2.4. Microbiological analysisMRS-bi

2.4. Microbiological analysis
MRS-bile agar medium (containing 0.15% bile salts) was used for
the selective enumeration of probiotic bacteria (Ferdousi et al.,
2013). The plates were incubated anaerobically at 37
C for at
least 72 h. Anaerobic conditions were produced using the GasPac
system. Unlike probiotic organisms, yoghurt starter bacteria could
not grow at these conditions (Mortazavian, Ehsani, Sohrabvandi, &
Reinheimer, 2007; Sohrabvandi, Mortazavian, Dolatkhahnejad, &
Monfared, 2012; Vinderola & Reinheimer, 1999).
2.5. Determination of free aflatoxin M1
2.5.1. Extraction and cleanup
All the required glassware including laboratory vials, tubes and
flasks were cleaned in diluted sulfuric acid and rinsed well with
distilled water to remove all traces of acid prior to use. The laboratory
where the analysis was performed was protected from
daylight, and AFM1 standard solutions were also kept protected
from daylight with aluminium foil and stored at 2
C.
AFM1 was extracted from the Doogh using the immunoaffinity
column method, as reported in ISO 14501 (ISO, 2007) and validated
for yoghurt by Tabari et al. (Tabari et al., 2011). Briefly, Doogh
samples were warmed to 37
C and centrifuged at 4000  g for
15 min. The upper thin fat layer was discarded. The residue was
filtered through Whatman No. 4 filter paper. At least 50 mL of the
filtrate was pipetted into the syringe barrel and allowed to pass
through the immunoaffinity column (VICAM’s Afla M1, USA) at a
slow, steady flow rate (2e3 mL/min) by using the equipment’s
vacuum system. As the sample passed through the column, the
antibodies selectively bound with present AFM1 and formed an
antibody-antigen complex. Then, the column was washed with
10 mL of water at a steady flow rate and disconnected from the
vacuum system. AFM1 was eluted from the column by the slow
passage of 4 mL of high-performance liquid chromatograph (HPLC)
mobile phase and acetonitrile (25% v/v, HPLC grade). The final
extract was collected in a conical tube and was evaporated to a
volume of 50e500 ml at 30
C under nitrogen steam. Finally, it was
diluted 10 times in water and 100 ml was injected into the liquid
chromatographic system.
2.5.2. HPLC analysis
An HPLC system (Waters, Alliance Separations Module 2695)
equipped with a C-18 column (Chromolith Performance RP-18
endcapped 100  2 mm, 1.6 mm, Merck, Germany) was used in
this study. The mobile phase consisted of acetonitrile and water at a
volume ratio of 25:75 delivered to the column at a rate of 0.7 mL/
min. Under these conditions AFM1 was eluted from the column at
about 3.5 min. Detection was made by a fluorescence detector
(Waters 2475) in excitation and emission wavelengths of 365 and
435 nm, respectively.
2.5.3. Preparation of calibration curve
Pure AFM1 standard was used to prepare a series AFM1 solutions
containing 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 2.5, 5, 7.5 and 10 ng/mL by dilution
in acetonitrile (10% v/v in water). Calibration curves were prepared
by plotting the peak area for each calibration solution against the
