- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Experimental2.1. Materials and meth
Experimental
2.1. Materials and methods
Bromazepam, Medazepam and Midazolam as secondary standard materials were obtained from the Syrian Ministry f Health. The samples of raw materials were purchased from several local private pharmaceutical factories. The finished pharmaceutical samples (tablets, ampoules, capsules) were obtained from the community pharmacy and from several local and foreign pharmaceutical factories, including the brand company. Human serum samples were obtained from a hospital laboratory. Solvents especially for HPLC (acetonitrile, methanol, water) were purchased from the Merck, Panreac, Scharlau and Cham Lab companies. Ammonium acetate (extra pure) was purchased from Scharlau, ammonia solution (35%, w/w) was purchased from Surec. Excipient, microcrystalline cellulose (Avicel Ph102), was purchased from Gujarart Micro Wax. Lactose crystalline, magnesium stearate and talc were purchased from Borculo
2.2. Instruments and equipment
Cecil HPLC chromatographic system provided with Cecil adept UV/vis detector (CE4200) was used. Two pumps
(CE4100), Cecil adept dual piston pump, with manual injector (20 mL loop) were used to deliver the mobile phase
to the analytical column in a special oven column (CE4600); Ce11601 Column oven. Column C18 (3 mm) (250 mm 4.6 mm) Teknokroma columns TR-013204 Ultrafast Columns Tracer Extrasil was used. An ultrasonic device, Cole-Parmer-8892, a sensitive balance, Sartorius analytic balance (CPA225D) (sensitivity of 105 g) and a
pH-meter, Orion model 320 with glass electrode, were also used. Centrifuge, Hermle Z 230A, and Cartridge 18, RPAdsorbex by Merck, Darmstadt. FR were employed for serum samples.
2.3. Chromatographic conditions
The mobile phase consisted of acetonitrile, methanol, and 0.05 M ammonium acetate (25:45:30, v/v/v). The pH (pH¼9)
was adjusted by adding ammonia solution (35%, w/w). The detector wavelength was 240 nm. The flow rate was maintained at 1.3 mL/min. The column temperature was set at 50 1C. The injection volume was 20 mL.
2.4. Preparation of solutions
- 2.4.1. Preparation of stock solutions Stock solutions of 0.75 mg/mL Bromazepam, 0.50 mg/mL Medazepam, and 0.75 mg/mL Midazolam were prepared. 375 mg of Bromazepam was weighed and placed in a 500 mL volumetric flask. It was dissolved in an appropriate amount of the mobile phase solution, and stirred using a magnetic stirrer for a period between 15–30 min until it was completely dissolved. The 500 mL volume of the solution was filled with the mobile phase to obtain the desired concentration. Following the same procedure, 250 mg Medazepam and 375 mg Midazolam were weighed to prepare the desired stocksolutions.
- 2.4.2. Preparation of standards
Standard solutions of 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam, and 0.15 mg/mL Midazolam were prepared by taking 5 mL stock solution of 0.75 mg/mL Bromazepam 0.50 mg/mL Medazepam, and 0.75 mg/mL Midazolam with
a calibrated pipette and placing them in a 25 mL volumetric flask. The full volume of the flask was filled with the mobile
phase to get the desired concentrations.
- 2.4.3. Preparation of the standard mixture solution of Bromazepam, Medazepam and Midazolam 5 mL of each of the stock solutions of Bromazepam, Medazepam and Midazolam was transferred to a 25 mL volumetric flask. The full volume was filled with the mobile phase, which was stirred on an ultrasonic device for 15 min to get the
mixture solution of 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam, and 0.15 mg/mL Midazolam
- 2.4.4. Preparation of solutions for validation study
2.4.4.1. Standard solutions for linearity study. Five sequential concentrations were prepared from the stock solution containing respectively 80%, 90%, 100%, 110% and 120% of the standard solution concentration. They were prepared by transferring 8, 9, 10, 11, 12 mL of the stock solution, respectively, to a 50 mL flask, filling the full volume of the
flask with the mobile phase, and mixing.
2.4.4.2. Solutions for accuracy study. Tablet excipients [24] (i.e. Avesel, lactose, talc, magnesium stearate) were spiked to the standard solutions to obtain analyzed samples. Nine samples were divided into three groups containing respectively 80%, 100% and 120% of standard solution concentration.
2.4.4.3. Solutions for precision study. Tablet samples were analyzed. Nine samples were prepared and divided into three
groups containing respectively 80%, 100% and 120% of standard solution concentration.
2.4.4.4. Solutions for selectivity study. A drug-free sample was prepared from the excipients (Avesel, lactose, talc,
magnesium stearate). Three tablet samples containing 100% of standard solution concentration were also analyzed.
2.4.4.5. Solutions for robustness study. Three tablet samples containing 100% of standard solution concentration were
analyzed. The first sample was injected after adjusting the column oven temperature to 48 1C, second to 50 1C and the
third to 52 1C.
2.4.5. Preparation of samples
- 2.4.5.1. Raw materials. Samples were prepared in the same way as for the preparation of standard solutions of Bromazepam, Medazepam and Midazolam.
- 2.4.5.2. Tablets. Bromazepam tablet samples were prepared by weighing 20 tablets individually and the average weight per tablet was calculated. The tablets were ground to get a fine powder. The powder equivalent to 30 mg of Bromazepam was weighed and placed in a 100 mL volumetric flask. The powder was dissolved with the mobile phase, and mixed on a magnetic stirrer for half an hour. The full volume of the flask was filled with the mobile phase and mixed. The solution was filtered through Buchner’s funnel with 0.45 mm filters. 50 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to obtain 0.15 mg/mL solution of Bromazepam. Midazolam sample solutions were prepared in the same way to obtain a concentration of 0.15 mg/mL. For Medazepam, the powder equivalent to 25 mg of Medazepam was weighed and treated the same way. 50 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to eventually obtain 0.10 mg/mL solution of Medazepam.
- 2.4.5.3. Capsules. Bromazepam capsule samples were prepared by weighing 20 capsules individually and then calculating the average weight per capsule. The equivalent of 25 mg of Bromazepam was weighed from the powder content of the capsules, which was placed in a 100 mL volumetric flask. The powder was dissolved with the mobile phase and mixed on a magnetic stirrer for half an hour. The full volume of the flask was filled with the mobile phase and mixed. The solution was filtered through Buchner’s funnel with 0.45 mm filters. 60 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to obtain 0.15 mg/mL solution of Bromazepam.
2.4.5.4. Ampoules. Midazolam ampoule samples were prepared
from (50 mg/10 mL) ampoule solution. The ampoule solution was mixed for 5 min and 3 mL of the solution was placed into a 100 mL volumetric flask. The full volume was filled with the mobile phase and mixed well to obtain 0.15 mg/mL
solution of Midazolam.
2.4.6. Preparation of a series of standard solutions to determine the recovery from the serum
A series of standard solutions were prepared in the following concentrations (12–15–20–25–30 mg/mL) of Bromazepam, Medazepam and Midazolam by diluting their standard solutions (0.15 mg/mL for both Bromazepam and Midazolam and
0.10 mg/mL for Medazepam).
2.4.7. Preparation of a series of serum standard solutions
The above-mentioned series of standard solutions were prepared with doubled concentrations. Each 1 mL of the solutions was added to 1 mL drug-free serum to obtain a new series of serum standard solutions with the same concentrations of the said series. The serum standard solutions were centrifuged for half an hour.
2.4.8. Extraction
The serum solution was extracted by the liquid/solid extraction method using C18 cartridge in the following way:
– Precondition cartridge with 3 mL of methanol, withdraw. Then with 3 mL of water, withdraw.
– Apply the serum solution.
– Benzodiazepines were eluted with 10 mL of a mixture of methanol and acetonitrile (1:1). The eluates were left to dry for 15 min. Dry residues were reconstituted with mobile phase. The solutions were filtered through 0.45 mm HPLC filters before injected directly to HPLC.
2.4.9. Preparation of mobile phase
- 2.4.9.1. Preparation of 0.05 M ammonium acetate solution.
3.854 g of anhydrous ammonium acetate (molecular weight¼77.08 g) was weighed and placed into a 1 L volumetric flask. Distilled water was added and the mixture was stirred until complete dissolution. The full volume of the flask
was filled with distilled water and the resulting solution was filtered through 0.45 mm filters.
2.4.9.2. Preparation of one liter of mobile phase. In 1 L volumetric flask was added 250 mL acetonitrile, 400 mL
methanol and 300 mL of a fresh solution of 0.05 M ammonium acetate. The flask was filled with methanol to 1 L and
mixed well. Several drops of ammonia solution (35%, w/w) was added to adjust pH to 9 under stirring. The resulting
solution was filtered through 0.45 mm filters.
2.1. Materials and methods
Bromazepam, Medazepam and Midazolam as secondary standard materials were obtained from the Syrian Ministry f Health. The samples of raw materials were purchased from several local private pharmaceutical factories. The finished pharmaceutical samples (tablets, ampoules, capsules) were obtained from the community pharmacy and from several local and foreign pharmaceutical factories, including the brand company. Human serum samples were obtained from a hospital laboratory. Solvents especially for HPLC (acetonitrile, methanol, water) were purchased from the Merck, Panreac, Scharlau and Cham Lab companies. Ammonium acetate (extra pure) was purchased from Scharlau, ammonia solution (35%, w/w) was purchased from Surec. Excipient, microcrystalline cellulose (Avicel Ph102), was purchased from Gujarart Micro Wax. Lactose crystalline, magnesium stearate and talc were purchased from Borculo
2.2. Instruments and equipment
Cecil HPLC chromatographic system provided with Cecil adept UV/vis detector (CE4200) was used. Two pumps
(CE4100), Cecil adept dual piston pump, with manual injector (20 mL loop) were used to deliver the mobile phase
to the analytical column in a special oven column (CE4600); Ce11601 Column oven. Column C18 (3 mm) (250 mm 4.6 mm) Teknokroma columns TR-013204 Ultrafast Columns Tracer Extrasil was used. An ultrasonic device, Cole-Parmer-8892, a sensitive balance, Sartorius analytic balance (CPA225D) (sensitivity of 105 g) and a
pH-meter, Orion model 320 with glass electrode, were also used. Centrifuge, Hermle Z 230A, and Cartridge 18, RPAdsorbex by Merck, Darmstadt. FR were employed for serum samples.
