2.2. Samples2.2.1. Farms e broiler

2.2. Samples
2.2.1. Farms e broiler faeces
On the farms, ten samples of fresh faecal droppings were
collected from each flock one week before slaughtering and analysed
by the culture method.
2.2.2. Slaughterhouse e carcasses
At the slaughterhouse, the monitored flocks were processed as
the first three batches on the scheduled day, with C. jejuni negative
flock(s) having priority over the others. Ten carcasses per batch
were selected at the entrance to the evisceration room, with an
approximate 5-min time interval between them, each distinctively
marked and then sampled sequentially down the slaughter line in
the evisceration room. The same carcasses were also sampled after
the cooling and freezing steps. Approximately 2 g (2e4 cm2 ) of
neck-skin from each individual carcass was taken to analyse for
presence and genotype of C. jejuni and to assess the C. jejuni
contamination level of each carcass at three successive sampling
positions in the evisceration room: at carcass entry immediately
after scalding and plucking (post-plucking, pPL), immediately after
the evisceration step (post-evisceration, pEV) and after the final
rinse before leaving the evisceration room and the start of the dry
air-cooling step (post-final rinse, pFR). To analyse the effect of
refrigeration and freezing, five of the ten monitored carcasses were
neck-skin sampled and C. jejuni -analysed after three days of
refrigeration and the other five after three days of freezing.
2.2.3. Slaughterhouse e caecal contents
To estimate the genetic heterogeneity of the C. jejuni population
in each flock/batch at the time of slaughtering, caeca of the same
birds were collected immediately after the evisceration step and
caecal contents were cultured for the presence and PFGE analysis of
C. jejuni.
2.2.4. Slaughterhouse e environment
To evaluate the possibility of cross-contamination, the slaughterhouse
environment and processing equipment were sampled at
selected critical locations before and after slaughtering of the three
batches investigated: water from the stunning tank (0.5 l), water
from the scalding tank (0.5 l), carcass debris (5 g) from the cloaca/
vent-cutter-machine and carcass debris (5 g) from the eviscerating
machine.
2.3. Isolation and identification methods
Campylobacter isolation from faecal samples was performed by
the direct plating method using mCCDA and Skirrowselective agars
(Oxoid, UK), incubated for 48 h at 41.5 C in a microaerophilic atmosphere
created by GENbox generators (BioMerieux, France).
Neck-skin samples were analysed by the standard ISO-10272-
2:2006 enumeration method (ISO, 2006b). Briefly, 1 ml of each
initial sample suspensionwas applied onto three mCCDA plates and
0.1 ml of further 5 decimal dilutions on single CCDA plates. After
40e48 h incubation at 41.5 C in microaerophilic atmosphere, two
plates from two successive dilutions with less than 150 Campylobacter
e suspected colonies per plate were selected to count the
Colony Forming Units (CFU-s) and calculate the CFU content in the
initial suspension. Campylobacters from the slaughterhouse environment
and processing equipment samples were detected according
to ISO-10272-1:2006, using selective enrichment in Bolton
broth (Oxoid, UK) followed by plating on mCCDA and Skirrowagars
(ISO, 2006a). Liquid samples (water) were processed as sediment
after 20.000 g/15 min of centrifugation. The isolates were genus
and species-identified using the same standard, according to results
of hippurate, indoxyl acetate, catalase and sensitivity to
cephalotine and nalidixic acid tests.
