p25 hsmkegihaqqkepm 135
p26 gihaqqkepmigvnq 126 – 140
p27 qkepmigvnqelayf 131 – 145
p28 igvnqelayfypelf 136 - 150
p29 elayfypelfrqfyq 141 – 155
p30 ypelfrqfyqldayp 146 – 160
p31 rqfyqldaypsgawy 151 จำกัด 165
p32 ldaypsgawyyvplg 156 – 170 ของ sgawyyvplgtqytd 161 – 175

P34 yvplgtqytdapsfs 166 – 180

p36 ของ tqytdapsfsdipnp 171 ( 185 apsfsdipnpigsen 176 – 190
p37 dipnpigsensektt 181 - 195
วารสารวิทยาศาสตร์น้ำนม เล่มที่ 96 ฉบับที่ 11 2013
รหัสของกรดอะมิโน Alanine ตกค้างโดยการสแกนวิเคราะห์ 6873
1 รูป อิมมูโนโกลบูลิน e-binding จากของα S1 cn ทั้งหมด 37 เปปไทด์ถูกยอมรับโดย 6 ราย แกน x แสดงรหัส
37 เปปไทด์ ;ส่วนแกน Y แสดงถึงความหนาแน่นของแสง ( OD ) ลําดับที่ AA 126 ถึง 140 , รหัสเป็น p26 ถูกยอมรับโดย 6
6 รายจากนมวัวแพ้ ( CMA ) ผู้ป่วย ลําดับที่ AA 6 ถึง 20 ขั้น รหัส P02 ; AA 76 ถึง 90 , รหัสเหมือนมีชีวิต และ AA 171 ถึง 185 , รหัสเป็น
ของ , ได้รับการยอมรับโดย 5 6 ราย จากผู้ป่วย CMA . ลําดับที่ เอเอ 11 ถึง 25 , รหัส P01 การเป็น , 4 6 ( CMA
ผู้ป่วย แถบข้อผิดพลาดของ SEM ( n = 4 ) .
รูปที่ 2 อิมมูโนโกลบูลิน g-binding จากของα S1 cn แกน x แสดงรหัส 37 เปปไทด์ ; แกน Y แสดงแสง
ความหนาแน่น ( OD ) ; 37 เปปไทด์ถูกยอมรับโดย 6 ราย ลำดับของ aa21 35 รหัสเป็น p05 ; aa56 70 , รหัสเป็น p12 และ aa161 175
ของรหัสเป็น ,ได้รับการยอมรับโดย 5 6 ( นมวัวแพ้ ( CMA ) ผู้ป่วย แถบข้อผิดพลาดของ SEM ( n = 4 )
6874 กง et al . วารสารวิทยาศาสตร์ ฉบับที่ 96
นมฉบับที่ 11 2013
ผูกพันจากสแปα S1 CN ทั้งคู่สังเกต
หลังจากอะลานีนถูกทดแทนอาร์จินีนที่ตำแหน่ง 22
และ phenylalanine ที่ตำแหน่ง 23

หลายการศึกษาพบว่า การอภิปราย ไอจีโดย
กับเคซีนในน้ำนมจะปรากฏเป็นเศษส่วน
เด่นในเด็กและผู้ใหญ่ที่มีพลังเทียบ
กับเด็ก ( elsayed , 1993 ;
elsayed et al . , 2004a ) อย่างไรก็ตาม การศึกษาอื่น ๆหลาย ( Rowntree
et al . , 1985 ; St ö GER และ W ü thrich , 1993 ; jenmalm และ
BJ ö rkst é n , 1999 ; และ sicherer แซมพ์สัน , 1999 ; eysink
et al . , 2002 ) รายงานว่า เด็กมีสูง
แบบระดับของ IgG subclass ( โดยเฉพาะอย่างยิ่งเล็กน้อย (

