Immunohistochemical and histopathol

Immunohistochemical and histopathological analysis. Frozen 4-m sections
were mounted onto electrostatically charged glass slides (SuperFrost Plus; Fisher
Scientific, Worcester, MA) and fixed for 10 min in acetone at 20°C. Thereafter,
the slides were kept at 70°C for up to 8 weeks, until they were stained. For
immunostaining, the slides were incubated with the following primary antibodies:
mouse monoclonal antibody (MAb) anti-porcine SLA-II (AbD Serotec, Raleigh,
NC), mouse MAb anti-porcine CD172 (Southern Biotech, Birmingham, AL),
mouse MAb anti-porcine CD1 (Southern Biotech), mouse anti-human iNOS
(BD Bioscience, Franklin Lakes, NJ), and mouse MAb anti-human Mx1 (kindly
provided by Otto Haller, University of Freiburg), which labels porcine Mx1
protein (30). The bound primary antibodies were detected by the avidin-biotinperoxidase
complex technique (Vectastain ABC Kit Elite; Vector, Burlingame,
CA) according to the manufacturer’s instructions and developed either with
3,3-diaminobenzidine (Dako, Glostrup, Denmark) or Fast Red TR/naphthol
(Sigma, St. Louis, MO). Slides were counterstained with Harry’s hematoxylin and
coverslipped by using routine methods. To control the specificity of antibody
binding, a duplicate negative control serial section treated with nonspecific primary

