2.6. Quantitative osRT-PCR amplific

2.6. Quantitative osRT-PCR amplification
Quantitative osRT-PCR reactions were prepared in 96-well optical plates in a final volume of 25 _l using 1 _l of viral RNA and QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (QIAGEN, Valencia, CA). Briefly, the primer pairs (Table 1) were used at a concentration of 0.2 _M for each primer.Each specific primer pair was used separately to amplify poliovirus RNA.The quantitative osRT-PCR procedure was performed using real-time PCR System 7900HT (Applied Biosystems,Foster City, CA) at the following thermal cycling conditions:one cycle incubation for 20 min at 50 ◦C and 15 min at 95 ◦C, followed by 30 cycles, each consisting of 15 s at 94 ◦C, 30 s at 50 ◦C, 50 s at 72 ◦C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การขยาย osRT PCR เชิงปริมาณปฏิกิริยา PCR osRT เชิงปริมาณเตรียมไว้ในแผ่นดี 96 แสงในปริมาตรสุดท้ายของ _l 25 ใช้ _l 1 QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit (QIAGEN, Valencia, CA) และอาร์เอ็นเอไวรัส สั้น ๆ คู่รองพื้น (ตาราง 1) ถูกใช้ในความเข้มข้นของ 0.2 _M สำหรับรองพื้นแต่ละ แต่ละคู่รองพื้นเฉพาะถูกใช้แยกขยาย poliovirus อาร์เอ็นเอ ดำเนินกระบวนการ PCR osRT เชิงปริมาณใช้แบบเรียลไทม์ระบบ PCR 7900HT (Biosystems ใช้ ฟอสเตอร์ซิตี้ CA) ที่ความร้อนต่อไปนี้เงื่อนไข: หนึ่งคณะทันตแพทยศาสตร์รอบที่ 50 ◦C 20 นาทีและ 15 นาทีที่ 95 ◦C ตาม ด้วย 30 รอบ การขี่จักรยานแต่ละประกอบด้วย 15 s ที่ 94 ◦C, 30 s ที่ 50 ◦C, 50 s ที่ 72 ◦C

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 ปริมาณ osRT-PCR ขยาย
ปริมาณปฏิกิริยา osRT-PCR ได้จัดทำแผ่น 96 หลุมในออปติคอลไดรฟ์สุดท้ายของ 25 _L ใช้ 1 _L ของอาร์เอ็นเอไวรัสและ QuantiTect SYBR สีเขียว RT-PCR Kit (QIAGEN, วาเลนเซีย, CA) สั้น ๆ , คู่ไพรเมอร์ (ตารางที่ 1) ถูกนำมาใช้ที่ความเข้มข้น 0.2 _M สำหรับแต่ละคู่ไพรเมอร์ primer.Each เฉพาะถูกใช้แยกกันเพื่อขยายโปลิโอ RNA.The ปริมาณขั้นตอน osRT-PCR ได้รับการดำเนินการโดยใช้วิธี PCR เรียลไทม์ระบบ 7900HT (ประยุกต์ ไบโอซิสเต็มส์, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) ที่ต่อไปนี้เงื่อนไขความร้อน: การบ่มหนึ่งรอบเป็นเวลา 20 นาทีที่ 50 ◦Cและ 15 นาทีที่ 95 ◦Cตามด้วย 30 รอบแต่ละประกอบด้วย 15 วินาทีที่ 94 ◦C, 30 วินาทีที่ 50 ◦C 50 s ที่ 72 ◦C

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 ปริมาณ osrt PCR ( เชิงปริมาณ )
osrt ปฏิกิริยาที่เตรียมไว้ใน 96 ดีแสงแผ่นในเล่มสุดท้าย 25 _l ใช้ 1 _l ของอาร์เอ็นเอไวรัส และ quantitect SYBR กรีน 4 ชุด ( เพิ่ม , Valencia , CA ) สั้น ๆ , ไพรเมอร์คู่ ( ตารางที่ 1 ) ใช้ที่ความเข้มข้น 0.2 _m สำหรับแต่ละสี แต่ละสีใช้เฉพาะคู่แยกขยายโปลิโอไวรัส RNAปริมาณ osrt PCR ขั้นตอนการใช้ระบบ 7900ht PCR แบบเรียลไทม์ ( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย ) ที่เงื่อนไขการขี่จักรยานการระบายความร้อนต่อไปนี้ : หนึ่งรอบระยะเวลา 20 นาทีที่ 50 ◦องศาเซลเซียส 15 นาทีที่ 95 ◦ C ตามด้วย 30 รอบละ 15 s ที่ 94 ◦ C 30 S ที่ 50 ◦ C 50 s 72 ◦ C .