Three phages (VP-1, VP-2 and VP-3)

Three phages (VP-1, VP-2 and VP-3) were isolated from marine
water samples (salinity 18–21; pH 7.6–7.7) of a semi-intensive aquaculture
(earthen pond aquaculture system Corte das Freiras located in
the estuarine system Ria de Aveiro, latitude: 40°37′51.44″N, longitude
8°40′31.75″W, on the north-western coast of Portugal) using
V. parahaemolyticus as host. Five hundred milliliters of water were filtered
sequentially by 3 μm and then by 0.45 μm pore-size polycarbonate
membranes (Millipore, Billerica, USA). Filtered water was added to
500 mL of TSB with double concentration and to 1 mL of bacterial culture.
The mixture was incubated at 25 °C for 18 h at 80 rpm, and thenfiltered through a 0.45 μm membrane. The presence/absence of the bacteriophage
was verified through the spot test (Vieira et al., 2012). Thirty
microliters of the resulting filtrate were inoculated into TSA growth medium
previously inoculated with the bacterial culture. The plates were
incubated at 37 °C for 4–12 h and inspected for zones of clearing. Three
successive single-plaque isolations were performed to obtain a pure
phage stock. All lysates were centrifuged at 10,000 g for 10 min at 4 °C,
to remove intact bacteria and bacterial debris. The phage stocks were
stored at 4 °C and 1% chloroform (Scharlau, Spain) was added. The
phage suspension titer was determined by the double-layer agarmethod
using TSA as culture medium (Adams, 1959). The plates were incubated
at 37 °C for 4–8 h and the number of plaques was counted. The results
were expressed as plaque forming units per milliliter (PFU mL−1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สามฟาจ (VP-1, VP-2 และ VP-3) ที่แยกได้จากทะเล
ตัวอย่างน้ำ (ความเค็ม 18-21; ค่า pH 7.6-7.7) ของการเพาะเลี้ยงสัตว์กึ่งเข้มข้น
(ดินระบบเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำบ่อ Corte das Freiras อยู่ใน
น้ำเค็ม ระบบ Ria de Aveiro ละติจูด: 40 ° 37'51.44 "N, ลองจิจูด
8 ° 40'31.75 "W, บนชายฝั่งตะวันตกเฉียงเหนือของโปรตุเกส) โดยใช้
V. parahaemolyticus เป็นเจ้าภาพ ห้าร้อยมิลลิลิตรของน้ำที่ผ่านการกรอง
ตามลำดับโดย 3 ไมโครเมตรแล้วโดย 0.45 ไมโครเมตรโพลีคาร์บอเนตรูขุมขนขนาด
เยื่อ (คบิลเลริกา, ประเทศสหรัฐอเมริกา) กรองน้ำถูกบันทึกอยู่ใน
500 มล TSB ที่มีความเข้มข้นคู่และ 1 มิลลิลิตรของวัฒนธรรมแบคทีเรีย.
ส่วนผสมที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมงที่ 80 รอบต่อนาทีและ thenfiltered ผ่าน 0.45 ไมโครเมตรเมมเบรน มี / ไม่มี bacteriophage
ได้รับการตรวจสอบผ่านการทดสอบจุด (Vieira et al., 2012) สามสิบ
microliters ของกรองผลถูกเชื้อเข้าสู่กลาง TSA การเจริญเติบโตของ
เชื้อก่อนหน้านี้กับวัฒนธรรมแบคทีเรีย แผ่นได้รับการ
บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4-12 ชั่วโมงและการตรวจสอบสำหรับโซนของสำนักหักบัญชี สาม
Isolations เดียวคราบจุลินทรีย์ได้ดำเนินการต่อเนื่องเพื่อให้ได้ความบริสุทธิ์
หุ้นฟาจ lysates ทั้งหมดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส
เพื่อกำจัดเชื้อแบคทีเรียเหมือนเดิมและเศษซากของแบคทีเรีย หุ้นทำลายจุลินทรีย์ที่ถูก
เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและคลอโรฟอร์ม 1% (Scharlau, สเปน) ถูกเพิ่มเข้ามา
titer ระงับทำลายจุลินทรีย์ที่ถูกกำหนดโดยสองชั้น agarmethod
ใช้ TSA เป็นสื่อวัฒนธรรม (อดัมส์, 1959) แผ่นถูกบ่ม
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4-8 ชั่วโมงและจำนวนโล่นับ ผล
ที่ได้รับแสดงเป็นแผ่นโลหะขึ้นรูปยูนิตต่อมิลลิลิตร (PFU ML-1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 ( vp-1 จ , และ vp-2 vp-3 ) ที่แยกได้จากตัวอย่างน้ำ ทะเล
( ความเค็ม 18 – 21 ; pH 7.6 ( 7.7 ) ของกึ่งเข้มข้น การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ
( บ่อดินเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำระบบ Corte Das Freiras ตั้งอยู่ในระบบน้ำเค็ม Ria de Aveiro
ละติจูด 40 องศา 37 ได้รับณิตคิดเป็นร้อยละเท่ากับ 51.44 เพลงลองจิจูด
8 n ° 40 ’ 31.75 เพลง W , บนชายฝั่งตะวันตกเฉียงเหนือของโปรตุเกส ) ใช้
V parahaemolyticus เป็นเจ้าภาพ500 มิลลิลิตรของน้ำกรอง
ตามลำดับ 3 μ M แล้ว โดยสามารถμ M ขนาดรูแผ่นโพลีคาร์บอเนต
( มิลลิ , ประเทศสหรัฐอเมริกา , อเมริกา ) น้ำกรองเพิ่ม

500 มล. ของ TSB กับสมาธิคู่และ 1 มิลลิลิตรแบคทีเรีย .
ส่วนผสมมีอุณหภูมิ 25 ° C 18 H ที่ 80 รอบต่อนาที และ thenfiltered ผ่าน 0.45 μ M ของเยื่อแผ่นการมี / ไม่มีของแบคเทอริโอเฟจ
ยืนยันผ่านจุดทดสอบ ( วิเอร่า et al . , 2012 ) สามสิบ
ตัวเลขของผลจากการปลูกเชื้อลงในสื่อ TSA
ก่อนหน้านี้ใส่ แบคทีเรีย . จานบ่มที่ 37 ° C )
4 – 12 ชั่วโมงและการตรวจสอบโซนล้าง 3
ต่อเนื่องเดียวจุลินทรีย์ isolations มีการปฏิบัติเพื่อให้ได้เพียว
ว่าหุ้น ทั้งหมด lysates เป็นระดับที่ 10 , 000 G สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ° C ,
ลบแบคทีเรียแบคทีเรียเหมือนเดิมและเศษ ว่าหุ้น
เก็บไว้ที่ 4 ° C และ 1 % คลอโรฟอร์ม ( scharlau , สเปน ) ถูกเพิ่มเข้ามา
ว่าช่วงล่างอิสระถูกกำหนดจากหลากหลาย agarmethod
ใช้เป็นอาหารเลี้ยงเชื้อ TSA ( อดัมส์ , 1959 ) จานถูกบ่ม
ที่ 37 ° C 4 – 8 H และหมายเลขของโล่เป็นนับ ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นรูป
หน่วยต่อมิลลิลิตรจุลินทรีย์ ( พีเอฟยู ml − 1 )