2.4. Pulsed-field gel electrophoresis genotyping
For genotyping with PFGE, a PulseNet standardised protocolwas
used (Ribot et al., 2001). All isolates were subjected to PFGE analysis
using the restriction endonuclease SmaI. The fragments generated
were separated by electrophoresis for 18 h at 6 V/cm and 14 C with
pulse times from 6.7 s to 35.4 s in a CHEF-DR II system (BioRad,
Hercules, CA, USA). PFGE profiles were subjected to computerassisted
analysis with BioNumerics software (version 6.0, Applied
Maths, Sint-Martens-Latem, Belgium). Salmonella Braenderup
H9812 was used for band normalisation. Dendrograms with 1%
optimisation and 1% position tolerance were created using an
UPGMA (Dice coefficient) algorithm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. ตัวอย่าง2.2.1. ฟาร์มอีไก่เนื้อ faecesในฟาร์ม 10 ตัวอย่างของ faecal มูลสดดีรวบรวมจากแต่ละแกะหนึ่งสัปดาห์ก่อน slaughtering และ analysedโดยวัฒนธรรมวิธีการ2.2.2. บิดาอีซากบิดา จำนวนเกือบเท่าเดิมตรวจสอบถูกประมวลผลเป็นชุดแรกสามในวันที่กำหนด มี C. jejuni ลบflock(s) ที่มีความสำคัญเหนือผู้อื่น ซากสิบต่อชุดเลือกที่เข้ากับห้อง evisceration มีการประมาณช่วงเวลา 5 นาทีระหว่างนั้น ละ distinctivelyทำเครื่องหมายแล้ว ความลำดับลงรายการฆ่าห้อง evisceration ซากเดียวกันยังมีความหลังการทำความเย็น และขั้นตอนการแช่แข็ง ประมาณ 2 กรัม (2e4 cm2) ของผิวคอจากซากแต่ละแต่ละตัวถูกนำไปวิเคราะห์ในสถานะและลักษณะทางพันธุกรรม ของ C. jejuni และประเมิน C. jejuniระดับการปนเปื้อนของแต่ละซากที่สามสุ่มตัวอย่างต่อเนื่องตำแหน่งในห้อง evisceration: ซากรายการทันทีหลังจาก scalding และถอนขน (หลังถอนขน pPL), ทันทีหลังจากขั้นตอนการ evisceration (evisceration หลัง pEV) และ หลังสุดท้ายล้างก่อนออกจากห้อง evisceration และการเริ่มต้นแห้งair-cooling ขั้นตอน (ขั้นสุดท้ายหลังล้าง pFR) การวิเคราะห์ผลของการแช่แข็งและแช่แข็ง ห้าสิบตรวจสอบซากได้ตัวอย่างผิวหนังคอและ C. jejuni-analysed หลังจาก 3 วันแช่แข็งและอื่น ๆ 5 หลังจากสามวันของจุดเยือกแข็ง2.2.3 เนื้อหา caecal ของอีบิดาต้อง heterogeneity ทางพันธุกรรมของประชากร C. jejuni ประเมินในแต่ละแกะ/ชุดในขณะ slaughtering, caeca เดียวกันทันทีหลังจากขั้นตอน evisceration ได้รวบรวมนก และเนื้อหา caecal มีอ่างสำหรับแสดงและวิเคราะห์ PFGEC. jejuni2.2.4 สิ่งแวดล้อมอีบิดาเพื่อประเมินโอกาสการขนปนเปื้อน บิดาสภาพแวดล้อมและอุปกรณ์การประมวลผลมีตัวอย่างที่เลือกตำแหน่งที่สำคัญก่อน และ หลัง slaughtering สามชุดสอบสวน: น้ำสวยงามถัง (0.5 ลิตร), น้ำจาก scalding ถัง (0.5 l), (5 กรัม) เศษซากจากการ cloaca /เครื่องจักรตัดระบายและซากเศษ (5 g) จากการ evisceratingเครื่อง2.3 การแยกและระบุวิธีการCampylobacter แยกจากตัวอย่าง faecal ถูกดำเนินการโดยวิธีการชุบโดยตรงโดยใช้ mCCDA และ Skirrowselective agars(Oxoid, UK), incubated สำหรับ h 48 ที่ 41.5 C ในบรรยากาศ microaerophilicสร้าง โดยเครื่องกำเนิดไฟฟ้า GENbox (BioMerieux ฝรั่งเศส)ตัวอย่างคอผิวที่ analysed ตามมาตรฐาน ISO-10272 -วิธีการแจงนับ 2:2006 (ISO, 2006b) สั้น ๆ 1 ml ของแต่ละเริ่มต้นใช้ไป 3 แผ่น mCCDA suspensionwas ตัวอย่าง และเพิ่มเติม 5 ทศนิยม dilutions บนแผ่น CCDA เดียว 0.1 มล. หลังจาก40e48 ฟักตัว h ที่ 41.5 C ในบรรยากาศ microaerophilic, 2แผ่นจาก dilutions สองต่อกับ Campylobacter น้อยกว่า 150สงสัยอีอาณานิคมต่อแผ่นได้เลือกนับการโคโลนีขึ้นหน่วย (CFU-s) และคำนวณเนื้อหา CFU ในการหยุดเริ่มต้น Campylobacters จากบิดาสิ่งแวดล้อมและตามตัวอย่างอุปกรณ์ประมวลผลพบการ ISO-10272-ด้าน การใช้งานโดดเด่นในโบลตันซุป (Oxoid, UK) ตาม ด้วยชุบ mCCDA และ Skirrowagars(ISO, 2006a) ตัวอย่างของเหลว (น้ำ) ถูกประมวลผลเป็นตะกอนหลังจาก 20.000 g/15 นาทีของ centrifugation แยกมีสกุลและชนิดใช้มาตรฐาน ตามผลลัพธ์เดียวhippurate, indoxyl acetate, catalase และความไวในการทดสอบกรดนาลิดิซิกและ cephalotine2.4 การฟิลด์ Pulsed เจ electrophoresis genotypingสำหรับ genotyping กับ PFGE, PulseNet เป็นแบบ protocolwasใช้ (Ribot และ al., 2001) ทั้งหมดที่แยกได้ถูกต้องวิเคราะห์ PFGEใช้ endonuclease จำกัด SmaI ชิ้นส่วนที่สร้างขึ้นถูกคั่น ด้วย electrophoresis ใน 18 h ที่ 6 V/cm และ C 14 ด้วยเวลาชีพจรจาก 6.7 s เพื่อ 35.4 s ในระบบ DR เชฟ II (BioRadเฮอร์คิวลิส CA สหรัฐอเมริกา) โปรไฟล์ของ PFGE ถูกต้อง computerassistedวิเคราะห์ ด้วยซอฟต์แวร์ BioNumerics (เวอร์ชัน 6.0 ใช้คณิตศาสตร์ Latem ซินท์ Martens เบลเยียม) สาย BraenderupH9812 ถูกใช้สำหรับวง normalisation Dendrograms 1%การเพิ่มประสิทธิภาพและการยอมรับตำแหน่ง 1% ถูกสร้างโดยใช้การอัลกอริทึม UPGMA (สัมประสิทธิ์ลูกเต๋า)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 ตัวอย่าง
2.2.1 ฟาร์มจอุจจาระไก่เนื้อในฟาร์มสิบตัวอย่างมูลอุจจาระสดที่ถูกเก็บมาจากฝูงแต่ละหนึ่งสัปดาห์ก่อนการฆ่าและวิเคราะห์โดยวิธีการเพาะเลี้ยง. 2.2.2 ซากอีโรงฆ่าสัตว์ในโรงฆ่าสัตว์ที่ฝูงตรวจสอบที่ถูกประมวลผลเป็นครั้งแรกที่สามสำหรับกระบวนการในวันที่กำหนดไว้กับเชิงลบC. jejuni ฝูง (s) มีความสำคัญมากกว่าคนอื่น ๆ สิบซากต่อชุดได้รับการคัดเลือกที่ทางเข้าห้องชำแหละที่มีประมาณช่วงเวลา5 