Specificity assays To evaluate the

Specificity assays
To evaluate the specificity of primers used in the study, each DNA template prepared from the thirty-two strains was tested using a mixture of all pairs of primers. Also, DNA extracts of each pathogen from five target microorganisms mixed or tested separately were tested by the m-PCR assay.
Sensitivity assays
The sensitivity of the m-PCR assay was tested using serial dilutions of each bacterial culture prepared from overnight cultures in TSB. Each target pathogen was decimally diluted (109, 108, 107, 106, 105, 104, 103, 102, 10,10 cfu/ mL) in sterile saline. DNA was isolated from 1 mL of each dilution and subsequently tested using the multiplex PCR method. Each sampling experiment consisted of triplicate tests with two replicates (each experiment with two replicates at different time intervals).
Evaluation of efficiency
For simultaneous detection of the five target pathogens,evaluation of the efficiency of the m-PCR was carried out using DNA template solution including a mixture having the same volume of DNA extract from each target pathogen.
The m-PCR was developed, as described above on the mixture of DNA extracts from the five pathogens, and
compared to the same test checked on the individual pathogens.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Specificity assays ประเมิน specificity ของไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษา แต่ละต้นดีเอ็นเอที่เตรียมจากสายพันธุ์สามสิบสองถูกทดสอบโดยใช้ส่วนผสมของคู่ไพรเมอร์ทั้งหมด ยัง ดีเอ็นเอแยกของแต่ละการศึกษาจากเป้าหมาย 5 ทดสอบจุลินทรีย์ผสม หรือทดสอบแยกต่างหากตามวิเคราะห์ m-PCR Assays ไว ความไวของการทดสอบ m PCR ถูกทดสอบใช้ dilutions ประจำของแต่ละวัฒนธรรมแบคทีเรียที่เตรียมจากวัฒนธรรมค้างคืนใน TSB ศึกษาเป้าหมายแต่ละ decimally ถูกทำให้เจือจาง (109, 108, 107, 106, 105, 104, 103, 102, 10, 10 cfu / mL) ในน้ำเกลือฆ่าเชื้อ ดีเอ็นเอแยกต่างหากจาก 1 mL ของแต่ละการเจือจาง และภายหลังทดสอบโดยใช้วิธีการ multiplex PCR การทดลองสุ่มแต่ละประกอบด้วยการทดสอบ triplicate (แต่ละทดลองกับสองเหมือนกับในช่วงเวลาที่แตกต่างกัน) เหมือนกับสอง การประเมินประสิทธิภาพ ตรวจโรคเป้าหมายห้าพร้อม การประเมินประสิทธิภาพของ m-PCR ถูกดำเนินการโดยใช้ดีเอ็นเอแม่แบบโซลูชั่นรวมถึงส่วนผสมที่มีไดรฟ์ข้อมูลเดียวกันของดีเอ็นเอแยกจากแต่ละการศึกษาเป้าหมายM-PCR ได้รับการพัฒนา ตามที่อธิบายไว้ข้างบนส่วนผสมของสารสกัดจาก DNA โรคห้า และเมื่อเทียบกับการทดสอบเดียวกันที่ถูกกับโรคแต่ละ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจความจำเพาะ
ในการประเมินความจำเพาะของไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษาแต่ละแม่แบบดีเอ็นเอที่เตรียมจากสามสิบสองสายพันธุ์ที่ได้รับการทดสอบโดยใช้ส่วนผสมของคู่ของไพรเมอร์ นอกจากนี้สารสกัดดีเอ็นเอของเชื้อโรคแต่ละชนิดจากห้าเป้าหมายจุลินทรีย์ผสมหรือแยกการทดสอบได้รับการทดสอบโดย M-PCR ทดสอบ.
ความไวการตรวจ
ความไวของการทดสอบ M-PCR ได้รับการทดสอบโดยใช้เจือจางอนุกรมของวัฒนธรรมแต่ละแบคทีเรียที่เตรียมจากวัฒนธรรมค้างคืนใน TSB เชื้อโรคแต่ละเป้าหมายถูกเจือจาง decimally (109, 108, 107, 106, 105, 104, 103, 102, 10, 10 โคโลนี / มิลลิลิตร) ในน้ำเกลือปลอดเชื้อ ดีเอ็นเอที่แยกได้จาก 1 มิลลิลิตรของแต่ละเจือจางและทดสอบต่อมาโดยวิธี PCR Multiplex ทดลองสุ่มตัวอย่างในแต่ละการทดสอบเพิ่มขึ้นสามเท่าด้วยซ้ำสอง (แต่ละการทดลองกับสองซ้ำในช่วงเวลาที่แตกต่างกัน).
การประเมินผลที่มีประสิทธิภาพ
สำหรับการตรวจสอบพร้อมกันของห้าเชื้อโรคเป้าหมายการประเมินประสิทธิภาพของ M-PCR ได้ดำเนินการแก้ปัญหาโดยใช้แม่แบบดีเอ็นเอ รวมทั้งมีส่วนผสมที่มีปริมาณเดียวกันของสารสกัดดีเอ็นเอจากแต่ละเชื้อโรคเป้าหมาย.
M-PCR ได้รับการพัฒนาตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในส่วนผสมของสารสกัดดีเอ็นเอจากห้าเชื้อโรคและ
เมื่อเทียบกับการทดสอบเดียวกันตรวจสอบเชื้อโรคแต่ละบุคคล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตรวจประเมินความจำเพาะ
ไพรเมอร์ที่ใช้ในการศึกษาแต่ละดีเอ็นเอแม่แบบที่เตรียมจาก 32 สายพันธุ์ถูกทดสอบโดยใช้ส่วนผสมของทุกคู่ของไพรเมอร์ . นอกจากนี้ ดีเอ็นเอที่สกัดจากเชื้อจุลินทรีย์ผสมกันจากห้าเป้าหมายหรือทดสอบแยกทดสอบโดย m-pcr ตามลำดับ

ใช้ความไวความไวของการทดสอบถูกทดสอบโดยใช้วิธีการ m-pcr อนุกรมของแบคทีเรียแต่ละวัฒนธรรมที่เตรียมจากวัฒนธรรมพักค้างคืนใน TSB . แต่ละเชื้อโรคเป้าหมาย decimally เจือจาง ( 109 , 107 , 108 , 106 , 105 , 104 , 103 , 102 , 10 , 10 CFU / ml ) ในน้ำเกลือปลอดเชื้อ . ดีเอ็นเอที่แยกได้จาก 1 มิลลิลิตรของแต่ละการเจือจางและต่อมาทดสอบโดยใช้วิธี PCR มัลติเพล็กซ์ Each sampling experiment consisted of triplicate tests with two replicates (each experiment with two replicates at different time intervals).
Evaluation of efficiency
For simultaneous detection of the five target pathogens,evaluation of the efficiency of the m-PCR was carried out using DNA template solution including a mixture having the same volume of DNA extract from each target pathogen.
The m-PCR was developed, as described above on the mixture of DNA extracts from the five pathogens, and
compared to the same test checked on the individual pathogens.