mass of AFM1 injected.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. จุลชีววิทยานางน้ำดีวุ้นปานกลาง (ประกอบด้วยเกลือน้ำดี 0.15%) ใช้สำหรับการแจงนับที่เลือกของแบคทีเรีย (Ferdousi et al.,2013) แผ่นได้รับการกกที่ 37 C สำหรับที่ anaerobicallyอย่างน้อย 72 h. สภาพปลอดออกซิเจนผลิตโดยใช้การ GasPacระบบ ซึ่งแตกต่างจากโปรไบโอติกมีชีวิต โยเกิร์ต starter แบคทีเรียอาจไม่เจริญเติบโตที่เงื่อนไขเหล่านี้ (Mortazavian, Sohrabvandi แน่นอนคะและReinheimer, 2007 Sohrabvandi, Mortazavian, Dolatkhahnejad, &Monfared, 2012 Vinderola & Reinheimer, 1999)2.5 การกำหนดฟรีนระหว่างกระบวน M12.5.1 การสกัดและการล้างข้อมูลหลอดแก้วที่จำเป็นทั้งหมดรวมทั้งห้องปฏิบัติการขวด และขวดล้างในกรดซัลฟิวริกเจือจาง และล้างด้วยน้ำกลั่นเพื่อขจัดคราบของกรดก่อนการใช้ ห้องปฏิบัติการที่ทำการวิเคราะห์ได้รับการป้องกันจากตามฤดูกาล และโซลูชั่นมาตรฐาน AFM1 ได้ยังเก็บไว้ป้องกันจากตามฤดูกาลด้วยอลูมิเนียมฟอยล์ และเก็บไว้ที่ c 2AFM1 ถูกแยกจาก Doogh โดยใช้การ immunoaffinityคอลัมน์วิธีการ ตามที่รายงานใน ISO 14501 (ISO, 2007) และตรวจสอบสำหรับโยเกิร์ตโดย Tabari et al. (Tabari et al. 2011) สั้น ๆ Dooghอุ่นที่ 37 C และจากที่ 4000 กรัมสำหรับตัวอย่าง15 นาที ชั้นไขมันบาง ๆ บนถูกละทิ้ง แก้ไขสารตกค้างกรองผ่านกระดาษกรอง Whatman เลข 4 อย่างน้อย 50 mL ของการฟาร์ม pipetted ลงในกระบอกเข็มฉีดยา และได้รับอนุญาตให้ผ่านthrough the immunoaffinity column (VICAM’s Afla M1, USA) at aslow, steady flow rate (2e3 mL/min) by using the equipment’svacuum system. As the sample passed through the column, theantibodies selectively bound with present AFM1 and formed anantibody-antigen complex. Then, the column was washed with10 mL of water at a steady flow rate and disconnected from thevacuum system. AFM1 was eluted from the column by the slowpassage of 4 mL of high-performance liquid chromatograph (HPLC)mobile phase and acetonitrile (25% v/v, HPLC grade). The finalextract was collected in a conical tube and was evaporated to avolume of 50e500 ml at 30
C under nitrogen steam. Finally, it wasdiluted 10 times in water and 100 ml was injected into the liquidchromatographic system.2.5.2. HPLC analysisAn HPLC system (Waters, Alliance Separations Module 2695)equipped with a C-18 column (Chromolith Performance RP-18endcapped 100  2 mm, 1.6 mm, Merck, Germany) was used inthis study. The mobile phase consisted of acetonitrile and water at avolume ratio of 25:75 delivered to the column at a rate of 0.7 mL/min. Under these conditions AFM1 was eluted from the column atabout 3.5 min. Detection was made by a fluorescence detector(Waters 2475) in excitation and emission wavelengths of 365 and435 nm, respectively.2.5.3. Preparation of calibration curvePure AFM1 standard was used to prepare a series AFM1 solutionscontaining 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 2.5, 5, 7.5 and 10 ng/mL by dilutionin acetonitrile (10% v/v in water). Calibration curves were prepared
by plotting the peak area for each calibration solution against the
mass of AFM1 injected.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยา
MRS-น้ำดีวุ้นขนาดกลาง (ที่มีเกลือ 0.15% น้ำดี) ที่ใช้สำหรับการ
แจงนับเลือกของแบคทีเรียโปรไบโอติก (Ferdousi et al.,
2013) แผ่นถูกบ่มแบบไม่ใช้อากาศที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลาอย่าง
น้อย 72 ชั่วโมง สภาวะไร้ออกซิเจนถูกผลิตโดยใช้ GasPac
ระบบ ซึ่งแตกต่างจากสิ่งมีชีวิตโปรไบโอติกแบคทีเรียโยเกิร์ตเริ่มต้นอาจ
ไม่เติบโตในส่วนของเงื่อนไขเหล่านี้ (Mortazavian, Ehsani, Sohrabvandi และ
Reinheimer 2007; Sohrabvandi, Mortazavian, Dolatkhahnejad และ
Monfared 2012; & Vinderola Reinheimer, 1999).
2.5 ความมุ่งมั่นของอะฟลาท็อกซิน M1 ฟรี
2.5.1 การสกัดและการล้างข้อมูล
ทั้งหมดที่จำเป็นรวมทั้งเครื่องแก้วขวดห้องปฏิบัติการหลอดและ
ขวดทำความสะอาดในกรดกำมะถันเจือจางและล้างได้ดีกับ
น้ำกลั่นเพื่อลบร่องรอยของกรดก่อนที่จะใช้ ห้องปฏิบัติการ
ที่วิเคราะห์ได้ดำเนินการถูกป้องกันจาก
แสงแดดและการแก้ปัญหามาตรฐาน AFM1 ยังถูกเก็บไว้ได้รับการคุ้มครอง
จากกลางวันกับอลูมิเนียมฟอยล์และเก็บไว้ที่ 2 องศาเซลเซียส.