2.3. Chromatographic conditions
The mobile phase consisted of acetonitrile, methanol, and 0.05 M ammonium acetate (25:45:30, v/v/v). The pH (pH¼9)
was adjusted by adding ammonia solution (35%, w/w). The detector wavelength was 240 nm. The flow rate was maintained at 1.3 mL/min. The column temperature was set at 50 1C. The injection volume was 20 mL.
2.4. Preparation of solutions
- 2.4.1. Preparation of stock solutions Stock solutions of 0.75 mg/mL Bromazepam, 0.50 mg/mL Medazepam, and 0.75 mg/mL Midazolam were prepared. 375 mg of Bromazepam was weighed and placed in a 500 mL volumetric flask. It was dissolved in an appropriate amount of the mobile phase solution, and stirred using a magnetic stirrer for a period between 15–30 min until it was completely dissolved. The 500 mL volume of the solution was filled with the mobile phase to obtain the desired concentration. Following the same procedure, 250 mg Medazepam and 375 mg Midazolam were weighed to prepare the desired stocksolutions.
- 2.4.2. Preparation of standards
Standard solutions of 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam, and 0.15 mg/mL Midazolam were prepared by taking 5 mL stock solution of 0.75 mg/mL Bromazepam 0.50 mg/mL Medazepam, and 0.75 mg/mL Midazolam with
a calibrated pipette and placing them in a 25 mL volumetric flask. The full volume of the flask was filled with the mobile
phase to get the desired concentrations.
- 2.4.3. Preparation of the standard mixture solution of Bromazepam, Medazepam and Midazolam 5 mL of each of the stock solutions of Bromazepam, Medazepam and Midazolam was transferred to a 25 mL volumetric flask. The full volume was filled with the mobile phase, which was stirred on an ultrasonic device for 15 min to get the
mixture solution of 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam, and 0.15 mg/mL Midazolam
- 2.4.4. Preparation of solutions for validation study
2.4.4.1. Standard solutions for linearity study. Five sequential concentrations were prepared from the stock solution containing respectively 80%, 90%, 100%, 110% and 120% of the standard solution concentration. They were prepared by transferring 8, 9, 10, 11, 12 mL of the stock solution, respectively, to a 50 mL flask, filling the full volume of the
flask with the mobile phase, and mixing.
2.4.4.2. Solutions for accuracy study. Tablet excipients [24] (i.e. Avesel, lactose, talc, magnesium stearate) were spiked to the standard solutions to obtain analyzed samples. Nine samples were divided into three groups containing respectively 80%, 100% and 120% of standard solution concentration.
2.4.4.3. Solutions for precision study. Tablet samples were analyzed. Nine samples were prepared and divided into three
groups containing respectively 80%, 100% and 120% of standard solution concentration.
2.4.4.4. Solutions for selectivity study. A drug-free sample was prepared from the excipients (Avesel, lactose, talc,
magnesium stearate). Three tablet samples containing 100% of standard solution concentration were also analyzed.
2.4.4.5. Solutions for robustness study. Three tablet samples containing 100% of standard solution concentration were
analyzed. The first sample was injected after adjusting the column oven temperature to 48 1C, second to 50 1C and the
third to 52 1C.
2.4.5. Preparation of samples
- 2.4.5.1. Raw materials. Samples were prepared in the same way as for the preparation of standard solutions of Bromazepam, Medazepam and Midazolam.
- 2.4.5.2. Tablets. Bromazepam tablet samples were prepared by weighing 20 tablets individually and the average weight per tablet was calculated. The tablets were ground to get a fine powder. The powder equivalent to 30 mg of Bromazepam was weighed and placed in a 100 mL volumetric flask. The powder was dissolved with the mobile phase, and mixed on a magnetic stirrer for half an hour. The full volume of the flask was filled with the mobile phase and mixed. The solution was filtered through Buchner’s funnel with 0.45 mm filters. 50 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to obtain 0.15 mg/mL solution of Bromazepam. Midazolam sample solutions were prepared in the same way to obtain a concentration of 0.15 mg/mL. For Medazepam, the powder equivalent to 25 mg of Medazepam was weighed and treated the same way. 50 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to eventually obtain 0.10 mg/mL solution of Medazepam.
- 2.4.5.3. Capsules. Bromazepam capsule samples were prepared by weighing 20 capsules individually and then calculating the average weight per capsule. The equivalent of 25 mg of Bromazepam was weighed from the powder content of the capsules, which was placed in a 100 mL volumetric flask. The powder was dissolved with the mobile phase and mixed on a magnetic stirrer for half an hour. The full volume of the flask was filled with the mobile phase and mixed. The solution was filtered through Buchner’s funnel with 0.45 mm filters. 60 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to obtain 0.15 mg/mL solution of Bromazepam.
2.4.5.4. Ampoules. Midazolam ampoule samples were prepared
from (50 mg/10 mL) ampoule solution. The ampoule solution was mixed for 5 min and 3 mL of the solution was placed into a 100 mL volumetric flask. The full volume was filled with the mobile phase and mixed well to obtain 0.15 mg/mL
solution of Midazolam.
2.4.6. Preparation of a series of standard solutions to determine the recovery from the serum
A series of standard solutions were prepared in the following concentrations (12–15–20–25–30 mg/mL) of Bromazepam, Medazepam and Midazolam by diluting their standard solutions (0.15 mg/mL for both Bromazepam and Midazolam and
0.10 mg/mL for Medazepam).
2.4.7. Preparation of a series of serum standard solutions
The above-mentioned series of standard solutions were prepared with doubled concentrations. Each 1 mL of the solutions was added to 1 mL drug-free serum to obtain a new series of serum standard solutions with the same concentrations of the said series. The serum standard solutions were centrifuged for half an hour.
2.4.8. Extraction
The serum solution was extracted by the liquid/solid extraction method using C18 cartridge in the following way:
– Precondition cartridge with 3 mL of methanol, withdraw. Then with 3 mL of water, withdraw.
– Apply the serum solution.
– Benzodiazepines were eluted with 10 mL of a mixture of methanol and acetonitrile (1:1). The eluates were left to dry for 15 min. Dry residues were reconstituted with mobile phase. The solutions were filtered through 0.45 mm HPLC filters before injected directly to HPLC.
2.4.9. Preparation of mobile phase
- 2.4.9.1. Preparation of 0.05 M ammonium acetate solution.
3.854 g of anhydrous ammonium acetate (molecular weight¼77.08 g) was weighed and placed into a 1 L volumetric flask. Distilled water was added and the mixture was stirred until complete dissolution. The full volume of the flask
was filled with distilled water and the resulting solution was filtered through 0.45 mm filters.
2.4.9.2. Preparation of one liter of mobile phase. In 1 L volumetric flask was added 250 mL acetonitrile, 400 mL
methanol and 300 mL of a fresh solution of 0.05 M ammonium acetate. The flask was filled with methanol to 1 L and
mixed well. Several drops of ammonia solution (35%, w/w) was added to adjust pH to 9 under stirring. The resulting
solution was filtered through 0.45 mm filters.