นาทีระหว่างพวกเขาแต่ละคนอย่างชัดเจนการทำเครื่องหมายและชิมแล้วตามลำดับลงเส้นฆ่าในห้องชำแหละ ซากเดียวกันเก็บตัวอย่างหลังจากการทำความเย็นและขั้นตอนการแช่แข็ง ประมาณ 2 กรัม (2e4 cm2) ของคอผิวจากซากของแต่ละคนถูกนำตัวไปวิเคราะห์สำหรับการแสดงตนและจีโนไทป์ของC. jejuni และการประเมิน C. jejuni ระดับการปนเปื้อนของซากแต่ละที่สามเก็บตัวอย่างต่อเนื่องในตำแหน่งห้องชำแหละนี้ที่รายการซากทันทีหลังจากลวกและถอนขน (โพสต์ถอนขน, PPL) ทันทีหลังจากขั้นตอนชำแหละ(ที่โพสต์ชำแหละ, PEV) และหลังสุดท้ายล้างก่อนที่จะออกจากห้องชำแหละและจุดเริ่มต้นของแห้งขั้นตอนที่อากาศเย็น(โพสต์ ล้างสุดท้าย PFR) การวิเคราะห์ผลของการทำความเย็นและแช่แข็งห้าสิบซากตรวจสอบเป็นคอผิวตัวอย่างC. jejuni และ -analysed หลังจากสามวันของการทำความเย็นและอื่นๆ ที่ห้าในวันที่สามของการแช่แข็ง. 2.2.3 โรงฆ่าสัตว์จเนื้อหา caecal เพื่อประเมินความหลากหลายทางพันธุกรรมของประชากร C. jejuni ในแต่ละฝูง / ชุดในช่วงเวลาของการฆ่าที่ caeca เดียวกันนกที่ถูกเก็บรวบรวมทันทีหลังจากขั้นตอนการชำแหละและเนื้อหาcaecal เลี้ยงสำหรับการแสดงตนและการวิเคราะห์ PFGE ของซี jejuni. 2.2.4 โรงฆ่าสัตว์สภาพแวดล้อมจเพื่อประเมินความเป็นไปได้ของการปนเปื้อนที่โรงฆ่าสัตว์สภาพแวดล้อมและการประมวลผลอุปกรณ์เก็บตัวอย่างในสถานที่สำคัญที่เลือกก่อนและหลังการฆ่าในสามสำหรับกระบวนการตรวจสอบ: น้ำจากถังที่สวยงาม (0.5 ลิตร) น้ำจากถังลวก( 0.5 ลิตร) เศษซาก (5 กรัม) จากโสโครก / ระบายตัดเครื่องและเศษซาก (5 กรัม) จากการชำแหละเครื่อง. 2.3 การแยกและจำแนกวิธีการแยก Campylobacter จากตัวอย่างอุจจาระได้ดำเนินการโดยวิธีการชุบโดยตรงโดยใช้mCCDA และสาหร่าย Skirrowselective (Oxoid สหราชอาณาจักร), บ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่ 41.5 องศาเซลเซียสในบรรยากาศ microaerophilic ที่สร้างขึ้นโดยกำเนิด GENbox (bioMerieux ฝรั่งเศส). คอ ตัวอย่าง -skin วิเคราะห์มาตรฐาน ISO-10272- 2: 2006 วิธีการแจงนับ (ISO, 2006b) สั้น ๆ 1 มิลลิลิตรของแต่ละตัวอย่างเริ่มต้นsuspensionwas นำไปใช้บนสามแผ่น mCCDA และ0.1 มิลลิลิตรอีก 5 เจือจางทศนิยมบนจาน CCDA เดียว หลังจาก40e48 บ่มชั่วโมงที่ 41.5 องศาเซลเซียสในบรรยากาศ microaerophilic สองแผ่นจากสองเจือจางต่อเนื่องที่มีน้อยกว่า150 Campylobacter อาณานิคมสงสัยว่าอีต่อแผ่นได้รับเลือกให้นับอาณานิคมขึ้นรูปหน่วย (CFU-s) และคำนวณเนื้อหา CFU ในการระงับการเริ่มต้น. campylobacters จากสภาพแวดล้อมโรงฆ่าสัตว์และการประมวลผลตัวอย่างอุปกรณ์ที่ตรวจพบตามมาตรฐานISO-10272-1: 2006 โดยใช้การตกแต่งในโบลตันเลือกน้ำซุป(Oxoid สหราชอาณาจักร) ตามด้วยการชุบใน mCCDA และ Skirrowagars (ISO, 2006a) ตัวอย่างของเหลว (น้ำ) ที่ถูกประมวลผลเป็นตะกอนหลังจากที่20.000 กรัม / 15 นาทีของการหมุนเหวี่ยง เชื้อเป็นประเภทและชนิดที่ระบุโดยใช้มาตรฐานเดียวกันตามผลของhippurate น้ำนม indoxyl, catalase และความไวต่อcephalotine และการทดสอบกรด nalidixic. 