AFM1 ถูกสกัดจาก Doogh ใช้ immunoaffinity
วิธีคอลัมน์รายงานในมาตรฐาน ISO 14501 ( ISO, 2007) และการตรวจสอบ
สำหรับโยเกิร์ตโดย Tabari et al, (ทาบาริ et al. 2011) สั้น ๆ , Doogh
ตัวอย่างอบอุ่นถึง 37 องศาเซลเซียสและหมุนเหวี่ยงที่ 4000? G สำหรับ
15 นาที ชั้นไขมันบางส่วนบนทิ้ง ที่เหลือถูก
กรองผ่าน Whatman ฉบับที่ 4 กระดาษกรอง อย่างน้อย 50 มลของ
กรองถูกปิเปตลงในกระบอกเข็มฉีดยาและได้รับอนุญาตให้ผ่าน
ผ่านคอลัมน์ immunoaffinity นี้ (VICAM ของ Afla M1, สหรัฐอเมริกา) ที่
ช้าอัตราการไหลคงที่ (2e3 มิลลิลิตร / นาที) โดยใช้อุปกรณ์ของ
ระบบสูญญากาศ ในฐานะที่เป็นตัวอย่างผ่านคอลัมน์
แอนติบอดีที่ถูกผูกไว้กับการคัดเลือกปัจจุบัน AFM1 และกลายเป็น
ความซับซ้อนแอนติเจนแอนติบอดี จากนั้นคอลัมน์ถูกล้างด้วย
10 มิลลิลิตรของน้ำที่อัตราการไหลที่มั่นคงและตัดการเชื่อมต่อจาก
ระบบสูญญากาศ AFM1 ถูกชะจากคอลัมน์โดยช้า
เนื้อเรื่องของ 4 มิลลิลิตรที่มีประสิทธิภาพสูง chromatograph เหลว (HPLC)
เฟสโทรศัพท์มือถือและ acetonitrile (25% v / V HPLC เกรด) สุดท้าย
สารสกัดถูกเก็บรวบรวมในหลอดรูปกรวยและได้รับการระเหยกับ
ปริมาณของ 50e500 มล. วันที่ 30? C ภายใต้การอบไอน้ำไนโตรเจน ในที่สุดก็ถูก
ปรับลด 10 ครั้งในน้ำและ 100 มล. ได้รับการฉีดเข้าไปในของเหลว
ระบบโคร.
2.5.2 วิเคราะห์ HPLC
ระบบ HPLC (Waters, พันธมิตรแยกโมดูล 2695)
พร้อมกับ C-18 คอลัมน์ (Chromolith สมรรถนะ RP-18
endcapped 100? 2 mm, 1.6 mm, เมอร์ค, เยอรมนี) ถูกนำมาใช้ใน
การศึกษาครั้งนี้ เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย acetonitrile และน้ำใน
อัตราส่วน 25:75 ส่งมอบให้กับคอลัมน์ในอัตรา 0.7 มิลลิลิตร / a
นาที ภายใต้เงื่อนไขเหล่า AFM1 ถูกชะจากคอลัมน์ที่
ประมาณ 3.5 นาที การตรวจสอบที่ถูกสร้างขึ้นโดยการตรวจจับการเรืองแสง
(Waters 2475) ในการกระตุ้นและการปล่อยความยาวคลื่น 365 และ
435 นาโนเมตรตามลำดับ.