0/5000
ทดลอง2.1. วัสดุและวิธีการBromazepam, Medazepam และ Midazolam เป็นวัสดุรองมาตรฐานได้รับจาก f Syrian กระทรวงสุขภาพ ตัวอย่างของวัตถุดิบที่ซื้อจากหลายท้องถิ่นโรงยาส่วนตัว จะเสร็จยาตัวอย่าง (เม็ด ampoules แคปซูล) ได้รับ จากเภสัชกรรมชุมชน และ จากภายใน และต่างประเทศยาโรง งานหลาย รวมทั้งบริษัทแบรนด์ ตัวอย่างซีรั่มที่มนุษย์ได้รับจากห้องปฏิบัติการโรงพยาบาล หรือสารทำละลายสำหรับ HPLC (acetonitrile เมทานอล น้ำ) โดยเฉพาะที่ซื้อจากบริษัทเมอร์ค Panreac, Scharlau และห้อง ปฏิบัติการจาม แอมโมเนีย acetate (บริสุทธิ์พิเศษ) ที่ซื้อจาก Scharlau แอมโมเนียโซลูชัน (35%, w/w) ที่ซื้อจาก Surec Excipient จุลเซลลูโลส (Avicel Ph102), ถูกซื้อจาก Gujarart ไมโครแว็กซ์ แล็กโทสผลึก แมกนีเซียมสและแป้งซื้อจาก Borculo2.2 เครื่องมือ และอุปกรณ์ระบบ chromatographic HPLC เซซิลให้กับเซซิลที่คุณหญิงใช้เครื่องตรวจจับ UV/vis (CE4200) ปั๊มสอง(CE4100), ปั๊มลูกสูบคู่คุณหญิงเซซิล มีเครื่องทำบุหรี่ด้วยตนเอง (ลูป 20 mL) ใช้เฟสเคลื่อนที่จัดส่งคอลัมน์วิเคราะห์ในคอลัมน์เตาอบพิเศษ (CE4600); คอลัมน์ Ce11601 เตาอบ คอลัมน์ C18 (3 mm) (250 มม. 4.6 mm) คอลัมน์ Teknokroma Extrasil ติดตามคอลัมน์ Ultrafast TR 013204 ใช้ อุปกรณ์อัลตราโซนิก โคล-Parmer-8892 ดุลสำคัญ บริษัทซาร์โทเรียสรวมยอดดุล (CPA225D) (ความไวของ 105) และนอกจากนี้ยังได้ใช้การวัดค่า pH กลุ่มดาวนายพรานรุ่น 320 กับอิเล็กโทรดแก้ว เครื่องหมุนเหวี่ยง Hermle Z 230A และตลับ 18, RPAdsorbex โดยเมอร์ค ดาร์มส FR ได้จ้างตัวอย่างซีรั่ม2.3. chromatographic เงื่อนไขเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย acetonitrile เมทานอล และ 0.05 M acetate แอมโมเนีย (25:45:30, v/v/v) PH (pH¼9)ถูกปรับปรุง โดยการเพิ่มแอมโมเนียโซลูชัน (35%, w/w) ความยาวคลื่นตรวจจับ 240 nm อัตราการไหลไม่คงที่ 1.3 mL/min อุณหภูมิคอลัมน์ถูกตั้งค่าที่ 50 1C. ปริมาณฉีดได้ 20 mL 2.4 การจัดทำโซลูชั่น-2.4.1 เตรียมแก้ปัญหาหุ้นหุ้นโซลูชั่น 0.75 mg/mL Bromazepam, 0.50 mg/mL Medazepam และ 0.75 mg/mL Midazolam ถูกเตรียมไว้ 375 มก. Bromazepam หนัก และอยู่ในหนาว volumetric ขนาด 500 มล. มันถูกละลายในจำนวนที่เหมาะสมของระยะเคลื่อน และกวนใช้ช้อนคนแม่เหล็กสำหรับรอบระยะเวลาระหว่าง 15-30 นาทีจนกว่าจะถูกสังเกต ปริมาตร 500 mL ของโซลูชันเต็มไป ด้วยเฟสเคลื่อนที่เพื่อให้ได้ความเข้มข้นต้อง ต่อกระบวนการเดียวกัน Midazolam 375 มิลลิกรัมและ 250 มิลลิกรัม Medazepam ถูกชั่งน้ำหนักเตรียม stocksolutions ต้อง-2.4.2 เตรียมสอบมาตรฐานโซลูชั่นมาตรฐาน 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam และ 0.15 mg/mL Midazolam ถูกเตรียม โดยการนำโซลูชั่นหุ้น 5 mL ของ 0.75 mg/mL Bromazepam 0.50 mg/mL Medazepam และ 0.75 mg/mL Midazolam ด้วยเปตต์ calibrated และวางในหนาว volumetric 25 mL ปริมาณเต็มของหนาวนี้ก็เต็มไป ด้วยมือถือขั้นตอนให้ได้ความเข้มข้นต้อง-2.4.3 เตรียมของโซลูชันมาตรฐานส่วนผสมของ Bromazepam, Medazepam และ Midazolam 5 mL ของแต่ละโซลูชั่นหุ้น Bromazepam, Medazepam และ Midazolam ถูกถ่ายโอนไปยังหนาว volumetric 25 mL ปริมาณเต็มก็เต็มไป ด้วยเฟสเคลื่อนที่ ที่ถูกกวนบนอุปกรณ์การอัลตราโซนิก 15 นาทีจะได้รับ การผสมโซลูชั่นของ 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam และ Midazolam 0.15 mg/mL-2.4.4 เตรียมของโซลูชั่นสำหรับการศึกษาตรวจสอบ2.4.4.1 การแก้สำหรับแบบดอกไม้ศึกษา ความเข้มข้นตามลำดับห้าถูกเตรียมจากโซลูชันหุ้นตามลำดับประกอบด้วย 80%, 90%, 100%, 110% และ 120% ของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน พวกเขาได้เตรียมไว้ โดยโอน 8, 9, 10, 11, 12 mL ของโซลูชันหุ้น ตามลำดับ การหนาวเป็น 50 mL บรรจุเต็มปริมาตรหนาว ด้วยระยะเคลื่อน และผสม2.4.4.2. โซลูชั่นสำหรับความถูกต้องศึกษา แท็บเล็ต excipients [24] (เช่น Avesel ย่อยแลคโตส แป้ง แมกนีเซียมส) มี spiked เพื่อโซลูชั่นมาตรฐานเพื่อขอรับตัวอย่างวิเคราะห์ ตัวอย่าง 9 ถูกแบ่งออกเป็นสามกลุ่มตามลำดับประกอบด้วย 80%, 100% และ 120% ของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน2.4.4.3. โซลูชั่นสำหรับความแม่นยำในการเรียน มีวิเคราะห์ตัวอย่างแท็บเล็ต ตัวอย่างที่ 9 เตรียม และแบ่งออกเป็น 3กลุ่มที่ประกอบด้วยลำดับ 80%, 100% และ 120% ของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน2.4.4.4 การโซลูชั่นสำหรับวิธีศึกษา ตัวอย่างที่ปราศจากยาเสพติดถูกเตรียมจาก excipients (Avesel ย่อยแลคโตส แป้งแมกนีเซียมส) นอกจากนี้ยังได้วิเคราะห์ตัวอย่างแท็บเล็ตสามประกอบด้วย 100% ของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน2.4.4.5. ศึกษาโซลูชั่นสำหรับเสถียรภาพ สามตัวอย่างแท็บเล็ตที่ประกอบด้วย 100% ของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐานได้วิเคราะห์ ตัวอย่างแรกถูกฉีดหลังจากปรับอุณหภูมิเตาอบคอลัมน์การ 48 1C ประการที่สองการ 50 1C และประการที่สามเพื่อ 52 1C.2.4.5. เตรียมตัวอย่าง-2.4.5.1 ดิบ ตัวอย่างเตรียมไว้ในลักษณะเดียวกับการเตรียมของแก้ Bromazepam, Medazepam และ Midazolam-2.4.5.2 เม็ด ตัวอย่างแท็บเล็ต Bromazepam ถูกเตรียม โดยชั่ง 20 เม็ดละ และมีคำนวณน้ำหนักเฉลี่ยต่อเม็ด เม็ดที่พื้นจะมีฝุ่นละออง ผงเท่ากับ 30 มก. Bromazepam หนัก และอยู่ในหนาว volumetric 100 มล ผงส่วนยุบ ด้วยระยะเคลื่อน และผสมในช้อนคนเหล็กครึ่งชั่วโมง ปริมาณเต็มของหนาวเต็มไป ด้วยเฟสเคลื่อนที่ และผสม โซลูชันที่ถูกกรองผ่านกรวยของ Buchner ตัวกรอง 0.45 มม. 50 mL ของสารกรองมีอยู่ในหนาว volumetric 100 mL และปริมาณเต็มก็เต็มไป ด้วยระยะเคลื่อนรับโซลูชัน 0.15 mg/mL ของ Bromazepam โซลูชั่นอย่าง Midazolam ถูกเตรียมในวิธีเดียวกันเพื่อให้ได้ความเข้มข้นของ 0.15 mg/mL สำหรับ Medazepam ผงเท่ากับ 25 มก. Medazepam ถูกชั่งน้ำหนัก และรักษาแบบเดียวกับ 50 mL ของสารกรองมีอยู่ในหนาว volumetric 100 mL และปริมาณเต็มก็เต็มไป ด้วยเฟสเคลื่อนที่ในที่สุดได้รับโซลูชั่น 0.10 mg/mL ของ Medazepam-2.4.5.3 แคปซูล ตัวอย่างแคปซูล Bromazepam ถูกเตรียม โดยชั่ง 20 แคปซูลแต่ละ และจากนั้น คำนวณน้ำหนักเฉลี่ยต่อแคปซูล เทียบเท่ากับ 25 มิลลิกรัมของ Bromazepam มีน้ำหนักจากเนื้อหาผงของยาแคปซูล ซึ่งถูกวางไว้ในหนาว volumetric 100 มล ผงส่วนยุบกับเฟสเคลื่อนที่ และผสมในช้อนคนเหล็กในครึ่งชั่วโมง ปริมาณเต็มของหนาวเต็มไป ด้วยเฟสเคลื่อนที่ และผสม โซลูชันที่ถูกกรองผ่านกรวยของ Buchner ตัวกรอง 0.45 มม. 60 mL ของสารกรองมีอยู่ในหนาว volumetric 100 mL และปริมาณเต็มก็เต็มไป ด้วยระยะเคลื่อนรับโซลูชัน 0.15 mg/mL ของ Bromazepam2.4.5.4. ampoules มีเตรียมตัวอย่าง ampoule Midazolamจาก (50 mg/10 mL) ampoule โซลูชัน โซลูชัน ampoule ถูกผสมใน 5 นาที และ 3 mL ของโซลูชันมีอยู่ในหนาว volumetric 100 มล ด้วยเฟสเคลื่อนที่ และผสมด้วยเพื่อให้ได้ 0.15 mg/mL ปริมาณเต็มโซลูชั่น Midazolam2.4.6 การเตรียมชุดโซลูชั่นมาตรฐานเพื่อกู้คืนจากเซรั่มกำหนด ชุดโซลูชั่นมาตรฐานที่เตรียมในความเข้มข้นต่อไปนี้ (12 – 15 – 20 – 25 – 30 mg/mL) ของ Bromazepam, Medazepam และ Midazolam โดย diluting โซลูชันมาตรฐาน (0.15 mg/mL สำหรับ Bromazepam และ Midazolam และ0.10 mg/mL สำหรับ Medazepam)2.4.7 การเตรียมชุดของเซรั่มแก้ชุดดังกล่าวของโซลูชั่นมาตรฐานที่เตรียม มีความเข้มข้นสองเท่า แต่ละมล 1 ในโซลูชั่นที่เพิ่มรั่มฟรียา 1 mL จะได้รับซีรั่มแก้ชุดใหม่ มีความเข้มข้นเดียวกันของชุดดังกล่าว เซรั่มแก้ถูก centrifuged ครึ่งชั่วโมง2.4.8 การสกัดโซลูชั่นซีรั่มที่แยก โดยวิธีการสกัดของเหลว/ของแข็งใช้ตลับ C18 ในวิธีต่อไปนี้:– เงื่อนไขตลับกับ 3 mL ของเมทานอล ถอน แล้ว กับ mL 3 น้ำ ถอน– ใช้โซลูชั่นเซรั่ม– Benzodiazepines มี eluted กับ 10 mL ผสมระหว่างเมทานอลและ acetonitrile (1:1) Eluates ถูกปล่อยให้แห้งสำหรับ 15 นาทีแห้งตกถูก reconstituted ด้วยระยะเคลื่อน โซลูชั่นได้กรองผ่านตัวกรอง HPLC 0.45 มม.ก่อนฉีดโดยตรงการ HPLC2.4.9 การเตรียมระยะเคลื่อน-2.4.9.1 เตรียมของ 0.05 M แอมโมเนีย acetate g 3.854 ของไดแอมโมเนีย acetate (g weight¼77.08 โมเลกุล) หนัก และอยู่ในหนาว volumetric 1 L น้ำกลั่นเข้ามา และมีกวนผสมจนยุบทั้งหมด ปริมาณเต็มของหนาวนี้ก็เต็มไป ด้วยน้ำกลั่น และโซลูชันได้ถูกกรองผ่านตัวกรอง 0.45 mm2.4.9.2 การเตรียมลิตรหนึ่งของเฟสเคลื่อนที่ ใน 1 L หนาว volumetric เพิ่ม acetonitrile 250 mL, 400 mLเมทานอลและ 300 มล.ของโซลูชันสดของ acetate แอมโมเนีย 0.05 M หนาวนี้ก็เต็มไป ด้วยเมทานอลใน 1 L และผสมดี มีเพิ่มหลายหยดแอมโมเนียโซลูชัน (35%, w/w) ปรับ pH 9 ภายใต้กวน การส่งผลโซลูชันที่กรองผ่านตัวกรอง 0.45 มม.
