We determined the bilayer-perturbin

We determined the bilayer-perturbing potency of a series of aliphatic alcohols in DC22:1PC lipid bilayers using a gA-based fluorescence assay (37,38). Fig. 1 shows fluorescence time courses demonstrating the effect of 3-pentanol on the quenching (Tl+ influx) rate. Without quencher, the ANTS-loaded LUVs fluoresce with no apparent decay (Fig. 1, A and B, top curve) on this timescale (1 s). When the quencher (Tl+) is added to ANTS-filled LUVs without gA, there is a small instantaneous quenching of extravesicular fluorophore, and a slow reduction in fluorescence due to quencher leakage through the vesicle membrane (Fig. 1, A and B, second and third curves from top). The quencher (Tl+) readily permeates through conducting gA channels (47,48). In the presence of gA, a fraction of the LUVs will have one or more conducting gA channels, and gA monomers may dimerize to form conducting channels during the experiment, leading to quencher influx and reduction in fluorescence (Fig. 1, A and B, fourth curve). The alcohols shift the gA monomer↔dimer equilibrium toward the conducting dimers, leading to more conducting gA channels and faster quencher influx (Fig. 1, A and B, bottom three curves). The quenching rate was quantified (see Supporting Material) (37) and the change in fluorescence quenching as a function of alcohol concentration ([alc]) was determined (Fig. 1 C). At high concentrations, alcohols reduce bilayer stability (12,21) and break down the lipid bilayer barrier properties, causing increased ion permeability (14,15). Therefore, for each alcohol, we tested the maximum concentration used in vesicles without gA to confirm that the alcohols at these concentrations do not by themselves promote significant quencher leakage or vesicle breakdown. We also examined whether the alcohols increase the Tl+ influx rate by promoting Tl+ movement along defects at the channel/bilayer boundary, and found that this was not the case (see Discussion).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เรากำหนดความแรงการเชื่อม bilayer ของแอลิแฟติกแอลกอฮอล์ใน DC22:1PC bilayers ไขมันที่ใช้ทดสอบการเรืองแสงที่ใช้ gA (37,38) รูปที่ 1 แสดงหลักสูตรเวลาเรืองแสงแสดงผลของ 3 pentanol อัตรา (Tl + ไหลเข้า) ชุบ โดย quencher, LUVs มดโหลดเปล่งแสง ด้วยผุไม่ชัดเจน (รูปที่ 1, A และ B เส้นโค้งด้านบน) บนมาตราส่วนเวลานี้ (1 s) เมื่อ quencher (Tl +) เพิ่มเติมมด LUVs โดย gA มีตัวเล็กทันทีดับ extravesicular fluorophore และการลดลงช้าในเรืองแสงเนื่องจาก quencher รั่วซึมผ่านเยื่อหุ้มเวสิเคิล (รูป 1, A และ B สอง และสามเส้นโค้งจากด้านบน) Quencher (Tl +) พร้อมแทรกซึมผ่านทำช่อง gA (47, 48) ใน gA ส่วนของ LUVs จะมีมากกว่า หนึ่งช่อง gA ทำ และ gA อสามารถอาจ dimerize ฟอร์มทำช่องในระหว่างการทดลอง นำไปไหลเข้า quencher และลดในเรืองแสง (รูป 1, A และ B สี่โค้ง) แอลกอฮอล์การเปลี่ยนสมดุลการ monomer↔dimer gA ไปทาง dimers ทำ นำไปเพิ่มเติมดำเนินการช่อง gA และไหลเข้า quencher เร็วขึ้น (1, A และ B รูปล่างโค้งสาม) อัตราการชุบเป็นเชิงปริมาณ (ดูวัสดุเสริม) (37) และการเปลี่ยนแปลงในเรืองแสงดับ ตามกำหนดฟังก์ชันของความเข้มข้นแอลกอฮอล์ ([ด]) (รูป 1 ซ.) ที่ความเข้มข้นสูง แอลกอฮอล์ลดความเสถียร bilayer (12,21) และสลายไขมัน bilayer อุปสรรคคุณสมบัติ ก่อให้เกิดการซึมผ่านของไอออนเพิ่มขึ้น (14,15) ดังนั้น สำหรับแอลกอฮอล์แต่ละ เราทดสอบความเข้มข้นสูงสุดที่ใช้ในถุงโดย gA ยืนยันว่า แอลกอฮอล์ที่ความเข้มข้นเหล่านี้ไม่ได้ ด้วยตนเองส่งเสริม quencher สำคัญรั่วไหลหรือเวสิเคิลแบ่ง เราตรวจสอบว่าแอลกอฮอล์เพิ่มอัตราไหลเข้าของ Tl + โดย Tl + การเคลื่อนไหวตามข้อบกพร่องที่ ช่อง/bilayer และพบว่า เรื่องนี้ไม่กรณี (ดูคำอธิบาย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เรามุ่งมั่นที่แรง bilayer-รบกวนของชุดของแอลกอฮอล์ลิฟาติก DC22 A: 1PC bilayers ไขมันโดยใช้การทดสอบเรืองแสง GA-based (37,38) มะเดื่อ. หลักสูตรที่ 1 แสดงเวลาการเรืองแสงแสดงให้เห็นถึงผลกระทบของ 3 pentanol บนดับ (ไหลบ่าเข้ามา Tl +) อัตรา โดยไม่ต้องดับที่ LUVs มดโหลดเรืองแสงที่ไม่มีการสลายตัวชัดเจน (รูป. 1, A และ B โค้งด้านบน) ในระยะเวลานี้ (1 s) เมื่อดับ (Tl +) จะถูกเพิ่ม LUVs มดที่เต็มไปด้วยโดยไม่ต้อง GA มีดับทันทีเล็ก ๆ ของสารเรืองแสง extravesicular และการลดลงช้าในการเรืองแสงเนื่องจากการรั่วไหลดับผ่านเยื่อถุง (รูป. 1, A และ B ที่สอง และเส้นโค้งที่สามจากด้านบน) ดับ (Tl +) พร้อมแทรกซึมผ่านการดำเนินการช่องจอร์เจีย (47,48) ในการปรากฏตัวของ GA ที่ส่วนของ LUVs ที่จะมีหนึ่งหรือการดำเนินการอื่น ๆ ช่อง GA และโมโนเมอร์ GA อาจ dimerize ในรูปแบบการดำเนินการช่องระหว่างการทดลองนำไปสู่​​การไหลบ่าเข้ามาดับและการลดลงของการเรืองแสง (รูป. 1, A และ B โค้งสี่) แอลกอฮอล์เปลี่ยนmonomer↔dimerสมดุล GA ไปทาง dimers การดำเนินการที่นำไปสู่​​การดำเนินการมากขึ้นช่อง GA และเร็วดับไหลบ่าเข้ามา (รูป. 1, A และ B สามด้านล่างโค้ง) อัตราการดับได้รับการวัด (ดูการสนับสนุนวัสดุ) (37) และการเปลี่ยนแปลงในการเรืองแสงดับเป็นหน้าที่ของความเข้มข้นของแอลกอฮอล์ ([ALC]) ที่ถูกกำหนด (รูป. 1 C) ที่ความเข้มข้นสูง, แอลกอฮอล์ลดความมั่นคง bilayer (12,21) และทำลายลงคุณสมบัติไขมัน bilayer อุปสรรคที่ก่อให้เกิดการซึมผ่านของไอออนเพิ่มขึ้น (14,15) ดังนั้นสำหรับแต่ละเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ที่เราทดสอบความเข้มข้นสูงสุดที่ใช้ในถุงโดยไม่ต้อง GA เพื่อยืนยันว่าแอลกอฮอล์ความเข้มข้นเหล่านี้ทำไม่ได้โดยตัวเองส่งเสริมการรั่วไหลดับอย่างมีนัยสำคัญหรือรายละเอียดตุ่ม นอกจากนี้เรายังตรวจสอบไม่ว่าจะเป็นแอลกอฮอล์เพิ่มอัตราการไหลบ่าเข้ามา Tl + ด้วยการส่งเสริมการเคลื่อนไหว Tl + พร้อมข้อบกพร่องที่ขอบเขตช่อง / bilayer และพบว่ากรณีนี้ไม่ได้ (ดูคำอธิบาย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เราพบสองชั้นในใจงั้นความแรงของชุดของอะลิฟาติกแอลกอฮอล์ใน dc22:1pc ลิพิดสองชั้นโดยใช้วิธีการใช้ GA ( 37,38 ) รูปที่ 1 แสดงการแสดงผลของเวลาที่หลักสูตร 3-pentanol บนดับ ( TL + น้ำ ) อัตรา โดย quencher มดโหลด luvs โรจน์ไม่มีส่วนผุ ( รูปที่ 1 , A และ B ด้านบนโค้ง ) ในเวลานี้ ( 1 ) เมื่อเร ( TL ) + เพิ่มมดเต็ม luvs โดยไม่ GA มีขนาดเล็กของ extravesicular fluorophore ดับทันที และค่อยๆ ลดการรั่วซึมเนื่องจากผ่านเมมเบรนเรเคิล ( รูปที่ 1 , A และ B , ที่สองและสามเส้นโค้งจากด้านบน ) การทำให้เย็นลง ( TL ) + พร้อมแทรกซึมผ่านการดำเนินการช่องทางกา ( 47,48 ) ในการแสดงตนของ GA , เศษส่วนของ luvs จะมีหนึ่งหรือมากกว่าการช่องทางกา กาเมอร์อาจแคบรูปแบบการดำเนินการช่องทางในระหว่างการทดลองที่นำไปสู่การลดลงในการทำให้เย็นลง ( รูปที่ 1 , A และ B , 4 เส้น ) แอลกอฮอล์ กะ กา มอนอเมอร์↔สมดุลต่อการทําิาากาช่องไหลเข้ามากขึ้น และเครื่องดื่มมีอัลกอฮอล์ได้เร็วขึ้น ( รูปที่ 1 , A และ B ด้านล่าง 3 โค้ง ) Quenching อัตราวัด ( ดูสนับสนุนวัสดุ ) ( 37 ) และการเปลี่ยนแปลงในการชุบเป็นฟังก์ชันของความเข้มข้นของแอลกอฮอล์ ( ALC ) ตั้งใจ ( รูปที่ 1 C ) ที่ความเข้มข้นสูง แอลกอฮอล์ลดความมั่นคงสองชั้น ( 12,21 ) และแบ่ง bilayer ไขมันคุณสมบัติเพิ่มการซึมผ่านอุปสรรค ก่อให้เกิดไอออน ( 14,15 ) ดังนั้น สำหรับแต่ละ แอลกอฮอล์ เราทดสอบความเข้มข้นสูงสุดที่ใช้ในกาเล็ก โดยยืนยันว่า แอลกอฮอล์ที่ความเข้มข้นเหล่านี้ไม่ได้ด้วยตนเองส่งเสริมรั่ว quencher อย่างมีนัยสำคัญหรือว่าแบ่ง นอกจากนี้เรายังตรวจสอบว่าแอลกอฮอล์ เพิ่มอัตราการไหลเข้า TL + TL + เคลื่อนไหวตามข้อบกพร่องที่ช่อง / สองชั้น เขตแดน และพบว่า กรณีนี้ไม่ได้ ( ดูการอภิปราย )