Efforts to improve diagnostic perfo

Efforts to improve diagnostic performance of PCR assays cannot rely on improved PCR
detection limits alone because we have already achieved what approaches the maximum
analytical sensitivity with PCR technology, namely single molecule detection. Rather,
improvements in PCR assay performance will rest on a foundation of improvements in sample
manipulation, DNA extraction and target concentration methods prior to the PCR step. This
area of investigation has received little attention despite the great potential to impact diagnostic
performance. For example, a major limitation of fungal PCR is the small volume of DNA added
to each reaction, usually 1–20 μl, and the high proportion of human DNA, leading to limited
sampling of tissues for fungal nucleic acids. If a fungal organism is present at one to two
genomes per ml of blood then it is unlikely to be detected in most PCR assays, but this low
level of fungal DNA may be most informative diagnostically.
Most commercial extraction kits used for fungal PCR diagnostics are designed either for
mammalian cell lysis or for fungal cell lysis from pure cultures. The clinical specimen is
generally a combination of a few fungal cells or their nucleic acids entrapped in relatively large
volumes of tissue or body fluids. Therefore, an ideal extraction method would have high yields
to ensure minimal losses of DNA, the ability to concentrate fungal DNA from the large
background of human DNA, minimal copurification of PCR inhibitors, and reagents that are
compatible with some form of contamination control technology such as UV irradiation or
filtration.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความพยายามที่จะเพิ่มประสิทธิภาพการวินิจฉัยของ PCR assays ไม่พึ่งปรับปรุง PCRตรวจสอบวงเงินเพียงอย่างเดียวเนื่องจากเราได้บรรลุแล้วอะไรยื่นสูงสุดวิเคราะห์ความไว ด้วยเทคโนโลยี PCR เดี่ยวตรวจจับโมเลกุลได้แก่ ค่อนข้างปรับปรุงประสิทธิภาพ PCR assay จะวางตัวบนรากฐานของการปรับปรุงในตัวอย่างจัดการ ดีเอ็นเอเป้าหมายและสกัดเข้มข้นวิธีก่อน PCR ขั้นตอน นี้ตรวจสอบพื้นที่ได้รับความสนใจเพียงเล็กน้อยแม้ มีศักยภาพที่ดีส่งผลกระทบต่อการวินิจฉัยประสิทธิภาพของ ตัวอย่าง ข้อจำกัดหลักของ PCR เชื้อราคือ ปริมาตรเล็ก ๆ ของดีเอ็นเอที่เพิ่มแต่ละปฏิกิริยา ปกติ 1 – 20 μl และสัดส่วนสูงของมนุษย์ DNA นำจำกัดสุ่มตัวอย่างเนื้อเยื่อสำหรับกรดนิวคลีอิกเชื้อรา ถ้ามีชีวิตเชื้อรามีอยู่ที่หนึ่งถึงสองgenomes ต่อมล.ของเลือดแล้วก็ไม่น่าจะพบใน assays PCR ส่วนใหญ่ แต่นี้ต่ำระดับของดีเอ็นเอของเชื้อราอาจได้ข้อมูลมากที่สุด diagnosticallyชุดสกัดส่วนใหญ่ที่ใช้สำหรับวินิจฉัย PCR เชื้อราถูกออกแบบมาสำหรับเซลล์ mammalian lysis หรือ lysis เซลล์เชื้อราจากวัฒนธรรมบริสุทธิ์ สิ่งส่งตรวจทางคลินิกคือโดยทั่วไปการรวมกันของเซลล์กี่เชื้อราหรือกรดนิวคลีอิกการเก็บกักในค่อนข้างมากปริมาณของเนื้อเยื่อหรือของเหลวในร่างกาย ดังนั้น เป็นวิธีการสกัดที่เหมาะจะมีอัตราผลตอบแทนสูงให้สูญเสียน้อยที่สุดของดีเอ็นเอ ความเข้มข้นดีเอ็นเอของเชื้อราจากขนาดใหญ่พื้นหลังของมนุษย์ DNA, copurification น้อยของ PCR inhibitors และ reagents ที่เข้ากันได้กับรูปแบบของเทคโนโลยีการควบคุมการปนเปื้อนเช่นวิธีการฉายรังสี UV หรือกรอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความพยายามที่จะปรับปรุงประสิทธิภาพของชุดตรวจวินิจฉัย PCR ไม่สามารถพึ่งพาการปรับปรุงวิธี PCR