การแปล กรุณารอสักครู่..
Experimental
2.1. Materials and methods
Bromazepam, Medazepam and Midazolam as secondary standard materials were obtained from the Syrian Ministry f Health. The samples of raw materials were purchased from several local private pharmaceutical factories. The finished pharmaceutical samples (tablets, ampoules, capsules) were obtained from the community pharmacy and from several local and foreign pharmaceutical factories, including the brand company. Human serum samples were obtained from a hospital laboratory. Solvents especially for HPLC (acetonitrile, methanol, water) were purchased from the Merck, Panreac, Scharlau and Cham Lab companies. Ammonium acetate (extra pure) was purchased from Scharlau, ammonia solution (35%, w/w) was purchased from Surec. Excipient, microcrystalline cellulose (Avicel Ph102), was purchased from Gujarart Micro Wax. Lactose crystalline, magnesium stearate and talc were purchased from Borculo
2.2. Instruments and equipment
Cecil HPLC chromatographic system provided with Cecil adept UV/vis detector (CE4200) was used. Two pumps
(CE4100), Cecil adept dual piston pump, with manual injector (20 mL loop) were used to deliver the mobile phase
to the analytical column in a special oven column (CE4600); Ce11601 Column oven. Column C18 (3 mm) (250 mm 4.6 mm) Teknokroma columns TR-013204 Ultrafast Columns Tracer Extrasil was used. An ultrasonic device, Cole-Parmer-8892, a sensitive balance, Sartorius analytic balance (CPA225D) (sensitivity of 105 g) and a
pH-meter, Orion model 320 with glass electrode, were also used. Centrifuge, Hermle Z 230A, and Cartridge 18, RPAdsorbex by Merck, Darmstadt. FR were employed for serum samples.
2.3. Chromatographic conditions
The mobile phase consisted of acetonitrile, methanol, and 0.05 M ammonium acetate (25:45:30, v/v/v). The pH (pH¼9)
was adjusted by adding ammonia solution (35%, w/w). The detector wavelength was 240 nm. The flow rate was maintained at 1.3 mL/min. The column temperature was set at 50 1C. The injection volume was 20 mL.
2.4. Preparation of solutions
- 2.4.1. Preparation of stock solutions Stock solutions of 0.75 mg/mL Bromazepam, 0.50 mg/mL Medazepam, and 0.75 mg/mL Midazolam were prepared. 375 mg of Bromazepam was weighed and placed in a 500 mL volumetric flask. It was dissolved in an appropriate amount of the mobile phase solution, and stirred using a magnetic stirrer for a period between 15–30 min until it was completely dissolved. The 500 mL volume of the solution was filled with the mobile phase to obtain the desired concentration. Following the same procedure, 250 mg Medazepam and 375 mg Midazolam were weighed to prepare the desired stocksolutions.
- 2.4.2. Preparation of standards
Standard solutions of 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam, and 0.15 mg/mL Midazolam were prepared by taking 5 mL stock solution of 0.75 mg/mL Bromazepam 0.50 mg/mL Medazepam, and 0.75 mg/mL Midazolam with
a calibrated pipette and placing them in a 25 mL volumetric flask. The full volume of the flask was filled with the mobile
phase to get the desired concentrations.
- 2.4.3. Preparation of the standard mixture solution of Bromazepam, Medazepam and Midazolam 5 mL of each of the stock solutions of Bromazepam, Medazepam and Midazolam was transferred to a 25 mL volumetric flask. The full volume was filled with the mobile phase, which was stirred on an ultrasonic device for 15 min to get the
mixture solution of 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam, and 0.15 mg/mL Midazolam
- 2.4.4. Preparation of solutions for validation study
2.4.4.1. Standard solutions for linearity study. Five sequential concentrations were prepared from the stock solution containing respectively 80%, 90%, 100%, 110% and 120% of the standard solution concentration. They were prepared by transferring 8, 9, 10, 11, 12 mL of the stock solution, respectively, to a 50 mL flask, filling the full volume of the
flask with the mobile phase, and mixing.
2.4.4.2. Solutions for accuracy study. Tablet excipients [24] (i.e. Avesel, lactose, talc, magnesium stearate) were spiked to the standard solutions to obtain analyzed samples. Nine samples were divided into three groups containing respectively 80%, 100% and 120% of standard solution concentration.
2.4.4.3. Solutions for precision study. Tablet samples were analyzed. Nine samples were prepared and divided into three
groups containing respectively 80%, 100% and 120% of standard solution concentration.
2.4.4.4. Solutions for selectivity study. A drug-free sample was prepared from the excipients (Avesel, lactose, talc,
magnesium stearate). Three tablet samples containing 100% of standard solution concentration were also analyzed.
2.4.4.5. Solutions for robustness study. Three tablet samples containing 100% of standard solution concentration were
analyzed. The first sample was injected after adjusting the column oven temperature to 48 1C, second to 50 1C and the
third to 52 1C.
2.4.5. Preparation of samples
- 2.4.5.1. Raw materials. Samples were prepared in the same way as for the preparation of standard solutions of Bromazepam, Medazepam and Midazolam.
- 2.4.5.2. Tablets. Bromazepam tablet samples were prepared by weighing 20 tablets individually and the average weight per tablet was calculated. The tablets were ground to get a fine powder. The powder equivalent to 30 mg of Bromazepam was weighed and placed in a 100 mL volumetric flask. The powder was dissolved with the mobile phase, and mixed on a magnetic stirrer for half an hour. The full volume of the flask was filled with the mobile phase and mixed. The solution was filtered through Buchner’s funnel with 0.45 mm filters. 50 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to obtain 0.15 mg/mL solution of Bromazepam. Midazolam sample solutions were prepared in the same way to obtain a concentration of 0.15 mg/mL. For Medazepam, the powder equivalent to 25 mg of Medazepam was weighed and treated the same way. 50 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to eventually obtain 0.10 mg/mL solution of Medazepam.
- 2.4.5.3. Capsules. Bromazepam capsule samples were prepared by weighing 20 capsules individually and then calculating the average weight per capsule. The equivalent of 25 mg of Bromazepam was weighed from the powder content of the capsules, which was placed in a 100 mL volumetric flask. The powder was dissolved with the mobile phase and mixed on a magnetic stirrer for half an hour. The full volume of the flask was filled with the mobile phase and mixed. The solution was filtered through Buchner’s funnel with 0.45 mm filters. 60 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to obtain 0.15 mg/mL solution of Bromazepam.
2.4.5.4. Ampoules. Midazolam ampoule samples were prepared
from (50 mg/10 mL) ampoule solution. The ampoule solution was mixed for 5 min and 3 mL of the solution was placed into a 100 mL volumetric flask. The full volume was filled with the mobile phase and mixed well to obtain 0.15 mg/mL
solution of Midazolam.
2.4.6. Preparation of a series of standard solutions to determine the recovery from the serum
A series of standard solutions were prepared in the following concentrations (12–15–20–25–30 mg/mL) of Bromazepam, Medazepam and Midazolam by diluting their standard solutions (0.15 mg/mL for both Bromazepam and Midazolam and
0.10 mg/mL for Medazepam).
2.4.7. Preparation of a series of serum standard solutions
The above-mentioned series of standard solutions were prepared with doubled concentrations. Each 1 mL of the solutions was added to 1 mL drug-free serum to obtain a new series of serum standard solutions with the same concentrations of the said series. The serum standard solutions were centrifuged for half an hour.
2.4.8. Extraction
The serum solution was extracted by the liquid/solid extraction method using C18 cartridge in the following way:
– Precondition cartridge with 3 mL of methanol, withdraw. Then with 3 mL of water, withdraw.
– Apply the serum solution.
– Benzodiazepines were eluted with 10 mL of a mixture of methanol and acetonitrile (1:1). The eluates were left to dry for 15 min. Dry residues were reconstituted with mobile phase. The solutions were filtered through 0.45 mm HPLC filters before injected directly to HPLC.
2.4.9. Preparation of mobile phase
- 2.4.9.1. Preparation of 0.05 M ammonium acetate solution.
3.854 g of anhydrous ammonium acetate (molecular weight¼77.08 g) was weighed and placed into a 1 L volumetric flask. Distilled water was added and the mixture was stirred until complete dissolution. The full volume of the flask
was filled with distilled water and the resulting solution was filtered through 0.45 mm filters.
2.4.9.2. Preparation of one liter of mobile phase. In 1 L volumetric flask was added 250 mL acetonitrile, 400 mL
methanol and 300 mL of a fresh solution of 0.05 M ammonium acetate. The flask was filled with methanol to 1 L and
mixed well. Several drops of ammonia solution (35%, w/w) was added to adjust pH to 9 under stirring. The resulting
solution was filtered through 0.45 mm filters.