2.5.3 การเตรียมการของเส้นโค้งการสอบเทียบ
มาตรฐาน AFM1 บริสุทธิ์ถูกใช้ในการเตรียมความพร้อมชุดโซลูชั่น AFM1
ที่มี 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 2.5, 5, 7.5 และ 10 นาโนกรัม / มิลลิลิตรโดยเจือจาง
ใน acetonitrile (10% v / V ในน้ำ) เส้นโค้งการสอบเทียบได้จัดทำขึ้น
โดยการวางแผนพื้นที่สูงสุดสำหรับแต่ละวิธีการแก้ปัญหาการสอบเทียบกับ
มวลของ AFM1 ฉีด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาคุณน้ำดีอาหารวุ้นที่มี 0.15 % เกลือน้ำดี ) ใช้สำหรับการแจงนับ เลือกของแบคทีเรียโปรไบโอติก ( ferdousi et al . ,2013 ) จานถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลาที่ พอย่างน้อย 72 ชั่วโมง ไร้เงื่อนไขถูกผลิตโดยใช้ gaspacระบบ ซึ่งแตกต่างจากโปรไบโอติกแบคทีเรียในโยเกิร์ตจะเริ่มต้นไม่เติบโตในเงื่อนไขเหล่านี้ ( mortazavian ehsani sohrabvandi , , , และreinheimer , 2007 ; sohrabvandi mortazavian dolatkhahnejad , , , และmonfared , 2012 ; vinderola & reinheimer , 1999 )2.5 การหาปริมาณอะฟลาท็อกซิน M1 ฟรีดาวน์โหลด . การสกัดและการทำความสะอาดทุกความต้องการรวมทั้งห้องปฏิบัติการเครื่องแก้วขวดและหลอดในขวดสะอาดเจือจางกรดซัลฟิวริกและล้างดีน้ำกลั่นเพื่อลบร่องรอยทั้งหมดของกรดก่อนที่จะใช้ ห้องปฏิบัติการที่วิเคราะห์ข้อมูลได้รับการคุ้มครองจากตามฤดูกาล และโซลูชั่นมาตรฐาน afm1 ยังเอาแต่ป้องกันจากแสงแดดด้วยอลูมิเนียมฟอยล์และอุณหภูมิ 2 องศาเซลเซียสafm1 สกัดจาก doogh ใช้ immunoaffinityวิธีคอลัมน์ รายงานว่า ใน 14501 ISO ( ISO , 2007 ) และตรวจสอบสำหรับโยเกิร์ต โดย tabari et al . ( tabari et al . , 2011 ) doogh สั้น ๆจำนวน 37 C อุ่นไฟฟ้า 4000 G สำหรับ15 นาที ชั้นไขมันบางๆ บน ถูกทิ้ง ที่เหลือคือกรองผ่าน whatman หมายเลข 4 ไส้กรองกระดาษ อย่างน้อย 50 ml ของกรองเป็น pipetted เข้าไปฉีดยาบาร์เรล และได้รับอนุญาตให้ผ่านผ่าน immunoaffinity คอลัมน์ ( vicam ก็ให้หา M1 , USA ) ที่ช้า , อัตราการไหลคงที่ ( 2e3 มิลลิลิตรต่อนาที ) โดยใช้อุปกรณ์ของระบบสูญญากาศ เป็นตัวผ่านคอลัมน์แอนติบอดีที่ถูกผูกไว้กับปัจจุบันและเลือก afm1 เกิดขึ้นแอนติบอดีต่อแอนติเจนที่ซับซ้อน จากนั้นก็ล้างด้วยคอลัมน์10 ml ของน้ำที่อัตราการไหลคงที่และตัดการเชื่อมต่อจากระบบสูญญากาศ afm1 คือตัวอย่างจากคอลัมน์โดยช้าผ่าน 4 ml ของของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) โครมาโตกราฟระยะที่เคลื่อนที่และไน ( 25 % v / v , เกรด HPLC ) สุดท้ายแยกเก็บในหลอดรูปกรวยและระเหยเป็นปริมาณของ 50e500 มิลลิลิตรที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสภายใต้ไอไนโตรเจน ในที่สุด มันคือเจือจาง 10 เท่าในน้ำ 100 มิลลิลิตร ฉีดเข้าไปในของเหลวระบบทางโครมาโทกราฟีงานวาง . การวิเคราะห์ HPLCมี 2 ระบบ ( น้ำ , แยกโมดูลพันธมิตร 2695 )อุปกรณ์ที่มีประสิทธิภาพ chromolith ( rp-18 - คอลัมน์endcapped 100 2 มม. 1.6 มิลลิเมตร เมอร์ค , เยอรมนี ) ถูกใช้ในในการศึกษานี้ เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย ไน และน้ำที่อัตราส่วนของ 25:75 ส่งไปยังคอลัมน์ในอัตรา 0.7 มล.นาที ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ afm1 คือตัวอย่างจากคอลัมน์ที่เกี่ยวกับ 3.5 นาที การตรวจสอบทำโดยเรืองเครื่องตรวจจับ( น้ำ 2475 ) ในการกระตุ้นและการปล่อยความยาวคลื่น 365 และ435 นาโนเมตร2.5.3 . การเตรียมการสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน afm1 บริสุทธิ์ใช้เตรียมชุด afm1 โซลูชั่นที่มี 0.1 , 0.2 , 0.5 , 1.0 , 2.0 , 2.5 , 5 , 7.5 และ 10 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร โดยเจือจางใน Acetonitrile ( 10% v / v ในน้ำ ) เส้นโค้งสอบเทียบเตรียมโดยวางแผนพื้นที่สูงสุดสำหรับแต่ละการแก้ไขกับมวลของ afm1 ฉีด .