2.4 เจลชีพจรสนาม genotyping อิเล็กสำหรับgenotyping กับ PFGE เป็น PulseNet protocolwas มาตรฐานที่ใช้(บอต et al., 2001) ไอโซเลททั้งหมดถูกยัดเยียดให้การวิเคราะห์ PFGE ใช้ endonuclease จำกัด สมัย ชิ้นส่วนที่สร้างขึ้นถูกแยกจากกันโดยอิ 18 ชั่วโมงที่ 6 V / ซม. และ 14 องศาเซลเซียสกับครั้งชีพจรจาก6.7 เพื่อ 35.4 ในระบบ CHEF DR-II (BioRad, ดาว, CA, USA) โปรไฟล์ PFGE ถูกยัดเยียดให้ computerassisted วิเคราะห์กับ BioNumerics ซอฟแวร์ (รุ่น 6.0 ประยุกต์คณิตศาสตร์Sint-Martens-Latem, เบลเยียม) Salmonella Braenderup H9812 ถูกนำมาใช้สำหรับการฟื้นฟูวงดนตรี Dendrograms กับ 1% การเพิ่มประสิทธิภาพและความทนทานต่อตำแหน่ง 1% ที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้UPGMA (ค่าสัมประสิทธิ์ลูกเต๋า) อัลกอริทึม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . ตัวอย่าง
2.2.1 . ฟาร์มไก่เนื้ออุจจาระ
E ในฟาร์มตัวอย่างในสิบของมูลสด
เก็บจากแต่ละฝูงหนึ่งสัปดาห์ก่อนการฆ่า และวิเคราะห์โดยวิธีการเลี้ยง
.
2.2.2 . โรงฆ่าสัตว์ E ซาก
ที่โรงฆ่าสัตว์ , การติดตามฝูงแพะแกะที่ถูกประมวลผลเป็น
3 อันดับแรก ชุดในนัดวันกับ C ใช้ลบ
ฝูง ( s ) มีสิทธิพิเศษเหนือผู้อื่นสิบซากต่อชุด
เลือกทางเข้าห้อง evisceration กับ
เวลา 5 นาทีช่วงเวลาระหว่างแต่ละเครื่องหมายแล้ว โดยพิจารณาความ

ลงฆ่าสายในห้อง evisceration . ซากเดียวกันยังเก็บตัวหลังจาก
เย็นและการแช่แข็งก้าว ประมาณ 2 G (
2e4 CM2 ) ของคอผิวแต่ละบุคคลได้มาจากซากวิเคราะห์สำหรับตน และจีโนไทป์ของเชื้อ C .
และเพื่อประเมินการปนเปื้อนของเชื้อ C .
( )
3 แต่ละซากที่ต่อเนื่องในตำแหน่งห้อง evisceration : ซากจากรายการทันที
หลังจากลวกและถอนขน ( หลังถอนขน ppl ) ทันทีหลังจาก
ตัดอวยวะภายในขั้นตอน ( โพสต์ evisceration pev , ) และสุดท้ายหลังจาก
ล้างก่อนไปตัดอวยวะภายในห้องและการเริ่มต้นของบริการ
อากาศเย็นขั้นสุดท้ายหลังล้าง PFR ) เพื่อวิเคราะห์ผลกระทบของ
แช่แข็งและแช่แข็ง ห้าในสิบตรวจสอบซากถูก
คอผิวตัวอย่างและซีไปใช้ - วิเคราะห์หลังจากสามวัน
แช่แข็งและอื่น ๆห้าหลังจากที่สามวันของแช่แข็ง .
2.2.3 . E
caecal เนื้อหาโรงฆ่าสัตว์การประเมินความหลากหลายทางพันธุกรรมของประชากรเชื้อ C .
ในแต่ละฝูง / ชุดในเวลาของการฆ่าพยาธิของนกเดียวกัน
, เก็บทันทีหลังจากตัดอวยวะภายในขั้นตอนและ
caecal เนื้อหาอาหารการแสดงและการวิเคราะห์ของเชื้อ C . PFGE
.
