a series of serial ten-fold dilutio

a series of serial ten-fold dilutions of the sample
were carried out to make 10-1 to 10-5 dilutions. The
sample from the serial dilutions was used as an
inoculum in a similar fashion of the previously
described isolation procedure.

Identification of the bacterial isolate
Each isolate was grown in 10 ml of nutrient
broth placed in multi-stack incubator shaker adjusted
at 200 rpm, 28 oC for 16 h. The bacterial cells were
packed by centrifugation at 600 g for two min.
Polymerase chain reaction (PCR) was performed to
amplify bacterial 16S ribosomal RNA (rRNA) gene
by using two primers, 27F (5,GAG-AGT-TTG-ATCCTG-
GCT-CAG,3) and 1492R (5,CTA-CGG-CTACCT-
TGT-TAC-GA,3). The PCR amplification was
carried out under the following conditions, i.e., initial
denaturizing at 94 oC for three min; 30 cycles of
denaturizing at 94 oC for 30 sec, annealing at 58
oC for 25 sec, elongating at 72 oC for 50 sec, and
final elongating at 72 oC for seven min. The reaction
mixture contained 10 μl of 2X GoTaq, one μl of 10
μM 1492R and 27F primer, one μl of DNA, and
seven μl of sterile water.
The amplified products were examined by
horizontal electrophoresis in 1% agarose gel stained
with ethidium bromide 10 mg/ml, which containing
two μl of 100 bp DNA ladder plus and 0.5 μl
aliquots of PCR produced at 100 V for 30 min.

The PCR products were checked on agarose gel
electrophoresis, and it was subsequently purified
by the method of Vivantis, Malaysia using DNA
extraction kit GF-1 (Tarntip and Sirichom, 2011),
and analyzed with first base laboratories SdnBhd
Company, Malaysia (Sien et al., 2013). DNA sequences
of 16S rRNA gene were analyzed by using software
from the blast program provided by the National
Center for Biotechnology Information.

Isolation of Pythium from lettuce roots
Roots of infected lettuces were selected, cut,
and washed with sterile distilled water. A small
piece (0.5 cm) was cut and placed on petri dishes,
which contained 20 ml of soft agar and incubated
at 28 oC for 24 h. The culture plate was examined
and looked for a thallus of fungus. The mycelium of
fungi was cut and inoculated onto potato dextrose

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชุดประจำ dilutions ten-fold ของตัวอย่างได้ดำเนินการให้ 10-1 10-5 dilutions ที่มีใช้ตัวอย่างจาก dilutions ประจำเป็นการในลักษณะคล้ายของ inoculum ก่อนหน้านี้อธิบายกระบวนการแยกรหัสของแยกเชื้อแบคทีเรียแยกแต่ละถูกปลูกใน 10 ml ของสารซุปวางลงในเชคเกอร์หลายกองบ่มเพาะวิสาหกิจที่ปรับปรุงที่ 200 รอบต่อนาที 28 องศาเซลเซียสสำหรับ 16 h เซลล์แบคทีเรียได้บรรจุ โดย centrifugation ที่ g 600 ในสองนาทีทำให้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR)ขยายยีน 16S แบคทีเรีย ribosomal อาร์เอ็นเอ (rRNA)โดยการใช้ไพรเมอร์สอง 27F (5 แก๊ก-AGT-TTG - ATCCTG -GCT-CAG, 3) และ 1492R (5, CTA-CGG - CTACCT -3 TGT-TAC-GA ) ขยาย PCR ได้ดำเนินการภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้ เช่น เริ่มต้นdenaturizing ที่ 94 องศาเซลเซียสสำหรับสามนาที รอบ 30 ของdenaturizing ที่ 94 องศาเซลเซียสนาน 30 วินาที การอบเหนียวที่ 58องศาเซลเซียสใน 25 วินาที elongating ที่ 72 องศาเซลเซียสใน 50 วินาที และสุดท้าย elongating ที่ 72 องศาเซลเซียสสำหรับเจ็ดนาที ปฏิกิริยาผสมอยู่ 10 μl ของ 2 X GoTaq, μl หนึ่ง 10ΜM 1492R และ 27F พื้น μl หนึ่งของดีเอ็นเอ และμl 7 กระบอกน้ำผลิตภัณฑ์เอาต์ถูกตรวจสอบโดยสีแนวนอน electrophoresis ในเจ 1% agaroseมีโบรไมด์ ethidium 10 mg/ml ประกอบด้วยการμl สองของ 100 bp DNA บันไดบวกและ 0.5 μlaliquots PCR ผลิตที่ 100 V สำหรับ 30 นาทีมีการตรวจสอบผลิตภัณฑ์ PCR ใน agarose เจลelectrophoresis และถูกมาบริสุทธิ์โดยวิธีการ Vivantis มาเลเซียโดยใช้ดีเอ็นเอชุดสกัด GF-1 (Tarntip และ Sirichom, 2011),และวิเคราะห์กับฐานแรกปฏิบัติ SdnBhdบริษัท มาเลเซีย (มาร้อยเอ็ด al., 2013) ลำดับดีเอ็นเอของยีน 16S rRNA ได้วิเคราะห์ โดยใช้ซอฟต์แวร์จากโปรแกรมระเบิดโดยชาติศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพแยกของปริมาณเชื้อจากรากผักกาดหอมรากของ lettuces ติดไวรัสได้เลือก ตัดและหิน ด้วยน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ ขนาดเล็กตัด และวางบนจาน petri ชิ้น (0.5 เซนติเมตร)ที่อยู่ 20 ml ของ agar นุ่ม และ incubatedที่องศาเซลเซียสที่ 28 ใน 24 ชม มีการตรวจสอบแผ่นวัฒนธรรมและมองหา thallus ของเชื้อรา Mycelium ของตัด และ inoculated บนมันฝรั่งขึ้นเชื้อรา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ชุดของอนุกรมเจือจางสิบเท่าของกลุ่มตัวอย่างได้รับการดำเนินการที่จะทำให้ 10-1 10-5 เจือจาง ตัวอย่างจากเจือจางอนุกรมถูกนำมาใช้เป็นหัวเชื้อในลักษณะคล้ายของก่อนหน้านี้ขั้นตอนการแยกอธิบาย. บัตรประจำตัวของเชื้อแบคทีเรียแต่ละแยกถูกปลูกใน 10 มลสารอาหารน้ำซุปวางไว้ในเครื่องปั่นศูนย์บ่มเพาะหลายกองปรับที่200 รอบต่อนาทีที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 16 ชั่วโมง เซลล์แบคทีเรียได้รับการบรรจุโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 600 กรัมเป็นเวลาสองนาที. โพลีเมอปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) ได้ดำเนินการขยายเชื้อแบคทีเรีย16S โซมอลอาร์เอ็นเอ (rRNA) ยีนโดยใช้ไพรเมอร์สอง, 27 (5, GAG-AGT-TTG-ATCCTG- GCT -CAG 3) และ 1492R (5, CTA-CGG-CTACCT- TGT-TAC-GA, 3) ขยาย PCR ได้รับการดำเนินการภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้คือการเริ่มต้นdenaturizing ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลาสามนาที; 30 รอบของdenaturizing ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีการอบที่ 58 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 25 วินาทียืดที่ 72 องศา 50 วินาทีและยืดสุดท้ายที่72 องศาเซลเซียสเป็นเวลาเจ็ดนาที ปฏิกิริยาส่วนผสมที่มีอยู่ 10 ไมโครลิตรของ 2X GoTaq หนึ่งไมโครลิตร 10 ไมครอน 1492R และไพรเมอร์ 27 ซึ่งเป็นหนึ่งไมโครลิตรดีเอ็นเอและเจ็ดไมโครลิตรของน้ำหมัน. ผลิตภัณฑ์ขยายได้รับการตรวจสอบโดยอิแนวนอนในเจล agarose 1% สีกับโบรไมด์ethidium 10 mg / ml ซึ่งมีสองไมโครลิตร100 bp บวกบันได DNA และ 0.5 ไมโครลิตรaliquots ของ PCR ผลิตที่ 100 V 30 นาที. ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกตรวจสอบในเจล agarose electrophoresis และมันก็บริสุทธิ์ต่อมาโดยวิธีการVivantis มาเลเซีย โดยใช้ดีเอ็นเอชุดสกัดGF-1 (ธารทิพย์และ Sirichom 2011), และการวิเคราะห์ที่มีห้องปฏิบัติการที่ฐานแรก SdnBhd บริษัท มาเลเซีย (เศียร et al., 2013) ลำดับดีเอ็นเอของยีน 16S rRNA วิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์จากโปรแกรมการระเบิดไว้ให้โดยแห่งชาติศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพ. แยก Pythium ผักกาดหอมจากรากรากของผักกาดหอมที่ติดเชื้อได้รับการคัดเลือกตัดและล้างด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ ขนาดเล็กชิ้น (0.5 ซม.) ถูกตัดและวางไว้บนอาหารเลี้ยงเชื้อ, ที่มี 20 มลวุ้นนุ่มและบ่มที่28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง แผ่นวัฒนธรรมที่ได้รับการตรวจสอบและมองหา thallus ของเชื้อรา เส้นใยของเชื้อราถูกตัดและเชื้อเข้าสู่เดกซ์โทรสมันฝรั่ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ชุดอนุกรมสิบเท่าวิธีการตัวอย่าง
ทดลองให้ 10-1 ถึง 10-5 เจือจาง .
ตัวอย่างจากซีเรียลเจือจาง ถูกใช้เป็น
3 ในแฟชั่นที่คล้ายกันของการอธิบายขั้นตอนก่อนหน้านี้