) นมและไข่กว่าเด็ก nonatopic . แอนติบอดีต่ออิมมูโนโกลบูลิน
g
อายุวัวนมลดลงจาก 1 ปี เป็นต้นไป คำถาม ถ้ากลุ่มอาหาร
อาจจะมีประโยชน์เป็นเครื่องหมายแรกสำหรับการพัฒนาของ IgE ( แพ้ยังคงเปิด
(
homburger et al . , 1986 ) ในการศึกษาปัจจุบัน IgE และ IgG ผูกพัน
จากของα S1 CN ทั้งสองระบุ แนวทางการใช้สารจาก immunotherapeutic

อาจเป็นตัวแทนของ IgG สามารถกะความสมดุลของการผลิตแอนติบอดี IgE IgG antigen-specific
จากการ . เรากำลัง
ซึ่งมีการระบุของ IgE ผูกพันจากยังผูก
IgG เพื่อค้นหาความเป็นไปได้ immunotherapeutic กลยุทธ์สำหรับผู้ป่วยภูมิแพ้นมวัว
.
รูปที่ 3เดียว AA เปลี่ยนแปลงเปปไทด์ที่เอเอ 11 ถึง 25 ผล
ในการสูญเสียของ IgE ผูกพันกับไวรัสนี้ . เปปไทด์ที่เอเอ 11 ถึง 25
สังเคราะห์กับอะลานีนกากแทนที่หนึ่งของ AA
ในเปปไทด์นี้และตรวจสอบระ serum IgE จาก 6 ผู้ป่วย
โรคภูมิแพ้นม ข้ามตัวอักษรด้านล่างของแต่ละบาร์บ่งชี้
การ 1-letter AA รหัสกากปกติที่ตำแหน่งและ
AA ที่ทดแทนกากนี้ ตัวเลขที่ระบุตำแหน่งของแต่ละ
กากในα S1 CN โปรตีน กลุ่มควบคุม พบว่าไวรัสพื้นเมือง
( ไม่แทนที่ AA ) ซิกแซ็ก OD = .
รุ่นสีที่มีอยู่ในไฟล์ PDF ออนไลน์ .
รูปที่ 4 เดียว AA เปลี่ยนแปลงเปปไทด์ที่ 21 AA ถึง 35 , ผล
ในการสูญเสียของ IgG ผูกพันกับไวรัสนี้ . เปปไทด์ที่ 21 AA ถึง 35 คือ
สังเคราะห์กับอะลานีนกากแทนที่หนึ่งของ AA ใน
นี้เปปไทด์และตรวจสอบระ serum IgE จาก 6 ผู้ป่วย
แพ้นมวัว . ข้ามตัวอักษรด้านล่างของแต่ละบาร์แสดง
1-letter AA รหัสกากปกติที่ตำแหน่งนั้น และ AA
ที่ทดแทนกากนี้ตัวเลขที่ระบุตำแหน่ง
แต่ละสารตกค้างในα S1 CN โปรตีน กลุ่มควบคุม พบว่าไวรัสพื้นเมือง
( ไม่แทนที่ AA ) ซิกแซ็ก OD = . สีรุ่นที่มีอยู่ในไฟล์ PDF ออนไลน์
.
โต๊ะ 2 ลำดับ 4 ของα s1-cn1
1 0 2 0 3 0 4 0
R P K H P I K H Q G L P Q E V L N E N L L R F F V P F P E V E F G K K V N E L
5 0 6 0 7 0 8 0
S K D ชั้น G S E S T E D Q M E D I K Q M e e s i s s s E E N S V V P ฉัน E Q K H
9 0 1 0 0 1 1 0 0 2 0
ผม Q K E D V P S E R Y ชั้น G Y L E Q L L R L k k y k V P Q L E N S E ผม V P E R L
1 0 1 0 1 0 1 5 4 6 0
H M K E G ผม H Q Q K E P M I G N Q E V L Y F Y P E L F R Q F Y Q L D A Y P
1 7 0 1 8 0 1 9 0
s g W Y Y V P l g t Q Y T D A P S F S D ผม P N P S E N S E ชั้น G K t T M L W
p1 ตัวเลขที่ระบุตำแหน่งของแต่ละสารตกค้างในα S1 CN โปรตีน ลำดับกรดอะมิโนในตัวบ่งชี้ IgE ผูก