2.1. Materials and methods
Bromazepam, Medazepam and Midazolam as secondary standard materials were obtained from the Syrian Ministry f Health. The samples of raw materials were purchased from several local private pharmaceutical factories. The finished pharmaceutical samples (tablets, ampoules, capsules) were obtained from the community pharmacy and from several local and foreign pharmaceutical factories, including the brand company. Human serum samples were obtained from a hospital laboratory. Solvents especially for HPLC (acetonitrile, methanol, water) were purchased from the Merck, Panreac, Scharlau and Cham Lab companies. Ammonium acetate (extra pure) was purchased from Scharlau, ammonia solution (35%, w/w) was purchased from Surec. Excipient, microcrystalline cellulose (Avicel Ph102), was purchased from Gujarart Micro Wax. Lactose crystalline, magnesium stearate and talc were purchased from Borculo
2.2. Instruments and equipment
Cecil HPLC chromatographic system provided with Cecil adept UV/vis detector (CE4200) was used. Two pumps
(CE4100), Cecil adept dual piston pump, with manual injector (20 mL loop) were used to deliver the mobile phase
to the analytical column in a special oven column (CE4600); Ce11601 Column oven. Column C18 (3 mm) (250 mm 4.6 mm) Teknokroma columns TR-013204 Ultrafast Columns Tracer Extrasil was used. An ultrasonic device, Cole-Parmer-8892, a sensitive balance, Sartorius analytic balance (CPA225D) (sensitivity of 105 g) and a
pH-meter, Orion model 320 with glass electrode, were also used. Centrifuge, Hermle Z 230A, and Cartridge 18, RPAdsorbex by Merck, Darmstadt. FR were employed for serum samples.
2.3. Chromatographic conditions
The mobile phase consisted of acetonitrile, methanol, and 0.05 M ammonium acetate (25:45:30, v/v/v). The pH (pH¼9)
was adjusted by adding ammonia solution (35%, w/w). The detector wavelength was 240 nm. The flow rate was maintained at 1.3 mL/min. The column temperature was set at 50 1C. The injection volume was 20 mL.
2.4. Preparation of solutions
- 2.4.1. Preparation of stock solutions Stock solutions of 0.75 mg/mL Bromazepam, 0.50 mg/mL Medazepam, and 0.75 mg/mL Midazolam were prepared. 375 mg of Bromazepam was weighed and placed in a 500 mL volumetric flask. It was dissolved in an appropriate amount of the mobile phase solution, and stirred using a magnetic stirrer for a period between 15–30 min until it was completely dissolved. The 500 mL volume of the solution was filled with the mobile phase to obtain the desired concentration. Following the same procedure, 250 mg Medazepam and 375 mg Midazolam were weighed to prepare the desired stocksolutions.
- 2.4.2. Preparation of standards
Standard solutions of 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam, and 0.15 mg/mL Midazolam were prepared by taking 5 mL stock solution of 0.75 mg/mL Bromazepam 0.50 mg/mL Medazepam, and 0.75 mg/mL Midazolam with
a calibrated pipette and placing them in a 25 mL volumetric flask. The full volume of the flask was filled with the mobile
phase to get the desired concentrations.
- 2.4.3. Preparation of the standard mixture solution of Bromazepam, Medazepam and Midazolam 5 mL of each of the stock solutions of Bromazepam, Medazepam and Midazolam was transferred to a 25 mL volumetric flask. The full volume was filled with the mobile phase, which was stirred on an ultrasonic device for 15 min to get the
mixture solution of 0.15 mg/mL Bromazepam, 0.10 mg/mL Medazepam, and 0.15 mg/mL Midazolam
- 2.4.4. Preparation of solutions for validation study
2.4.4.1. Standard solutions for linearity study. Five sequential concentrations were prepared from the stock solution containing respectively 80%, 90%, 100%, 110% and 120% of the standard solution concentration. They were prepared by transferring 8, 9, 10, 11, 12 mL of the stock solution, respectively, to a 50 mL flask, filling the full volume of the
flask with the mobile phase, and mixing.
2.4.4.2. Solutions for accuracy study. Tablet excipients [24] (i.e. Avesel, lactose, talc, magnesium stearate) were spiked to the standard solutions to obtain analyzed samples. Nine samples were divided into three groups containing respectively 80%, 100% and 120% of standard solution concentration.
2.4.4.3. Solutions for precision study. Tablet samples were analyzed. Nine samples were prepared and divided into three
groups containing respectively 80%, 100% and 120% of standard solution concentration.
2.4.4.4. Solutions for selectivity study. A drug-free sample was prepared from the excipients (Avesel, lactose, talc,
magnesium stearate). Three tablet samples containing 100% of standard solution concentration were also analyzed.
2.4.4.5. Solutions for robustness study. Three tablet samples containing 100% of standard solution concentration were
analyzed. The first sample was injected after adjusting the column oven temperature to 48 1C, second to 50 1C and the
third to 52 1C.
2.4.5. Preparation of samples
- 2.4.5.1. Raw materials. Samples were prepared in the same way as for the preparation of standard solutions of Bromazepam, Medazepam and Midazolam.
- 2.4.5.2. Tablets. Bromazepam tablet samples were prepared by weighing 20 tablets individually and the average weight per tablet was calculated. The tablets were ground to get a fine powder. The powder equivalent to 30 mg of Bromazepam was weighed and placed in a 100 mL volumetric flask. The powder was dissolved with the mobile phase, and mixed on a magnetic stirrer for half an hour. The full volume of the flask was filled with the mobile phase and mixed. The solution was filtered through Buchner’s funnel with 0.45 mm filters. 50 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to obtain 0.15 mg/mL solution of Bromazepam. Midazolam sample solutions were prepared in the same way to obtain a concentration of 0.15 mg/mL. For Medazepam, the powder equivalent to 25 mg of Medazepam was weighed and treated the same way. 50 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to eventually obtain 0.10 mg/mL solution of Medazepam.
- 2.4.5.3. Capsules. Bromazepam capsule samples were prepared by weighing 20 capsules individually and then calculating the average weight per capsule. The equivalent of 25 mg of Bromazepam was weighed from the powder content of the capsules, which was placed in a 100 mL volumetric flask. The powder was dissolved with the mobile phase and mixed on a magnetic stirrer for half an hour. The full volume of the flask was filled with the mobile phase and mixed. The solution was filtered through Buchner’s funnel with 0.45 mm filters. 60 mL of the filtrate was placed into a 100 mL volumetric flask and the full volume was filled with the mobile phase to obtain 0.15 mg/mL solution of Bromazepam.
2.4.5.4. Ampoules. Midazolam ampoule samples were prepared
from (50 mg/10 mL) ampoule solution. The ampoule solution was mixed for 5 min and 3 mL of the solution was placed into a 100 mL volumetric flask. The full volume was filled with the mobile phase and mixed well to obtain 0.15 mg/mL
solution of Midazolam.
2.4.6. Preparation of a series of standard solutions to determine the recovery from the serum
A series of standard solutions were prepared in the following concentrations (12–15–20–25–30 mg/mL) of Bromazepam, Medazepam and Midazolam by diluting their standard solutions (0.15 mg/mL for both Bromazepam and Midazolam and
0.10 mg/mL for Medazepam).
2.4.7. Preparation of a series of serum standard solutions
The above-mentioned series of standard solutions were prepared with doubled concentrations. Each 1 mL of the solutions was added to 1 mL drug-free serum to obtain a new series of serum standard solutions with the same concentrations of the said series. The serum standard solutions were centrifuged for half an hour.
2.4.8. Extraction
The serum solution was extracted by the liquid/solid extraction method using C18 cartridge in the following way:
– Precondition cartridge with 3 mL of methanol, withdraw. Then with 3 mL of water, withdraw.
– Apply the serum solution.
– Benzodiazepines were eluted with 10 mL of a mixture of methanol and acetonitrile (1:1). The eluates were left to dry for 15 min. Dry residues were reconstituted with mobile phase. The solutions were filtered through 0.45 mm HPLC filters before injected directly to HPLC.
2.4.9. Preparation of mobile phase
- 2.4.9.1. Preparation of 0.05 M ammonium acetate solution.
3.854 g of anhydrous ammonium acetate (molecular weight¼77.08 g) was weighed and placed into a 1 L volumetric flask. Distilled water was added and the mixture was stirred until complete dissolution. The full volume of the flask
was filled with distilled water and the resulting solution was filtered through 0.45 mm filters.
2.4.9.2. Preparation of one liter of mobile phase. In 1 L volumetric flask was added 250 mL acetonitrile, 400 mL
methanol and 300 mL of a fresh solution of 0.05 M ammonium acetate. The flask was filled with methanol to 1 L and
mixed well. Several drops of ammonia solution (35%, w/w) was added to adjust pH to 9 under stirring. The resulting
solution was filtered through 0.45 mm filters.
การแปล กรุณารอสักครู่..
