2.4. Sensitivity of the inhibitory

2.4. Sensitivity of the inhibitory substance to proteolytic enzymes
The effect of proteolytic enzymes on the antimicrobial activity of the CFS, prepared as described above in Section 2.3, was tested according to Van Reenen, Dicks, and Chikindas (1998). One milliliter of the CFS was mixed with pepsin (1 mg/mL) or protease (1 mg/mL) and incubated at 37 °C for 30 min. The enzymes were purchased from Sigma, New York, USA. The enzymatic reactions were stopped by heating at 100 °C for 3 min and the antimicrobial activity was assessed by the spot-on-the-lawn test.

2.5. Effect of pH, temperature and chemical agents on the antimicrobial activity
The effect of pH on the antimicrobial activity of the CFS was tested adjusting the pH of aliquots (5 mL) of the CFS from 2.0 up to 12.0 (with increments of one pH unit) with 1 M NaOH or 1 M HCl (Synth, Diadema, Brazil). After incubation at 25 °C for 30 min, the pH was readjusted to 7.0. The effect of temperature on the antimicrobial activity of the CFS was tested heating aliquots of 1 mL of CFS at 60 °C, 80 °C and 100 °C for 30 min, 60 min and 120 min. The effect of sodium dodecyl sulfate (SDS) (BioAgency, Sao Paulo, Brazil), ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) (Invitrogen, Carlsbad, USA), tween 80 (Synth, Diadema, Brazil) and urea (Synth, Diadema, Brazil) on the antimicrobial activity was tested by adding 1% (w/v) of these substances to the CFS. For all tests the antimicrobial activity was determined by the spot-on-the-lawn test, using L. sakei ATCC 15521 as indicator microorganism. In all experiments, the bacteriocin-producing strain L. sakei subsp. sakei 2a was used as positive control ( De Martinis & Franco, 1998).

2.6. Spectrum of antibacterial activity
Two isolates (69 and 94) that produced antimicrobial substances sensitive to the proteolytic enzymes and not affected by pH, heat and chemical agents, were considered bacteriocin producers and thus tested for antimicrobial activity against the target strains listed in Table 2. In addition to the halophilic and halotolerant bacteria isolated from charqui, these strains included reference strains (ATCC and others) and food isolates belonging to the culture collection at Food Microbiology Laboratory of University of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil. The activity was evaluated using the spot-on-the-lawn test. A target microorganism was considered sensitive to the bacteriocin producer strain when the diameter of the growth inhibition zone was at least 5 mm. The growth conditions of each tested microorganism are shown in Table 2.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. ความไวของสารลิปกลอสไขให้เอนไซม์ proteolytic
ผลของเอนไซม์ proteolytic กิจกรรมจุลินทรีย์ของ CFS เตรียมตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในหัวข้อ 2.3 ทดสอบตามแวน Reenen, Dicks และ Chikindas (1998) หนึ่ง milliliter ของ CFS ที่ผสมกับเพพซิน (1 mg/mL) หรือรติเอส (1 mg/mL) และ incubated ที่ 37 ° C สำหรับ 30 นาที เอนไซม์ถูกซื้อจากซิก นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา มีหยุดปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบ โดยความร้อนที่ 100 ° C ใน 3 นาที และกิจกรรมจุลินทรีย์ถูกประเมิน โดย test. spot-on--บริเวณสนามหญ้า

2.5 ผลของ pH อุณหภูมิ และสารเคมีกิจกรรมจุลินทรีย์
ผลของกิจกรรมการต้านจุลชีพของ CFS ถูกทดสอบปรับ pH ของ aliquots (5 mL) ของ CFS จาก 2.0 ถึง 12.0 (พร้อมด้วยการเพิ่มค่า pH หนึ่งหน่วย) 1 M NaOH หรือ 1 M HCl (Synth, Diadema บราซิล) หลังจากบ่มที่ 25 ° C สำหรับ 30 นาที pH ถูก readjusted กับ 7.0 ผลของอุณหภูมิกิจกรรมจุลินทรีย์ของ CFS ถูกทดสอบความร้อน aliquots ของ mL 1 ของ CFS ที่ 60 ° C, 80 ° C และ 100 ° C สำหรับ 30 นาที 60 นาทีและ 120 นาที ผลของโซเดียม dodecyl ซัลเฟต (SDS) (BioAgency เซาเปาโล บราซิล), ethylenediamine tetraacetic กรด (EDTA) (Invitrogen คาร์ลส สหรัฐอเมริกา), tween 80 (Synth, Diadema บราซิล) และยูเรีย (Synth, Diadema บราซิล) กิจกรรมจุลินทรีย์ได้รับการทดสอบ โดยการเพิ่ม 1% (w/v) ของสารเหล่านี้เข้าแบบ CFS สำหรับการทดสอบทั้งหมด กิจกรรมจุลินทรีย์ที่ถูกกำหนด โดยการทดสอบ spot-on--บริเวณสนามหญ้า sakei L. ATCC 15521 โดยใช้จุลินทรีย์บ่งชี้ ในการทดลองทั้งหมด bacteriocin ผลิตพันธุ์ L. sakei ถั่ว sakei 2a ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก (&เดอมาร์ตินี่ฝรั่งเศส 1998)