antibody was used. The positive cells were counted in 10 consecutive fields
of 1 mm2 each per slide. Means and standard deviations of the numbers of
labeled cells were calculated, and differences were tested for significance.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Immunohistochemical และการวิเคราะห์ histopathological แช่แข็งส่วน 4 mถูกติดตั้งลงบนสไลด์แก้ว electrostatically คิดค่าธรรมเนียม (SuperFrost บวก ฟิชเชอร์วิทยาศาสตร์ วูสเตอร์ MA) และคงที่สำหรับในอะซีโตนที่ 20 องศาเซลเซียส 10 นาที หลังจากนั้นภาพนิ่งที่ถูกเก็บไว้ที่ 70° C ถึง 8 สัปดาห์ จนกว่าจะได้สี สำหรับimmunostaining ภาพนิ่งถูก incubated กับการแอนตี้หลักต่อไปนี้:เมาส์ monoclonal แอนติบอดี (มาบ) ช่วงต่อต้าน SLA-II (AbD Serotec ราลีNC), เมาส์ CD172 ต้านช่วงมาบ (ไบโอเทคภาคใต้ เบอร์มิงแฮม AL),เมาส์มาบช่วงต่อต้าน CD1 (ใต้เทคโนโลยีชีวภาพ), เมาส์ iNOS ป้องกันมนุษย์(ซื้อ BD แฟรงคลินทะเลสาบ NJ), และเมาส์ (กรุณา Mx1 ป้องกันบุคคลมาบโดยออทโท Haller มหาวิทยาลัย Freiburg), ซึ่งป้ายช่วง Mx1โปรตีน (30) ตรวจพบแอนตี้หลักที่ผูกไว้ โดย avidin-biotinperoxidaseเทคนิคที่ซับซ้อน (Vectastain ABC ชุด Elite เวกเตอร์ เบอร์ลินเกมCA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต และพัฒนาอย่างใดอย่างหนึ่งด้วย3,3 - diaminobenzidine (Dako กลอสทรัป เดนมาร์ก) หรือ TR/naphthol แดงอย่างรวดเร็ว(ซิก St. Louis, MO) ภาพนิ่งถูก counterstained กับ hematoxylin แฮร์รี่ และcoverslipped โดยใช้วิธีการตามปกติ การควบคุม specificity ของแอนติบอดีผูก ควบคุมลบซ้ำส่วนประจำรับ nonspecific หลักใช้แอนติบอดี เซลล์บวกนับได้ในฟิลด์ 10 ติดต่อกันของ 1 มม 2 ได้ภายละนิ่ง วิธีการและส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของจำนวนมีคำนวณเซลล์ป้าย และทดสอบความแตกต่างในความสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ทางจุลพยาธิวิทยาและ Immunohistochemical ? แช่แข็ง 4
เมตรส่วนที่ได้รับการติดตั้งลงบนประจุไฟฟ้าสไลด์แก้ว(SuperFrost พลัส;
ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์, Worcester, MA) และคงเป็นเวลา 10 นาทีในอะซีโตนที่ 20 ° C? หลังจากนั้นภาพนิ่งที่ถูกเก็บไว้ที่ 70 องศาเซลเซียสได้นานถึง 8 สัปดาห์จนกว่าพวกเขาจะมีการย้อม
สำหรับ
immunostaining, ภาพนิ่งถูกบ่มกับแอนติบอดีหลักต่อไปนี้:
แอนติบอดีเมาส์ (แอนติบอดี) ป้องกันสุกร SLA-II (ABD Serotec, ราลี,
NC) แอนติบอดีเมาส์ต่อต้านสุกร CD172 (ภาคใต้ไบโอเทค, เบอร์มิงแฮม, AL)
เมาส์ แอนติบอดีต่อต้านสุกร CD1 (ภาคใต้ไบโอเทค) เมาส์ต่อต้านมนุษย์ iNOS
(BD ชีววิทยาศาสตร์แฟรงคลินเลคส์, นิวเจอร์ซีย์) และเมาส์แอนติบอดี MX1 ต่อต้านมนุษย์
(กรุณาให้โดยอ็อตโตฮาลเลอร์, มหาวิทยาลัยฟรี) ซึ่งป้ายหมู MX1
โปรตีน ( 30) แอนติบอดีหลักที่ถูกผูกไว้ถูกตรวจพบโดย avidin-biotinperoxidase
เทคนิคที่ซับซ้อน (Vectastain เอบีซีชุดยอด; เวกเตอร์, เบอร์ลิน,
CA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตและพัฒนาทั้งที่มี
3,3 -diaminobenzidine (Dako, Glostrup, เดนมาร์ก) หรือสีแดงได้อย่างรวดเร็ว? TR / naphthol
(Sigma, เซนต์หลุยส์) ภาพนิ่งถูก counterstained hematoxylin กับแฮร์รี่และ
coverslipped โดยใช้วิธีการประจำ เพื่อควบคุมความจำเพาะของแอนติบอดีที่มีผลผูกพันการควบคุมเชิงลบที่ซ้ำกันส่วนอนุกรมรับการรักษาด้วยหลักเชิญชมแอนติบอดีถูกนำมาใช้ เซลล์บวกนับ 10 สาขาต่อเนื่องกัน1 mm2 ละสไลด์ วิธีการและค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานของตัวเลขของเซลล์ที่มีข้อความจะถูกคำนวณและความแตกต่างได้รับการตรวจอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และการวิเคราะห์ในทาง . แช่แข็ง 4 -  M ส่วน
ติดบนกระจกสไลด์ ( superfrost electrostatically ประจุบวก ฟิชเชอร์
ทางวิทยาศาสตร์ , Worcester , MA ) และการแก้ไขสำหรับ 10 นาที ) ที่  20 องศา หลังจากนั้น
สไลด์ไว้ที่  70 องศา C นานถึง 8 สัปดาห์ จนเปรอะเปื้อน สำหรับ
immunostaining , ภาพนิ่งถูกบ่มกับแอนติบอดีหลักต่อไปนี้ :
โมโนโคลนอล แอนติบอดี ( แอนติบอดี ) sla-ii anti เลือดหมู ( อับดุล serotec Raleigh , NC ,
) , เมาส์มาบ cd172 anti เลือดหมู ( ภาคใต้ ไบโอเทค เบอร์มิงแฮม , อัล )
เมาส์มาบ CD1 anti เลือดหมู ( Biotech ภาคใต้ ) , เมาส์ต่อต้านมนุษย์ inos
( BD วิทยาศาสตร์ชีวภาพ Franklin Lakes , NJ ) , และเมาส์มาบ mx1 ต่อต้าน มนุษย์ ( กรุณา
โดย อ๊อตโต้ ลเลอร์ มหาวิทยาลัย Freiburg ) ซึ่งฉลากโปรตีน mx1
เลือดหมู ( 30 )ผูกที่หลักและถูกตรวจพบโดยวิดิน biotinperoxidase
ซับซ้อนเทคนิค ( vectastain เอบีซีชุดอีลิทเวกเตอร์ , เทลอาวีฟ ,
; CA ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต และพัฒนาให้กับ 
3 , 3 - diaminobenzidine ( ทางหนึ่ง , Glostrup เดนมาร์ก ) หรือเร็ว
TR / naphthol สีแดง ( Sigma , St . Louis , MO ) ภาพนิ่งเป็น counterstained กับแฮร์รี่ย้อมและ
coverslipped โดยใช้วิธีตามปกติ การควบคุมเฉพาะแอนติบอดี
ผูกซ้ำลบควบคุมอนุกรมส่วนที่ได้รับการติดเชื้อปฐมภูมิ

แอนติบอดีที่ใช้ เซลล์บวกถูกนับใน 10 ติดต่อกันสาขา
1 แน่นแต่ละต่อสไลด์ ค่าเฉลี่ย และส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของตัวเลขของ
ติดป้ายเซลล์ได้ และความแตกต่าง ทดสอบนัยสำคัญทางสถิติ