We obtained the sequence for an imm

We obtained the sequence for an immunogenic Salmonella Typhimurium antigen and a corresponding anti-S. Typhimurium antibody from Prof. Dr. Hust's laboratory. Both His-tagged proteins were successfully expressed in E. coli and spotted on a PDITC surface. In an iRIf measurement we analyzed the binding between S. Typhimurium antigen and antibody (figure 5). The measurement was a success. When the S. Typhimurium antibody was flushed over the chip a distinct shift in the binding curve for the S. Typhimurium antigen spot was detectable, whereas the negative control showed no binding event (figure 6). Moreover, the obtained iRIf result was validated with a standardized method. The purified antigen was analyzed by a 12.5% SDS-PAGE. Afterwards a Western Blot was performed using the self-purified antibody. This antibody is genetically fused to a c-Myc tag that is not present in the antigen. Therefore, we used an anti-c-Myc antibody derived from goat as secondary antibody. For detection via chemiluminescence an anti-goat HRP was used. The conventional method confirmed the binding of the anti-S. Typhimurium antibody to the corresponding antigen (figure 7B). The presence of both proteins was additionally validated by Western Blot with an anti-His conjugated antibody (figure 7A). With this measurement we demonstrated that our system is able to detect a specific antigen-antibody binding.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เราได้ลำดับสำหรับ antigen เป็น Salmonella Typhimurium immunogenic และ S. ป้องกันสอดคล้องกัน แอนติบอดี Typhimurium จากดร. Hust ห้องปฏิบัติการ โปรตีนทั้งสองพระองค์แท็กเรียบร้อยแสดงออกใน E. coli และด่างบนพื้น PDITC ในการวัด iRIf เราวิเคราะห์รวมระหว่าง S. Typhimurium antigen และแอนติบอดี (5 รูป) การวัดความสำเร็จได้ เมื่อแอนติบอดี S. Typhimurium ถูก flushed ผ่านชิ กะแตกในโค้งผูกสำหรับ antigen S. Typhimurium จุดถูกตรวจจับได้ ในขณะที่การควบคุมค่าลบแสดงให้เห็นว่าเหตุการณ์ไม่ผูก (รูป 6) นอกจากนี้ ผล iRIf ที่ได้รับการถูกตรวจสอบ ด้วยวิธีมาตรฐาน Antigen บริสุทธิ์ถูกวิเคราะห์ โดย 12.5% SDS-หน้า หลังจากนั้น ซับตะวันตกดำเนินการโดยใช้แอนติบอดีบริสุทธิ์ด้วยตนเอง พันธุกรรมมีการหลอมรวมแอนติบอดีนี้แท็ก c Myc ที่ไม่อยู่ใน antigen ดังนั้น เราใช้ได้มาจากแพะเป็นรองแอนติบอดีแอนติบอดี anti-c-Myc สำหรับการตรวจสอบผ่าน chemiluminescence HRP แพะต่อต้านการใช้ ผูกพันของ anti-S. ยืนยันวิธีการทั่วไป แอนติบอดี Typhimurium การ antigen ที่สอดคล้องกัน (รูปที่ 7B) การปรากฏตัวของโปรตีนทั้งสองได้นอกจากนี้ตรวจสอบ โดยตะวันตกซับด้วยมีแอนติบอดีรวมต่อต้านพระองค์ (รูปที่ 7A) ด้วยวัดนี้ เราแสดงให้เห็นว่า ระบบของเราจะตรวจพบเฉพาะ antigen-แอนติบอดีรวม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เราได้รับลำดับสำหรับภูมิคุ้มกันเชื้อ Salmonella Typhimurium แอนติเจนและสอดคล้องกันต่อต้าน-S Typhimurium แอนติบอดีจากห้องปฏิบัติการศ. ดร. Hust ของ เขาทั้งสองติดแท็กโปรตีนถูกแสดงที่ประสบความสำเร็จใน E. coli และด่างบนพื้นผิว PDITC ในการวัด iRIf เราวิเคราะห์ผูกพันระหว่าง S. Typhimurium แอนติเจนและแอนติบอดี (รูปที่ 5) การวัดที่ประสบความสำเร็จ เมื่อแอนติบอดี S. Typhimurium ถูกล้างมากกว่าชิปการเปลี่ยนแปลงที่แตกต่างกันในโค้งที่มีผลผูกพันสำหรับจุดแอนติเจนเอส Typhimurium เป็นที่ตรวจพบในขณะที่การควบคุมเชิงลบพบว่าไม่มีเหตุการณ์ที่มีผลผูกพัน (รูปที่ 6) นอกจากนี้ยังมีผล iRIf ได้ถูกตรวจสอบด้วยวิธีการที่เป็นมาตรฐาน แอนติเจนบริสุทธิ์ได้รับการวิเคราะห์โดย 12.5% ​​SDS-PAGE หลังจากนั้นดวงตะวันถูกดำเนินการโดยใช้แอนติบอดีตัวเองบริสุทธิ์ แอนติบอดีนี้จะหลอมรวมทางพันธุกรรมกับแท็ก C-Myc ที่ไม่ได้อยู่ในแอนติเจน ดังนั้นเราจึงใช้แอนติบอดีต่อต้าน-C-Myc มาจากแพะเป็นรองแอนติบอดี สำหรับการตรวจสอบผ่านทาง chemiluminescence HRP ป้องกันแพะถูกนำมาใช้ วิธีการทั่วไปได้รับการยืนยันผลผูกพันของการต่อต้าน-S Typhimurium แอนติบอดีต่อแอนติเจนที่สอดคล้องกัน (รูปที่ 7B) การปรากฏตัวของโปรตีนทั้งสองได้รับการตรวจสอบเพิ่มเติมโดยดวงตะวันกับการต่อต้านของเขาแอนติบอดี้คอนจูเกต (รูป 7A) วัดนี้เราแสดงให้เห็นว่าระบบของเราสามารถที่จะตรวจสอบเฉพาะแอนติเจนและแอนติบอดีที่มีผลผูกพัน