ทดลอง
2.1 . วัสดุและวิธีการ
โบรมาซีแพมและเมดาซีแพม , มิดาโซแลมเป็นวัสดุมาตรฐานทุติยภูมิ ได้จากซีเรียกระทรวง F สุขภาพ ตัวอย่างของวัตถุดิบที่ถูกซื้อจากหลายท้องถิ่น เอกชน โรงงานยา . รูปตัวอย่างยา ( เม็ด , หลอด ,แคปซูล ) ที่ได้รับจากร้านขายยา และจากหลายประเทศและต่างประเทศโรงงานเภสัชกรรม ได้แก่ บริษัท แบรนด์ ตัวอย่างซีรัมของมนุษย์ได้จากโรงพยาบาลห้องปฏิบัติการ ตัวทำละลายโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ HPLC ( ไนไตรล์ , เมทานอล , น้ำ ) ซื้อจากเมอร์ค panreac scharlau , , และ บริษัท แล็บ ชาม แอมโมเนียมอะซิเตท ( พิเศษ ซื้อจาก scharlau บริสุทธิ์ ) ,สารละลายแอมโมเนีย ( 35 % w / w ) ซื้อมาจากแน่นอน . excipient Microcrystalline cellulose ( เซล , ph102 ) ซื้อมาจาก gujarart ไมโครแว็กซ์ แลคโตส stearate แมกนีเซียมและผลึกแป้ง ซื้อมาจาก borculo
2.2 . เครื่องมือและอุปกรณ์ระบบ HPLC โครม
เซซิลให้กับเซซิล สีสรรสดใส UV / VIS ตรวจจับ ( ce4200 ) คือใช้ 2 ปั๊ม
( ce4100 )ปั๊มแบบลูกสูบ เซซิล สีสรรสดใส พร้อมคู่มือหัวฉีด ( Loop 20 ml ) ใช้ส่ง
เฟสเคลื่อนที่คอลัมน์วิเคราะห์ในคอลัมน์เตาอบพิเศษ ( ce4600 ) ; ce11601 คอลัมน์เตาอบ คอลัมน์ C18 3 มม. ) ( 250 มม. 4.6 มม. ) teknokroma คอลัมน์คอลัมน์ที่ติดตาม extrasil tr-013204 มากใช้ อุปกรณ์ ultrasonic cole-parmer-8892 , สมดุลที่ละเอียดอ่อนการวิเคราะห์ดุล Sartorius ( cpa225d ) ( ความไวของ 105 กรัม ) และ
เครื่องวัด , โอไรออนรุ่น 320 กับขั้วไฟฟ้าแก้ว ยังใช้ เครื่องหมุน เฮอร์เมิล Z 230A และตลับ 18 rpadsorbex เมอร์ค , โดย , ดาร์มชตัท FR ถูกใช้สำหรับตัวอย่างซีรั่ม .
2.3 เงื่อนไขและ
เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยไน เมทานอล และ 0.05 M แอมโมเนียมอะซิเตท ( 25:45:30 , V / V / V ) พีเอช ( pH ¼
9 )จะปรับเพิ่มสารละลายแอมโมเนีย ( 35 % w / w ) เครื่องตรวจจับความยาวคลื่นคือ 240 nm . อัตราการไหลไว้ที่ 1.3 มล. / นาที คอลัมน์ อุณหภูมิตั้งไว้ที่ 50 ใน ปริมาณการฉีด 20 มล.
2.4 . การเตรียมการของโซลูชั่น
- เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . การเตรียมการของหุ้นหุ้นโซลูชั่น โซลูชั่น 0.75 มก. / มล. โบรมาซีแพม 0.50 mg / ml เมดาซีแพมและ 0.75 มก. / มล. และมิดาโซแลมเตรียมไว้แล้ว375 มิลลิกรัม โบรมาซีแพมก็หนักและวางไว้ในปริมาตร 500 มล. ขวด มันละลายได้ในปริมาณที่เหมาะสมของโซลูชั่นการใช้เฟสเคลื่อนที่ และกวน stirrer แม่เหล็กในช่วงระหว่าง 15 – 30 นาที จนมันละลายอย่างสมบูรณ์ . 500 มล. ปริมาตรของสารละลายที่ประกอบด้วยเฟสเคลื่อนที่เพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่ต้องการ . ทำตามขั้นตอนเดียวกัน250 มก. เมดาซีแพมและ 375 มิลลิกรัม คือบนหนักเตรียมที่ต้องการ stocksolutions .
-- 2.4.2 . การเตรียมมาตรฐาน
โซลูชั่นมาตรฐาน 0.15 mg / ml โบรมาซีแพม , 0.10 mg / ml เมดาซีแพมและ 0.15 มก. / มล. และมิดาโซแลม เตรียมนำ 5 ml โซลูชั่นหุ้น 0.75 มก. / มล. โบรมาซีแพม 0.50 mg / ml เมดาซีแพมและ 0.75 มก. / มล. กับ
มิดาโซแลมมีการสอบเทียบปิเปตและวางไว้ในขวดปริมาตร 25 ml . ปริมาณเต็มขวดเต็มไปด้วยขั้นตอนเพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่ต้องการโทรศัพท์มือถือ
.
- 2.4.3 . การเตรียมการของมาตรฐานผสมสารละลายโบรมาซีแพมเมดาซีแพม , และ 5 มิลลิลิตรบนของแต่ละหุ้นโซลูชั่นของโบรมาซีแพมมีดาซิแปมบน , และถูกส่งไป 25 มล. ปริมาตรขวดปริมาณเต็ม เปี่ยม ด้วย เฟสเคลื่อนที่ที่ถูกกวนบนอุปกรณ์ ultrasonic 15 นาทีเพื่อให้ได้
ผสมสารละลาย 0.15 mg / ml โบรมาซีแพม , 0.10 mg / ml เมดาซีแพมและ 0.15 มก. / มล. และมิดาโซแลม
- 2.4.4 . การเตรียมการของโซลูชั่นสำหรับการตรวจสอบการศึกษา
2.4.4.1 . โซลูชั่นมาตรฐานสำหรับการตรวจวัดและการศึกษาห้าลำดับความเข้มข้นที่เตรียมจากสารละลายที่มีหุ้นตามลำดับ 80% , 90% , 100% , 110 และ 120 % ของปริมาณโซลูชั่นมาตรฐาน พวกเขาได้ถูกเตรียมโดยการโอน 8 , 9 , 10 , 11 , 12 ml ของโซลูชั่นหุ้นตามลำดับ ในขวด 50 ml บรรจุปริมาณเต็ม
ขวดกับเฟสเคลื่อนที่ และผสม
2.4.4.2 . โซลูชั่นเพื่อความถูกต้องแท็บเล็ตช่วย [ 24 ] ( เช่น avesel แลคโตส , แป้งโรยตัว , แมกนีเซียม stearate ) จากโซลูชั่นมาตรฐานเพื่อให้ได้วิเคราะห์ตัวอย่าง 9 ตัวอย่าง แบ่งเป็น 3 กลุ่ม ประกอบด้วย ตามลำดับ 80% , 100% และ 120 % ความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน .
2.4.4.3 . โซลูชั่นสำหรับที่ต้องการศึกษา ตัวอย่างแท็บเล็ตข้อมูล เก้าคนถูกเตรียมและแบ่งออกเป็นสาม
กลุ่มที่มีตามลำดับ 80% , 100% และ 120 % ความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน .
2.4.4.4 . โซลูชั่นสำหรับการศึกษา ฟรีตัวอย่างยาเตรียมจากสาร ( avesel แลคโตส , แป้งโรยตัว ,
แมกนีเซียมสเตียเรท ) สามเม็ดตัวอย่างที่มี 100% ของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐานยังวิเคราะห์
2.4.4.5 . โซลูชั่นสำหรับความทนทานของการศึกษาสามเม็ดตัวอย่างที่มี 100% ของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐานคือ
วิเคราะห์ ตัวอย่างแรก คือ ฉีดหลังจากปรับอุณหภูมิในตู้อบคอลัมน์ที่สองใน 48 , 50 และ 52
3 c .
2.4.5 . การเตรียมตัวอย่าง
- 2.4.5.1 . วัตถุดิบ ตัวอย่างที่เตรียมไว้ในลักษณะเดียวกัน สำหรับเตรียมโซลูชั่นมาตรฐานของโบรมาซีแพมและเมดาซีแพม , มิดาโซแลม .
- 2.4.5 .2 . เม็ด โบรมาซีแพมอย่างแท็บเล็ต เตรียมเครื่องชั่ง 20 เม็ดเฉพาะตัวและน้ำหนักเฉลี่ยต่อเม็ดเป็นคํานวณ เม็ดดินเพื่อให้ได้ผงละเอียด ผงเท่ากับ 30 mg ของโบรมาซีแพมก็หนักและวางไว้ในปริมาตร 100 มิลลิลิตร ขวดเหล้า ผงละลายกับเฟสเคลื่อนที่ และผสมกับ stirrer แม่เหล็กสำหรับครึ่งชั่วโมงปริมาณเต็มขวดเต็มไปด้วยเฟสเคลื่อนที่และผสม โซลูชั่นที่ถูกกรองผ่านตัวกรองของกรวยบุชเนอร์ 0.45 มม. 50 ml ของกรองอยู่ใน 100 ml ขวดปริมาตรและปริมาณเต็ม เต็ม ไป ด้วยระยะที่เคลื่อนที่ได้ 0.15 mg / ml สารละลายโบรมาซีแพม . โซลูชั่นบนตัวอย่างเตรียมในลักษณะเดียวกันเพื่อให้ได้ความเข้มข้น 015 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรสำหรับเมดาซีแพม , ผงเท่ากับ 25 มก. ของเมดาซีแพมก็หนักและรับการรักษาแบบเดียวกัน 50 ml ของกรองอยู่ใน 100 ml ขวดปริมาตรและปริมาณเต็ม เต็ม ไป ด้วยระยะเคลื่อนที่ในที่สุดได้รับ 0.10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร สารละลายของเมดาซีแพม .
- 2.4.5.3 . แคปซูลโบรมาซิแปมตัวอย่างแคปซูลเตรียมชั่ง 20 แคปซูล แบบและคำนวณน้ำหนักเฉลี่ยต่อแคปซูล เท่ากับ 25 มก. ของโบรมาซีแพมก็หนักจากผงเนื้อหาของแคปซูล ซึ่งอยู่ในอัตรา 100 มล. ขวด ผงละลายกับเฟสเคลื่อนที่ และผสมใน stirrer แม่เหล็กสำหรับครึ่งชั่วโมงปริมาณเต็มขวดเต็มไปด้วยเฟสเคลื่อนที่และผสม โซลูชั่นที่ถูกกรองผ่านตัวกรองของกรวยบุชเนอร์ 0.45 มม. 60 ml ของกรองอยู่ใน 100 ml ขวดปริมาตรและปริมาณเต็ม เต็ม ไป ด้วยระยะที่เคลื่อนที่ได้ 0.15 mg / ml สารละลายโบรมาซีแพม .
