Materials and methodsChemicals, bac

Materials and methods
Chemicals, bacteria, and culture media
All chemicals were purchased from Sigma-Aldrich (St. Louis,
MO, USA), unless otherwise indicated. The E. coli strains
used in the present study were kindly provided by Dr K.S.
Kim (Division of Pediatric Infectious Diseases, School of
Medicine, Johns Hopkins University, Baltimore, MD, USA);
RS218 (O18:K1:H7) was isolated from the cerebrospinal
fluid of a neonate with meningitis.20 E91 is an RS218 mutant
that lacks the entire ompA gene. The bacteria were grown
in braineheart infusion broth with appropriate antibiotics
(Difco Laboratories, Detroit, MI, USA). For infection experiments,
overnight cultures were expanded in
braineheart infusion broth and incubated at 37
C for 2e3
hours to the midlog phase. The bacteria were centrifuged
at 10,000  g for 5 minutes and resuspended in a cell culture
medium without antibiotics.
Mouse strain
C57BL/6 mice were obtained from the National Laboratory
Animal Center of Taiwan, Nangang, Taipei, Taiwan and
maintained under pathogen-free conditions. All animal
procedures were performed according to the approved
institutional protocol (LAC-99-0009) of Taipei Medical University,
Taipei, Taiwan.
Expression and purification of OmpA fragments
The DNA fragments of the ompA L1e2, L1e3, L1e4, L2e3,
L2e4, and L3e4 were amplified using polymerase chain
reaction with restriction enzyme sites containing primers.
These fragments were subsequently digested with SacI and
XhoI and ligated into the pET-21a expression vector
(Novagen, Darmstadt, Germany). The resultant plasmid was
Figure 1. N-terminal, surface-exposed, OmpA fragments:
Loop 1e2, Loop 1e3,

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
เคมีแบคทีเรียและอาหารเลี้ยงเชื้อ
สารเคมีทั้งหมดที่ซื้อมาจาก บริษัท Sigma-Aldrich (เซนต์หลุยส์
MO, USA) นอกจากที่ระบุ E. coli สายพันธุ์
ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับการให้ความกรุณาโดยดร KS
คิม (ส่วนหนึ่งของโรคติดเชื้อในเด็ก, โรงเรียน
แพทย์จอห์นส์ฮอปกินส์มหาวิทยาลัยบัลติมอร์สหรัฐอเมริกา);
RS218 (O18: K1: H7) ที่แยกได้จาก ไขสันหลัง
ของเหลวของทารกที่มี meningitis.20 E91 เป็นมนุษย์กลายพันธุ์ RS218
ที่ขาดยีนทั้ง ompa แบคทีเรียที่ปลูก
ในน้ำซุปแช่ braineheart ด้วยยาปฏิชีวนะที่เหมาะสม
(Difco ห้องปฏิบัติการ, ดีทรอยต์, MI, USA) สำหรับการทดลองการติดเชื้อ
วัฒนธรรมค้างคืนได้รับการขยายตัวใน
น้ำซุปแช่ braineheart และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสสำหรับ 2E3
ชั่วโมงเพื่อขั้นตอนการ MIDlog แบคทีเรียที่ถูกหมุนเหวี่ยง
ที่ 10,000? กรัมเป็นเวลา 5 นาทีและ resuspended ในการเพาะเลี้ยงเซลล์
ขนาดกลางโดยไม่ต้องใช้ยาปฏิชีวนะ.
สายพันธุ์เมาส์
C57BL / 6 หนูที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการแห่งชาติ
ศูนย์สัตว์ของไต้หวันหนานกัง, ไทเป, ไต้หวันและ
เก็บรักษาไว้ภายใต้สภาพปลอดเชื้อ สัตว์ทุก
ขั้นตอนได้ดำเนินการตามที่ได้รับอนุมัติ
โปรโตคอลสถาบัน (LAC-99-0009) ไทเปแพทย์มหาวิทยาลัย,
ไทเป, ไต้หวัน.
การแสดงออกและการทำให้บริสุทธิ์ของเศษ ompa
ดีเอ็นเอของ ompa L1e2, L1e3, L1e4, L2e3,
L2e4 และ L3e4 ถูกขยายโดยใช้วิธี Polymerase chain
ปฏิกิริยากับเว็บไซต์เอนไซม์ จำกัด ที่มีไพรเม.
ชิ้นส่วนเหล่านี้ถูกย่อยต่อมา SACI และ
XhoI และ ligated เป็นการแสดงออกสำหรับผู้รักสัตว์ 21a เวกเตอร์
(Novagen, Darmstadt, เยอรมนี) พลาสมิดผลเป็น
รูปที่ 1 N-terminal, พื้นผิวสัมผัสเศษ ompa:
1E2 ห่วง 1E3 ห่วง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
สารเคมี , แบคทีเรีย , และสื่อวัฒนธรรม
สารเคมีทั้งหมดซื้อมาจากซิกม่า Aldrich ( St . Louis ,
โม , USA ) นอกจากที่ระบุ E . coli สายพันธุ์
ที่ใช้ในการศึกษาคือ กรุณา ให้ โดย ดร. k.s.
คิม ( แผนกกุมารเวชศาสตร์โรคติดเชื้อ โรงเรียน
ยา , Johns Hopkins University , บัลติมอร์ , MD , USA ) ;
rs218 ( o18 : K1 :H7 ) ถูกแยกจากน้ำไขสันหลัง
ของทารกกับ meningitis.20 e91 เป็น rs218 กลายพันธุ์
ที่ขาดยีนสูงสุดทั้งหมด แบคทีเรียที่เติบโตในน้ำซุปที่แช่ด้วย
braineheart ยาปฏิชีวนะ
( difco ห้องปฏิบัติการ , ดีทรอยต์ , มิชิแกน , สหรัฐอเมริกา สำหรับการทดลองการติดเชื้อ
วัฒนธรรมค้างคืนได้ขยายใน
braineheart ซุปแช่บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2e3

ชั่วโมงเพื่อ midlog เฟส แบคทีเรียถูกไฟฟ้า
ที่ 10 , 000  กรัม เป็นเวลา 5 นาที และ resuspended ในวัฒนธรรมเซลล์ปานกลางไม่มียาปฏิชีวนะ
.
เมาส์สายพันธุ์
c57bl / 6 หนูได้มาจากห้องปฏิบัติการแห่งชาติ
สัตว์ศูนย์ไต้หวัน Nangang , ไทเป , ไต้หวันและ
รักษาภายใต้เงื่อนไขพิเศษ ฟรี วิธีการสัตว์
มีการปฏิบัติตามที่ได้รับการอนุมัติ
ระเบียบสถาบัน ( lac-99-0009 ) ของมหาวิทยาลัยการแพทย์ไทเป , ไทเป ไต้หวัน
, .
การแสดงออกและการทำให้บริสุทธิ์ของเศษสูงสุด
ดีเอ็นเอของสูงสุด l1e2 l1e3 l1e4 l2e3 , , , ,
l2e4 และ l3e4 กำลังขยายโดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสด้วยเอนไซม์ เว็บไซต์ที่มี

รองพื้น ชิ้นส่วนเหล่านี้ถูกย่อยด้วยซาซิในภายหลัง และ
xhoi และผูกในการแสดงออกของเวกเตอร์ pet-21a
( novagen ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) ที่ซึ่งเป็นพลาสมิด
1 รูป ถูก , ผิวสัมผัส , เศษสูงสุด :
1e2 1e3 ห่วง , ห่วง ,