2.2.4 . สิ่งแวดล้อมโรงฆ่าสัตว์ E
เพื่อประเมินความเป็นไปได้ของการปนเปื้อนข้ามโรงฆ่าสัตว์
สิ่งแวดล้อมและอุปกรณ์ประมวลผล จำนวนที่
เลือกสถานที่สำคัญทั้งก่อนและหลังฆ่า 3
ชุดสืบสวน : น้ำจากถังที่สวยงาม ( 0.5 ลิตร ) น้ำ
จากลวกถัง ( 0.5 ลิตร ) , เศษซาก ( 5 กรัม ) จากการล้างกลุ่ม /
ระบายเครื่องตัดกระดาษและซากเศษ ( 5 กรัม ) จากการชำแหละเครื่อง
.
2.3 การแยกและระบุวิธีการ
รวมทั้งแยกจากตัวอย่างในการวิเคราะห์โดยวิธีชุบด้วย
mccda skirrowselective โดยตรงและ agars
( oxoid , อังกฤษ ) , บ่ม 48 ชั่วโมง ที่ติด  C ในไมโครแอโรฟิลิกบรรยากาศ
สร้างโดย genbox เครื่องกำเนิดไฟฟ้า ( biomerieux , ฝรั่งเศส ) .
คอผิววิเคราะห์ตามมาตรฐาน iso-10272 -
2:2006 วิธีการ ISO 2006b ) สั้น ๆ , แต่ละ
1 มล.suspensionwas ตัวอย่างเบื้องต้นใช้กับจาน 3 mccda
0.1 มิลลิลิตรต่อ 5 วิธีการ ccda ทศนิยมในจานเดียว หลังจาก
40e48 H บ่มที่ 41.5 องศาเซลเซียส ในบรรยากาศ  ไมโครแอโรฟิลิก สอง
แผ่นจากสองวิธีการต่อเนื่องกับน้อยกว่า 150 รวมทั้ง
E สงสัยอาณานิคมต่อจานไว้นับ
อาณานิคมสร้างหน่วย ( cfu-s ) และคำนวณ CFU เนื้อหา
เริ่มต้นระบบ campylobacters จากโรงฆ่าสัตว์และการประมวลผลตัวอย่างสิ่งแวดล้อม

ไปตามอุปกรณ์ตรวจพบ iso-10272-1:2006 ใช้ selective enrichment broth ( oxoid
ในโบลตัน , UK ) ตามด้วยชุบบน mccda และ skirrowagars
( ISO , 2006a ) ตัวอย่างของเหลว ( น้ำ ) โดยแปรรูปเป็นตะกอน
หลังจาก 20.000 กรัม / 15 นาทีของการปั่นเหวี่ยง แยกได้เป็นจำพวก
และชนิดที่ระบุการใช้มาตรฐานเดียวกัน ตามผลลัพธ์ของ hippurate นโดซิล
, อะซิเตท , Catalase และความไว

cephalotine และการทดสอบกรดนาลิดิซิก .
2.4 . การส่งเสริมการอ่าน
สำหรับฟิลด์เจลกับ PFGE , pulsenet มาตรฐาน protocolwas
ใช้ ( ribot et al . , 2001 ) ทั้งหมดถูกวิเคราะห์สายพันธุ์ PFGE
การตัดด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะใช้ .ชิ้นส่วนที่แยกได้จากตัวอย่าง
18 H 6 v / cm และ 14  C
ชีพจรครั้งจาก 6.7 S 35.4 ในระบบ chef-dr II ( biorad
, Hercules , CA , USA ) PFGE โปรไฟล์จะถูกวิเคราะห์ด้วย bionumerics การเรียน
( รุ่น 6.0 ซอฟต์แวร์ประยุกต์
คณิตศาสตร์ , ซินท์มาร์เทน latem , เบลเยียม ) ซัลโมเนลลา braenderup
h9812 ใช้วงดนตรีการฟื้นฟู .dendrograms กับ optimisation 1 %
1 % และยอมรับตำแหน่งถูกสร้างขึ้นโดยใช้
UPGMA ( ลูกเต๋า Coefficient ) ขั้นตอนวิธี