2.4.5.4 . หลอด . ตัวอย่างหลอดเข็มฉีดยาเตรียม
มิดาโซแลมจาก ( 50 mg / 10 มล. ) แอมเพิลโซลูชั่น ส่วนแอมเพิลโซลูชั่นผสมเป็นเวลา 5 นาทีและ 3 มิลลิลิตรของสารละลายให้อยู่ในปริมาตร 100 มล. ขวด ปริมาณเต็ม เต็ม ไป ด้วยระยะที่เคลื่อนที่และผสมเพื่อให้ได้ 0.15 mg / ml สารละลายบน
2.4.6 . การเตรียมชุดโซลูชั่นมาตรฐานการตรวจสอบการกู้คืนจากเซรั่ม
ชุดโซลูชั่นมาตรฐานที่ถูกเตรียมไว้ในส่วนต่อไปนี้ ( 12 – 15 – 20 – 25 – 30 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และโดย diluting มิดาโซแลมโบรมาซีแพมเมดาซีแพม , โซลูชั่นมาตรฐานของพวกเขา ( 0.15 mg / ml และทั้งบนโบรมาซีแพม
0.10 มก. / มล. และสำหรับเมดาซีแพม )
2.4.7 . การเตรียมชุดของมาตรฐานโซลูชั่น
เซรั่มชุดโซลูชั่นมาตรฐานดังกล่าวข้างต้นถูกเตรียมเพิ่มความเข้มข้น แต่ละ 1 มิลลิลิตรของโซลูชั่นเพิ่ม 1 ml เซรั่มยาฟรีที่จะได้รับชุดใหม่ของเซรั่มโซลูชั่นมาตรฐานที่มีความเข้มข้นเดียวกันของชุดดังกล่าว เซรั่มระดับมาตรฐานโซลูชั่นสำหรับครึ่งชั่วโมง
2.4.8 . การสกัด
เซรั่มสกัดด้วยสารละลายเหลว / แข็ง วิธีสกัดใช้ตลับ c18 ในวิธีต่อไปนี้ :
–เงื่อนไข 3 มิลลิลิตรตลับเมทานอล , ถอนตัว แล้วกับ 3 มล. ของน้ำ และใช้เซรั่ม . . .
( benzodiazepines ) โซลูชั่น ตัวอย่าง 10 มิลลิลิตร ผสมเมทานอลและไน ( 1 : 1 ) การ eluates ถูกทิ้งให้แห้งเป็นเวลา 15 นาทีกากแห้งถูกสร้างด้วยเฟสเคลื่อนที่ . โซลูชั่นถูกกรองผ่านตัวกรองสูง 0.45 มม. ก่อนฉีดโดยตรง 2 .
2.4.9 . การเตรียมการของเฟสเคลื่อนที่
- 2.4.9.1 . การเตรียม 0.05 M แอมโมเนียมอะซิเตท โซลูชั่น
3.854 กรัมรัสแอมโมเนียอะซิเตท ( น้ำหนักโมเลกุล¼ 77.08 g ) หนักและวางไว้ในปริมาตร 1 ลิตร ขวดเหล้าน้ำกลั่นเติมและส่วนผสมถูกกวนจนสลายตัวสมบูรณ์ ปริมาณเต็มขวด
เต็มไปด้วยน้ำกลั่นและสารละลายกรองผ่านตัวกรอง ( 0.45 mm .
2.4.9.2 . การเตรียมการของหนึ่งลิตรของเฟสเคลื่อนที่ . ขวด 1 ลิตร ปริมาตร 250 มิลลิลิตร เติมไน 400 ml
เมทานอลและ 300 มิลลิลิตรของสารละลาย 0.05 M สดแอมโมเนียมอะซิเทตขวดเหล้าเต็มไปด้วยเมทานอลต่อ 1 ลิตร และผสมดี
. หลายหยดสารละลายแอมโมเนีย ( 35 % w / w ) คือเพิ่มการปรับ pH 9 ภายใต้กวน . เป็นผลกรองผ่านตัวกรองสารละลาย
0.45 mm
2.1 . วัสดุและวิธีการ
โบรมาซีแพมและเมดาซีแพม , มิดาโซแลมเป็นวัสดุมาตรฐานทุติยภูมิ ได้จากซีเรียกระทรวง F สุขภาพ ตัวอย่างของวัตถุดิบที่ถูกซื้อจากหลายท้องถิ่น เอกชน โรงงานยา . รูปตัวอย่างยา ( เม็ด , หลอด ,แคปซูล ) ที่ได้รับจากร้านขายยา และจากหลายประเทศและต่างประเทศโรงงานเภสัชกรรม ได้แก่ บริษัท แบรนด์ ตัวอย่างซีรัมของมนุษย์ได้จากโรงพยาบาลห้องปฏิบัติการ ตัวทำละลายโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ HPLC ( ไนไตรล์ , เมทานอล , น้ำ ) ซื้อจากเมอร์ค panreac scharlau , , และ บริษัท แล็บ ชาม แอมโมเนียมอะซิเตท ( พิเศษ ซื้อจาก scharlau บริสุทธิ์ ) ,สารละลายแอมโมเนีย ( 35 % w / w ) ซื้อมาจากแน่นอน . excipient Microcrystalline cellulose ( เซล , ph102 ) ซื้อมาจาก gujarart ไมโครแว็กซ์ แลคโตส stearate แมกนีเซียมและผลึกแป้ง ซื้อมาจาก borculo
2.2 . เครื่องมือและอุปกรณ์ระบบ HPLC โครม
เซซิลให้กับเซซิล สีสรรสดใส UV / VIS ตรวจจับ ( ce4200 ) คือใช้ 2 ปั๊ม
( ce4100 )ปั๊มแบบลูกสูบ เซซิล สีสรรสดใส พร้อมคู่มือหัวฉีด ( Loop 20 ml ) ใช้ส่ง
เฟสเคลื่อนที่คอลัมน์วิเคราะห์ในคอลัมน์เตาอบพิเศษ ( ce4600 ) ; ce11601 คอลัมน์เตาอบ คอลัมน์ C18 3 มม. ) ( 250 มม. 4.6 มม. ) teknokroma คอลัมน์คอลัมน์ที่ติดตาม extrasil tr-013204 มากใช้ อุปกรณ์ ultrasonic cole-parmer-8892 , สมดุลที่ละเอียดอ่อนการวิเคราะห์ดุล Sartorius ( cpa225d ) ( ความไวของ 105 กรัม ) และ
เครื่องวัด , โอไรออนรุ่น 320 กับขั้วไฟฟ้าแก้ว ยังใช้ เครื่องหมุน เฮอร์เมิล Z 230A และตลับ 18 rpadsorbex เมอร์ค , โดย , ดาร์มชตัท FR ถูกใช้สำหรับตัวอย่างซีรั่ม .
2.3 เงื่อนไขและ
เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยไน เมทานอล และ 0.05 M แอมโมเนียมอะซิเตท ( 25:45:30 , V / V / V ) พีเอช ( pH ¼
9 )จะปรับเพิ่มสารละลายแอมโมเนีย ( 35 % w / w ) เครื่องตรวจจับความยาวคลื่นคือ 240 nm . อัตราการไหลไว้ที่ 1.3 มล. / นาที คอลัมน์ อุณหภูมิตั้งไว้ที่ 50 ใน ปริมาณการฉีด 20 มล.
2.4 . การเตรียมการของโซลูชั่น
- เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . การเตรียมการของหุ้นหุ้นโซลูชั่น โซลูชั่น 0.75 มก. / มล. โบรมาซีแพม 0.50 mg / ml เมดาซีแพมและ 0.75 มก. / มล. และมิดาโซแลมเตรียมไว้แล้ว375 มิลลิกรัม โบรมาซีแพมก็หนักและวางไว้ในปริมาตร 500 มล. ขวด มันละลายได้ในปริมาณที่เหมาะสมของโซลูชั่นการใช้เฟสเคลื่อนที่ และกวน stirrer แม่เหล็กในช่วงระหว่าง 15 – 30 นาที จนมันละลายอย่างสมบูรณ์ . 500 มล. ปริมาตรของสารละลายที่ประกอบด้วยเฟสเคลื่อนที่เพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่ต้องการ . ทำตามขั้นตอนเดียวกัน250 มก. เมดาซีแพมและ 375 มิลลิกรัม คือบนหนักเตรียมที่ต้องการ stocksolutions .
-- 2.4.2 . การเตรียมมาตรฐาน
โซลูชั่นมาตรฐาน 0.15 mg / ml โบรมาซีแพม , 0.10 mg / ml เมดาซีแพมและ 0.15 มก. / มล. และมิดาโซแลม เตรียมนำ 5 ml โซลูชั่นหุ้น 0.75 มก. / มล. โบรมาซีแพม 0.50 mg / ml เมดาซีแพมและ 0.75 มก. / มล. กับ
มิดาโซแลมมีการสอบเทียบปิเปตและวางไว้ในขวดปริมาตร 25 ml . ปริมาณเต็มขวดเต็มไปด้วยขั้นตอนเพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่ต้องการโทรศัพท์มือถือ
.