ตัวของแบคทีเรียไอโซเลท
แต่ละแยกปลูกในสารอาหาร 10 มิลลิลิตร น้ำซุปอยู่ในตู้หลายกอง

ปั่นปรับที่ 200 รอบต่อนาที , 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 16 ชั่วโมงเซลล์แบคทีเรียมี
บรรจุโดยปั่นที่ 600 กรัมสองนาที
ปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR ) คือการขยายเชื้อ

( ไรโบโซมอล อาร์เอ็นเอ ( rRNA ยีน
ใช้ไพรเมอร์ 27f ( 5 , gag-agt-ttg-atcctg -
gct-cag , 3 ) และ 1492r ( 5 , cta-cgg-ctacct -
tgt-tac-ga , 3 ) ร่วมขยายคือ
ดำเนินการภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้ คือ ครั้งแรก
denaturizing ที่ 94 OC สำหรับสามนาที ;30 รอบ
denaturizing ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที annealing ที่ 58
OC สำหรับ 25 วินาที elongating 72 องศาเซลเซียส 50 วินาทีและ
สุดท้าย elongating 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาที ปฏิกิริยา
ผสมจำนวน 10 μลิตร 2x gotaq ผมμหนึ่ง 10
μ M 1492r 27f และไพรเมอร์ผมμหนึ่งของดีเอ็นเอ และμ
7 l
น้ำหมัน ขยายผลิตภัณฑ์ตรวจสอบโดย
electrophoresis แนวนอนใน 1% เจลย้อมสี
กับทิเดียมโบรไมด์ 10 mg / ml ซึ่งประกอบด้วย
2 μ L 100 BP ดีเอ็นเอบันไดบวก 0.5 μ L
เฉยๆสามารถผลิตที่ 100 V สำหรับ 30 นาที

ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกตรวจสอบในเจล
electrophoresis และต่อมาโดยวิธีบริสุทธิ์

vivantis มาเลเซียใช้ดีเอ็นเอ แยกชุด gf-1 ( ธารทิพย์ และด้านจิตวิญญาณในสังคมอีสาน , 2011 ) ,
วิเคราะห์และเปรียบเทียบกับฐานแรก sdnbhd
ห้องปฏิบัติการบริษัทมาเลเซีย ( เซียน et al . , 2013 ) ลำดับดีเอ็นเอของยีน 16S rRNA

ถูกวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์จากระเบิดโปรแกรมโดยศูนย์ข้อมูลเทคโนโลยีชีวภาพแห่งชาติ
.

การแยกเชื้อราจากรากรากของผักสลัด
ติดเชื้อกระหล่ำ เลือกตัด
เป็นหมัน และล้างด้วยน้ำกลั่น ชิ้นเล็ก ๆ
( 0.5 ซม. ) ถูกตัดและวางไว้บนจานเลี้ยงเชื้อ
,ซึ่งบรรจุ 20 ml อ่อน วุ้น และบ่ม
ที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง วัฒนธรรมแผ่นตรวจสอบ
และมองสำหรับทัลลัสของเห็ดรา การเจริญของเชื้อราเชื้อ
ถูกตัดและลง potato dextrose