2.6 สเปกตรัมของกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรีย
สองแยก (69 และ 94) ที่ผลิตเอนไซม์ proteolytic ความไวต่อสารต้านจุลชีพ และไม่ได้รับผลกระทบ โดยค่า pH ความร้อน และสารเคมีตัว แทน bacteriocin ผู้ผลิตพิจารณา และทดสอบกิจกรรมจุลินทรีย์กับสายพันธุ์เป้าหมายที่ระบุไว้ในตารางที่ 2 ดัง นั้น นอกจากแบคทีเรียชอบเกลือและทนเกลือเพื่อใช้ที่แยกต่างหากจาก charqui สายพันธุ์เหล่านี้รวมสายพันธุ์อ้างอิง (ATCC และอื่น ๆ) และอาหารแยกเป็นชุดวัฒนธรรมที่อาหารจุลชีววิทยาปฏิบัติการของมหาวิทยาลัยของเปา เปา บราซิล กิจกรรมที่ถูกประเมินโดยใช้การทดสอบ spot-on--บริเวณสนามหญ้า จุลินทรีย์เป้าหมายถือว่าสำคัญโหมโปรดิวเซอร์ bacteriocin เมื่อเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนยับยั้งการเจริญเติบโต อย่างน้อย 5 มม. สภาพการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่ผ่านการทดสอบแต่ละแสดงในตารางที่ 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 ความไวของสารยับยั้งเอนไซม์โปรตีเอสที่จะ
มีผลบังคับใช้ของเอนไซม์โปรตีนที่ฤทธิ์ต้านจุลชีพของ CFS เตรียมตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในมาตรา 2.3 ได้รับการทดสอบตาม Van Reenen, จู๋และ Chikindas (1998) หนึ่งมิลลิลิตรของ CFS ผสมกับน้ำย่อย (1 mg / มิลลิลิตร) หรือโปรติเอส (1 mg / มิลลิลิตร) และบ่มที่ 37 ° C นาน 30 นาที เอนไซม์ที่ถูกซื้อมาจากซิกม่า, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา ปฏิกิริยาของเอนไซม์ก็หยุดด้วยความร้อนที่ 100 ° C เป็นเวลา 3 นาทีและฤทธิ์ต้านจุลชีพได้รับการประเมินจากการทดสอบจุดบนสนามหญ้า2.5 ผลของพีเอชอุณหภูมิและสารเคมีตัวแทนในฤทธิ์ต้านจุลชีพผลของ pH ต่อฤทธิ์ต้านจุลชีพของ CFS ได้รับการทดสอบการปรับค่าพีเอชของ aliquots (5 มิลลิลิตร) CFS จาก 2.0 ถึง 12.0 (โดยมีการเพิ่มขึ้นของหน่วย pH หนึ่ง) 1 M NaOH หรือ 1 M HCl (Synth, Diadema, บราซิล) หลังจากการบ่มที่ 25 ° C เป็นเวลา 30 นาที, ค่าพีเอชที่ถูกปรับ 7.0 ผลกระทบของอุณหภูมิที่มีฤทธิ์ต้านจุลชีพของ CFS ได้รับการทดสอบความร้อนของ aliquots 1 มิลลิลิตร CFS ที่ 60 ° C 80 ° C และ 100 ° C เป็นเวลา 30 นาที, 60 นาทีและ 120 นาที ผลของโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) (BioAgency, เซาเปาลู, บราซิล), กรด tetraacetic ethylenediamine (EDTA) (Invitrogen, คาร์ลส, สหรัฐอเมริกา), ทวี 80 (Synth, Diadema, บราซิล) และยูเรีย (Synth, Diadema, บราซิล) กับกิจกรรมต้านจุลชีพได้รับการทดสอบโดยการเพิ่ม 1% (w / v) ของสารเหล่านี้จะ CFS สำหรับการทดสอบฤทธิ์ต้านจุลชีพทั้งหมดถูกกำหนดโดยการทดสอบจุดบนสนามหญ้าโดยใช้ L. sakei ATCC 15521 เป็นจุลินทรีย์ตัวบ่งชี้ ในการทดลองทั้งหมด bacteriocin ผลิตสายพันธุ์ L. sakei subsp sakei 2a ใช้เป็นที่ควบคุมบวก (เดอมาร์ตินี่และฝรั่งเศส, 1998) 2.6 สเปกตรัมของฤทธิ์ต้านแบคทีเรียสองสายพันธุ์ (69 และ 94) ที่ผลิตสารต้านจุลชีพที่มีความสำคัญกับเอนไซม์โปรตีนและไม่ได้รับผลกระทบจากค่า pH, ความร้อนและสารเคมีที่ได้รับการพิจารณาผู้ผลิต bacteriocin และทดสอบจึงเป็นกิจกรรมที่ยาปฏิชีวนะกับสายพันธุ์เป้าหมายที่ระบุไว้ในตารางที่ 2 นอกจากนี้ยังมีแบคทีเรียชอบเกลือและทนเค็มที่แยกได้จาก charqui สายพันธุ์เหล่านี้รวมถึงสายพันธุ์อ้างอิง (ATCC และอื่น ๆ ) และอาหารแยกเป็นของสะสมที่วัฒนธรรมอาหารปฏิบัติการจุลชีววิทยาของมหาวิทยาลัยเซาท์เปาโล, เซาเปาโลประเทศบราซิล กิจกรรมที่ได้รับการประเมินโดยใช้การทดสอบที่จุดบนสนามหญ้า จุลินทรีย์กลุ่มเป้าหมายได้รับการพิจารณาความไวต่อความเครียดผลิต bacteriocin เมื่อเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนการยับยั้งการเจริญเติบโตเป็นอย่างน้อย 5 มิลลิเมตร สภาวะการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์แต่ละการทดสอบจะแสดงในตารางที่ 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . ความไวของสารที่ยับยั้งเอนไซม์ที่จะระ
ผลของโปรตีนเอนไซม์ในกิจกรรมการต้านจุลชีพของโฆษณา เตรียมตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในส่วน 2.3 ถูกทดสอบตามรถตู้ reenen , Dicks และ chikindas ( 1998 ) หนึ่งมิลลิลิตรของโฆษณาที่ถูกผสมกับเอนไซม์เปปซิน ( 1 mg / ml ) หรือโปรตีน ( 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาทีเอนไซม์ที่ถูกซื้อจาก Sigma , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกาปฏิกิริยาเอนไซม์ถูกหยุดโดยความร้อนที่อุณหภูมิ 100 องศา C เป็นเวลา 3 นาที และฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ถูกประเมิน โดยจุดบนสนามหญ้าทดสอบ