ขีด จำกัด
ของการตรวจสอบเพียงอย่างเดียวเพราะเราได้ประสบความสำเร็จแล้วสิ่งที่แนวทางสูงสุดไววิเคราะห์ด้วยเทคโนโลยีPCR คือการตรวจจับโมเลกุลเดี่ยว แต่การปรับปรุงในการทำงานทดสอบ PCR จะอยู่บนพื้นฐานของการปรับปรุงในตัวอย่างการจัดการการสกัดดีเอ็นเอและวิธีการเข้มข้นเป้าหมายก่อนที่จะมีขั้นตอนวิธีPCR นี้พื้นที่ของการตรวจสอบที่ได้รับความสนใจน้อยแม้จะมีศักยภาพที่จะส่งผลกระทบต่อการวินิจฉัยประสิทธิภาพ ยกตัวอย่างเช่นข้อ จำกัด ที่สำคัญของ PCR เชื้อราเป็นปริมาณดีเอ็นเอเพิ่มให้กับแต่ละปฏิกิริยามัก1-20 ไมโครลิตรและสัดส่วนที่สูงของดีเอ็นเอของมนุษย์นำไปสู่การ จำกัดการสุ่มตัวอย่างของเนื้อเยื่อกรดนิวคลีอิกของเชื้อรา ถ้าสิ่งมีชีวิตเชื้อราเป็นปัจจุบันที่ 1-2 จีโนมต่อมิลลิลิตรเลือดแล้วมันไม่น่าจะถูกตรวจพบมากที่สุดในการตรวจ PCR แต่ต่ำระดับดีเอ็นเอของเชื้อราอาจจะมีข้อมูลมากที่สุด diagnostically. ส่วนใหญ่ชุดสกัดในเชิงพาณิชย์ที่ใช้สำหรับการวินิจฉัย PCR เชื้อรา ได้รับการออกแบบทั้งสลายเซลล์ที่เลี้ยงลูกด้วยนมหรือสลายเซลล์เชื้อราจากวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ ตัวอย่างทางคลินิกโดยทั่วไปการรวมกันของเซลล์เชื้อราไม่กี่หรือกรดนิวคลีอิกของพวกเขาเก็บกักในที่ค่อนข้างใหญ่ปริมาณของของเหลวหรือเนื้อเยื่อของร่างกาย ดังนั้นวิธีการสกัดที่เหมาะจะมีอัตราผลตอบแทนที่สูงเพื่อให้แน่ใจว่าการสูญเสียน้อยที่สุดของดีเอ็นเอความสามารถในการที่จะมีสมาธิดีเอ็นเอของเชื้อราจากขนาดใหญ่พื้นหลังของดีเอ็นเอมนุษย์copurification น้อยที่สุดของสารยับยั้ง PCR และสารเคมีที่มีความเข้ากันได้กับรูปแบบของเทคโนโลยีการควบคุมการปนเปื้อนดังกล่าวบางส่วนขณะที่การฉายรังสี UV หรือกรอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความพยายามที่จะปรับปรุงประสิทธิภาพการวินิจฉัยของ PCR ) ไม่สามารถพึ่งพาการตรวจหา PCR
ปรับปรุงจำกัด คนเดียว เพราะเราบรรลุสิ่งที่ วิธีวิเคราะห์ความไวสูงสุด
เทคโนโลยีโมเลกุลเดี่ยวด้วย PCR คือการตรวจหา การปรับปรุงประสิทธิภาพการทดสอบค่อนข้าง
PCR จะพักผ่อนบนพื้นฐานของการปรับปรุงในตัวอย่าง
จัดการการสกัดดีเอ็นเอและเป้าหมายวิธีสมาธิก่อนที่จะเพิ่มขั้นตอน พื้นที่นี้
สืบสวนได้รับความสนใจน้อย แม้จะมีศักยภาพสูงที่จะกระทบต่อประสิทธิภาพในการวินิจฉัย

ตัวอย่างเช่น ข้อจำกัดที่สำคัญของเชื้อราซึ่งเป็นปริมาณขนาดเล็กของดีเอ็นเอเพิ่ม
แต่ละปฏิกิริยา โดยปกติ 1 – 20 μแอลและสูงสัดส่วนของดีเอ็นเอของมนุษย์ไปสู่
จำกัดตัวอย่างเนื้อเยื่อสำหรับเชื้อรา กรดนิวคลีอิก ถ้าสิ่งมีชีวิตเชื้อราที่มีอยู่ในหนึ่งถึงสอง
หาต่อมิลลิลิตรเลือดแล้วมันไม่น่าจะพบในวิธี PCR มากที่สุด แต่นี้ระดับต่ำ
ที่มีดีเอ็นเออาจเป็นข้อมูลมากที่สุด diagnostically .
การสกัดพาณิชย์ชุดส่วนใหญ่ใช้สำหรับการวินิจฉัยเชื้อราซึ่งถูกออกแบบมาสำหรับการสลายเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมด้วย
หรือการสลายเซลล์ เชื้อราจากเชื้อบริสุทธิ์ตัวอย่างคลินิก
มักจะรวมกันของเซลล์เชื้อราตรึงในไม่กี่หรือกรดนิวคลีอิกปริมาณของค่อนข้างใหญ่
เนื้อเยื่อหรือของเหลวในร่างกาย . ดังนั้น วิธีการสกัดที่เหมาะจะได้ผลผลิตสูง เพื่อให้ขาดทุนน้อยที่สุด
ดีเอ็นเอ , ความสามารถในการมีสมาธิของดีเอ็นเอจากพื้นหลังขนาดใหญ่
DNA ของมนุษย์ copurification น้อยที่สุดของ PCR inhibitors และ สารเคมีที่
เข้ากันได้กับบางรูปแบบของการควบคุมการปนเปื้อนเทคโนโลยี เช่น UV รังสีหรือ
การกรอง