- 2.4.3 . การเตรียมการของมาตรฐานผสมสารละลายโบรมาซีแพมเมดาซีแพม , และ 5 มิลลิลิตรบนของแต่ละหุ้นโซลูชั่นของโบรมาซีแพมมีดาซิแปมบน , และถูกส่งไป 25 มล. ปริมาตรขวดปริมาณเต็ม เปี่ยม ด้วย เฟสเคลื่อนที่ที่ถูกกวนบนอุปกรณ์ ultrasonic 15 นาทีเพื่อให้ได้
ผสมสารละลาย 0.15 mg / ml โบรมาซีแพม , 0.10 mg / ml เมดาซีแพมและ 0.15 มก. / มล. และมิดาโซแลม
- 2.4.4 . การเตรียมการของโซลูชั่นสำหรับการตรวจสอบการศึกษา
2.4.4.1 . โซลูชั่นมาตรฐานสำหรับการตรวจวัดและการศึกษาห้าลำดับความเข้มข้นที่เตรียมจากสารละลายที่มีหุ้นตามลำดับ 80% , 90% , 100% , 110 และ 120 % ของปริมาณโซลูชั่นมาตรฐาน พวกเขาได้ถูกเตรียมโดยการโอน 8 , 9 , 10 , 11 , 12 ml ของโซลูชั่นหุ้นตามลำดับ ในขวด 50 ml บรรจุปริมาณเต็ม
ขวดกับเฟสเคลื่อนที่ และผสม
2.4.4.2 . โซลูชั่นเพื่อความถูกต้องแท็บเล็ตช่วย [ 24 ] ( เช่น avesel แลคโตส , แป้งโรยตัว , แมกนีเซียม stearate ) จากโซลูชั่นมาตรฐานเพื่อให้ได้วิเคราะห์ตัวอย่าง 9 ตัวอย่าง แบ่งเป็น 3 กลุ่ม ประกอบด้วย ตามลำดับ 80% , 100% และ 120 % ความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน .
2.4.4.3 . โซลูชั่นสำหรับที่ต้องการศึกษา ตัวอย่างแท็บเล็ตข้อมูล เก้าคนถูกเตรียมและแบ่งออกเป็นสาม
กลุ่มที่มีตามลำดับ 80% , 100% และ 120 % ความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน .
2.4.4.4 . โซลูชั่นสำหรับการศึกษา ฟรีตัวอย่างยาเตรียมจากสาร ( avesel แลคโตส , แป้งโรยตัว ,
แมกนีเซียมสเตียเรท ) สามเม็ดตัวอย่างที่มี 100% ของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐานยังวิเคราะห์
2.4.4.5 . โซลูชั่นสำหรับความทนทานของการศึกษาสามเม็ดตัวอย่างที่มี 100% ของความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐานคือ
วิเคราะห์ ตัวอย่างแรก คือ ฉีดหลังจากปรับอุณหภูมิในตู้อบคอลัมน์ที่สองใน 48 , 50 และ 52
3 c .
2.4.5 . การเตรียมตัวอย่าง
- 2.4.5.1 . วัตถุดิบ ตัวอย่างที่เตรียมไว้ในลักษณะเดียวกัน สำหรับเตรียมโซลูชั่นมาตรฐานของโบรมาซีแพมและเมดาซีแพม , มิดาโซแลม .
- 2.4.5 .2 . เม็ด โบรมาซีแพมอย่างแท็บเล็ต เตรียมเครื่องชั่ง 20 เม็ดเฉพาะตัวและน้ำหนักเฉลี่ยต่อเม็ดเป็นคํานวณ เม็ดดินเพื่อให้ได้ผงละเอียด ผงเท่ากับ 30 mg ของโบรมาซีแพมก็หนักและวางไว้ในปริมาตร 100 มิลลิลิตร ขวดเหล้า ผงละลายกับเฟสเคลื่อนที่ และผสมกับ stirrer แม่เหล็กสำหรับครึ่งชั่วโมงปริมาณเต็มขวดเต็มไปด้วยเฟสเคลื่อนที่และผสม โซลูชั่นที่ถูกกรองผ่านตัวกรองของกรวยบุชเนอร์ 0.45 มม. 50 ml ของกรองอยู่ใน 100 ml ขวดปริมาตรและปริมาณเต็ม เต็ม ไป ด้วยระยะที่เคลื่อนที่ได้ 0.15 mg / ml สารละลายโบรมาซีแพม . โซลูชั่นบนตัวอย่างเตรียมในลักษณะเดียวกันเพื่อให้ได้ความเข้มข้น 015 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรสำหรับเมดาซีแพม , ผงเท่ากับ 25 มก. ของเมดาซีแพมก็หนักและรับการรักษาแบบเดียวกัน 50 ml ของกรองอยู่ใน 100 ml ขวดปริมาตรและปริมาณเต็ม เต็ม ไป ด้วยระยะเคลื่อนที่ในที่สุดได้รับ 0.10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร สารละลายของเมดาซีแพม .
- 2.4.5.3 . แคปซูลโบรมาซิแปมตัวอย่างแคปซูลเตรียมชั่ง 20 แคปซูล แบบและคำนวณน้ำหนักเฉลี่ยต่อแคปซูล เท่ากับ 25 มก. ของโบรมาซีแพมก็หนักจากผงเนื้อหาของแคปซูล ซึ่งอยู่ในอัตรา 100 มล. ขวด ผงละลายกับเฟสเคลื่อนที่ และผสมใน stirrer แม่เหล็กสำหรับครึ่งชั่วโมงปริมาณเต็มขวดเต็มไปด้วยเฟสเคลื่อนที่และผสม โซลูชั่นที่ถูกกรองผ่านตัวกรองของกรวยบุชเนอร์ 0.45 มม. 60 ml ของกรองอยู่ใน 100 ml ขวดปริมาตรและปริมาณเต็ม เต็ม ไป ด้วยระยะที่เคลื่อนที่ได้ 0.15 mg / ml สารละลายโบรมาซีแพม .
2.4.5.4 . หลอด . ตัวอย่างหลอดเข็มฉีดยาเตรียม
มิดาโซแลมจาก ( 50 mg / 10 มล. ) แอมเพิลโซลูชั่น ส่วนแอมเพิลโซลูชั่นผสมเป็นเวลา 5 นาทีและ 3 มิลลิลิตรของสารละลายให้อยู่ในปริมาตร 100 มล. ขวด ปริมาณเต็ม เต็ม ไป ด้วยระยะที่เคลื่อนที่และผสมเพื่อให้ได้ 0.15 mg / ml สารละลายบน
2.4.6 . การเตรียมชุดโซลูชั่นมาตรฐานการตรวจสอบการกู้คืนจากเซรั่ม
ชุดโซลูชั่นมาตรฐานที่ถูกเตรียมไว้ในส่วนต่อไปนี้ ( 12 – 15 – 20 – 25 – 30 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และโดย diluting มิดาโซแลมโบรมาซีแพมเมดาซีแพม , โซลูชั่นมาตรฐานของพวกเขา ( 0.15 mg / ml และทั้งบนโบรมาซีแพม
0.10 มก. / มล. และสำหรับเมดาซีแพม )
2.4.7 . การเตรียมชุดของมาตรฐานโซลูชั่น
เซรั่มชุดโซลูชั่นมาตรฐานดังกล่าวข้างต้นถูกเตรียมเพิ่มความเข้มข้น แต่ละ 1 มิลลิลิตรของโซลูชั่นเพิ่ม 1 ml เซรั่มยาฟรีที่จะได้รับชุดใหม่ของเซรั่มโซลูชั่นมาตรฐานที่มีความเข้มข้นเดียวกันของชุดดังกล่าว เซรั่มระดับมาตรฐานโซลูชั่นสำหรับครึ่งชั่วโมง
2.4.8 . การสกัด
เซรั่มสกัดด้วยสารละลายเหลว / แข็ง วิธีสกัดใช้ตลับ c18 ในวิธีต่อไปนี้ :
–เงื่อนไข 3 มิลลิลิตรตลับเมทานอล , ถอนตัว แล้วกับ 3 มล. ของน้ำ และใช้เซรั่ม . . .
( benzodiazepines ) โซลูชั่น ตัวอย่าง 10 มิลลิลิตร ผสมเมทานอลและไน ( 1 : 1 ) การ eluates ถูกทิ้งให้แห้งเป็นเวลา 15 นาทีกากแห้งถูกสร้างด้วยเฟสเคลื่อนที่ . โซลูชั่นถูกกรองผ่านตัวกรองสูง 0.45 มม. ก่อนฉีดโดยตรง 2 .
2.4.9 . การเตรียมการของเฟสเคลื่อนที่
- 2.4.9.1 . การเตรียม 0.05 M แอมโมเนียมอะซิเตท โซลูชั่น
3.854 กรัมรัสแอมโมเนียอะซิเตท ( น้ำหนักโมเลกุล¼ 77.08 g ) หนักและวางไว้ในปริมาตร 1 ลิตร ขวดเหล้าน้ำกลั่นเติมและส่วนผสมถูกกวนจนสลายตัวสมบูรณ์ ปริมาณเต็มขวด
เต็มไปด้วยน้ำกลั่นและสารละลายกรองผ่านตัวกรอง ( 0.45 mm .
2.4.9.2 . การเตรียมการของหนึ่งลิตรของเฟสเคลื่อนที่ . ขวด 1 ลิตร ปริมาตร 250 มิลลิลิตร เติมไน 400 ml
เมทานอลและ 300 มิลลิลิตรของสารละลาย 0.05 M สดแอมโมเนียมอะซิเทตขวดเหล้าเต็มไปด้วยเมทานอลต่อ 1 ลิตร และผสมดี
. หลายหยดสารละลายแอมโมเนีย ( 35 % w / w ) คือเพิ่มการปรับ pH 9 ภายใต้กวน . เป็นผลกรองผ่านตัวกรองสารละลาย
0.45 mm
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Interviewer: You don’t have an problem e
- really
- lying
- สำหรับฉันชอบชีวิตชนบทมากกว่า
- fchalermratchakumaree libraries
- Hiw are you
- chalermratchakumaree libraries
- โปรโมชั่น
- เชียงใหม่อยู่ทางตอนเหนือของประเทศ และเป็
- งานที่แผนกผ่าพิมพ์ยางทำการผ่าใส่วนของงาน
- We are a fan when.
- งานที่แผนกผ่าพิมพ์ยางทำการผ่าในส่วนของงา
- ฉันรู้ว่าเรื่องระหว่างฉันกับเธอ มีความแต
- What do you mean by that I know?
- he told me you should go to sleep
- reflecting the fact that, teenagers in t
- หลังจากที่จากที่เธอเก็บงำความรู้สึกนี้มา
- College and high school are different in
- a spectacular mist.
- geometry resulting
- สีหน้า
- application
- application of secondary pumping contain
- อบรม