2.5 ผลของ pH , อุณหภูมิและสารเคมีบน
ฤทธิ์ต้านจุลชีพผลของ pH ที่มีฤทธิ์ต้านจุลชีพของโฆษณาที่ถูกทดสอบค่า pH ของเฉยๆ ( 5 มล. ) ของโฆษณาจาก 2.0 ถึง 12.0 ( มีการเพิ่มขึ้นของหนึ่งหน่วย pH ) 1 M NaOH หรือ 1 M HCl ( Synth Diadema บราซิล ) หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลา 30 นาที เพื่อปรับ pH เป็น 7.0 .ผลของอุณหภูมิต่อฤทธิ์ต้านจุลชีพของโฆษณาที่ถูกทดสอบความร้อนเฉยๆ 1 มิลลิลิตรของ CFS ที่ 60 °องศาเซลเซียส , 80 ° C และ 100 องศา C นาน 30 นาที 60 นาที และ 120 นาที ผลของโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) ( bioagency เซาเปาโล ประเทศบราซิล tetraacetic acid ( EDTA ) , ธิลีนไดเ ีน ) ( Invitrogen Carlsbad , USA ) Tween 80 ( Synth Diadema บราซิล ) และยูเรีย ( Synth Diadema ,บราซิล ) เมื่อทดสอบฤทธิ์ต้านจุลชีพโดยเพิ่ม 1% ( w / v ) สารเหล่านี้เพื่องานโฆษณา เพื่อทดสอบฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ถูกกำหนดโดยจุดบนสนามหญ้าทดสอบ ใช้ L . sakei 15521 เป็นตัวเชื้อจุลินทรีย์ ในการทดลองทั้งหมดที่ผลิตความเครียดต่อลิตร sakei subsp . sakei 2A ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก ( เดอ มาตินี่& Franco , 1998 ) .

2.6สเปกตรัมของกิจกรรม antibacterial
2 ไอโซเลท ( 69 และ 94 ) ที่ผลิตสารยับยั้งเอนไซม์ที่จำเพาะต่อ และไม่ได้รับผลกระทบจากค่า pH , ความร้อนและสารเคมี ถือว่าเป็นผู้ผลิตแบคทีริโอซินและดังนั้นจึงทดสอบฤทธิ์ต้านจุลชีพ เป้าหมายสายพันธุ์ที่แสดงในตารางที่ 2 นอกเหนือไปจากเอนไซม์ทนเค็มและแบคทีเรียที่แยกได้จาก charqui ,สายพันธุ์ได้แก่สายพันธุ์อ้างอิง ( ATCC และอื่น ๆ ) และอาหารจากวัฒนธรรมอาหารของคอลเลกชันที่ห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยา มหาวิทยาลัยเซาเปาโล เซา เปาโล ประเทศบราซิล กิจกรรมที่ประเมินโดยใช้จุดบนสนามทดสอบเป้าหมายคือการพิจารณาที่ไวต่อเชื้อแบคทีริโอซิน ผู้ผลิตสายพันธุ์เมื่อเส้นผ่าศูนย์กลางของยับยั้งการเจริญเติบโตโซน คืออย่างน้อย 5 มม. โดยเงื่อนไขของแต่ละการทดสอบจุลินทรีย์จะถูกแสดงในตารางที่ 2