3.4. Acid hydrolysis and sugar anal

3.4. Acid hydrolysis and sugar analysis

Each compound (7 mg) was refluxed in 6% HCl (5.0 mL) at 80 °C for 2 h. The reaction mixture was extracted with CHCl3 (3 × 6 mL), and the H2O phase was dried by using a N2 stream. The residues were separately subjected to silica gel column chromatography with EtOAc–EtOH–H2O (7:4:1) as eluent to yield fucose (1.16 mg) from 1, [α]20D +50.3 (c 0.05, H2O), rhamnose (1.21 mg) from 2, [α]20D +12.6 (c 0.05, H2O), respectively. The solvent system EtOAc–EtOH–H2O (6:4:1) was used for TLC identification of fucose and rhamnose (Liu et al., 2012).

3.5. In vitro aldose reductase assay

Aldose reductase activity was assayed by the method described previously (Nishimura et al., 1991 and Liang et al., 2015). Enzyme activity was spectrophotometrically measured by monitoring the kinetics in the absorbance at 340 nm, which accompanies the oxidation of NADPH catalysed by aldose reductase. The reaction mixture contained 100 mM sodium phosphate buffer, 0.16 mM NADPH, 10 mM dl-glyceraldehyde, with or without Epal/sample solution, in a total volume of 0.1 mL. Reactions were initiated by the addition of enzyme.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.4. กรดไฮโตรไลซ์และน้ำตาลวิเคราะห์แต่ละบริเวณ (7 มิลลิกรัม) ถูก refluxed ใน 6% HCl (5.0 mL) ที่ 80 ° C สำหรับ 2 h ส่วนผสมปฏิกิริยาถูกสกัด ด้วย CHCl3 (3 × 6 มล.), และระยะ H2O ที่แห้ง โดยใช้ลำธาร N2 ตกค้างถูกแยกต่างหากต้องเจลคอลัมน์ chromatography กับ EtOAc – EtOH-เอชทูโอ (7:4:1) เป็น eluent ลดราวาศอก fucose (1.16 mg) 1, [ด้วยกองทัพ] 20 D (c 0.05, H2O), +50.3 (1.21 มิลลิกรัม) rhamnose จาก 2, [ด้วยกองทัพ] 20 D +12.6 (c 0.05, H2O), ตามลำดับ ระบบตัวทำละลาย EtOAc – EtOH-เอชทูโอ (6:4:1) ถูกใช้สำหรับรหัส TLC ของ fucose rhamnose (หลิว et al., 2012)3.5. การเพาะเลี้ยง aldose reductase วิเคราะห์กิจกรรม aldose reductase เป็น assayed โดยวิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Nishimura et al., 1991 และเหลียง et al., 2015) เอนไซม์ spectrophotometrically ที่วัด โดยการตรวจสอบจลนพลศาสตร์ใน absorbance ที่ 340 nm ที่มาพร้อมกับการเกิดออกซิเดชันของ NADPH catalysed โดย aldose reductase ส่วนผสมของปฏิกิริยาอยู่ 100 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ NADPH 0.16 mM, 10 mM dl-glyceraldehyde มี หรือไม่ มีโซลู ชั่น Epal/ตัว อย่าง ปริมาณรวมของ 0.1 มล. ปฏิกิริยาได้เริ่มต้น โดยการเพิ่มของเอนไซม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.4 การย่อยสลายกรดและการวิเคราะห์น้ำตาลแต่ละสารประกอบ (7 มก.) ได้รับการ refluxed ใน 6% HCl (5.0 มิลลิลิตร) ที่ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ผสมปฏิกิริยาถูกสกัดด้วย CHCl3 (3 × 6 มิลลิลิตร) และระยะ H2O ถูกทำให้แห้งโดยใช้กระแส N2 ตกค้างถูกยัดเยียดแยกคอลัมน์ซิลิกาเจลที่มี EtOAc-EtOH-H2O (7: 4: 1) เป็นตัวชะที่จะให้ผลผลิต fucose (1.16 มก.) ตั้งแต่วันที่ 1 [α] 20D 50.3 (ค 0.05, H2O), แรมโนส ( 1.21 มก.) จาก 2 [α] 20D 12.6 (ค 0.05, H2O) ตามลำดับ ระบบตัวทำละลาย EtOAc-EtOH-H2O (6: 4: 1) ถูกนำมาใช้เพื่อระบุตัวตนของ TLC fucose และแรมโนส (Liu et al, 2012).. 3.5 ในหลอดทดลอง aldose ทดสอบ reductase กิจกรรม reductase Aldose ได้รับการวิเคราะห์โดยวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (Nishimura et al., 1991 และเหลียง et al., 2015) กิจกรรมของเอนไซม์วัด spectrophotometrically โดยการตรวจสอบจลนศาสตร์ในการดูดกลืนแสงที่ 340 นาโนเมตรซึ่งมาพร้อมกับการเกิดออกซิเดชันของตัวเร่งปฏิกิริยาโดย NADPH aldose reductase ผสมปฏิกิริยาที่มีอยู่ 100 มิลลิโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์, NADPH 0.16 มิลลิ 10 มิลลิ DL-glyceraldehyde มีหรือไม่มีวิธีการแก้ปัญหา EPAL / ตัวอย่างในปริมาณ 0.1 มิลลิลิตร ปฏิกิริยาถูกริเริ่มโดยการเติมเอนไซม์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.4 . การย่อยน้ำตาลกรดและการวิเคราะห์

แต่ละสารประกอบ ( 7 มก. ) คือ refluxed 6 % HCL ( 5.0 มิลลิลิตรที่อุณหภูมิ 80 องศา C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ปฏิกิริยาที่ผสมสาร chcl3 ( 3 × 6 ml ) และ H2O เฟสก็แห้งโดยใช้ 2 กระแส และได้ถูกแยกภายใต้ซิลิกาเจลคอลัมน์โครมาโทกราฟี ด้วยแอลกอฮอล์ etoac –– H2O ( 7:4:1 ) นี้ทำให้ฟูโคส ( 1.16 มิลลิกรัม ) 1 [ α ] 20d 50.3 ( C ) , H2O )rhamnose ( 1.21 มก. ) จาก 2 , [ α ] 20d 12.6 ( C ) , H2O ) ตามลำดับ ตัวทำละลายและระบบ etoac แอลกอฮอล์– H2O ( 6:4:1 ) ถูกใช้เพื่อกำหนดและมี rhamnose ฟูโคส ( Liu et al . , 2012 ) .

3 . ในหลอดทดลองอัตราผลตอบแทนต่อ

อัตราผลตอบแทนกิจกรรมถูก assayed โดยวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( นิชิ et al . , 1991 และเลี่ยง et al . , 2015 )เอนไซม์นี้เป็นวัดโดยการตรวจสอบจลนศาสตร์ในการดูดกลืนแสงที่ 340 nm ซึ่งมาพร้อมกับการเกิดออกซิเดชันของ nadph catalysed โดยอัตราผลตอบแทน . ปฏิกิริยาผสมที่มีอยู่ 100 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ nadph 0.16 มม. , 10 มม. DL กลีเซอรัลดีไฮด์ มี หรือไม่ มี epal / ตัวอย่างสารละลายในปริมาตร 0.1 มิลลิลิตรปฏิกิริยาที่ถูกริเริ่มโดยการเติมเอนไซม์